ELISA檢測乙肝抗體

ELISA檢測乙肝抗體組員：李家成（1520150102）林其聰（1520150103）付強(qiáng)（1520150104）鄭海軍（1520150105）管汝（1420151143）分工匯報：林其聰PPT制作：李家成，付強(qiáng)ELISA檢測乙肝抗體肝表面抗體ELISA檢測實驗?zāi)康?.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶標(biāo)儀的使用方法。細(xì)胞1細(xì)胞2標(biāo)記物分類熒光素放射性核素酶

用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)?？捎妹笜?biāo)測定儀測定光密度(OD）來反應(yīng)抗原或抗體含量，靈敏度可達(dá)到ng—pg/ml。細(xì)胞1標(biāo)記物DH２+H２O２D+2H2O

酶具有高效催化性：可加快化學(xué)反應(yīng)的速率；在反應(yīng)前后沒有質(zhì)和量的改變；微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用酶聯(lián)免疫吸附試驗-ELISAELISA是一種免疫測定（immunoassay，IA）。抗原或者抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記：加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物；產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。酶聯(lián)免疫吸附實驗—ELISA實驗原理抗原或抗體吸附到固體相載體表面后，以及抗原抗體與酶連接后，仍保持免疫活性和酶活性，當(dāng)酶遇到相應(yīng)第底物時，在酶的催化下引起底物水解顯色。產(chǎn)物的量與標(biāo)體中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法有三個必要的試劑：（1）免疫吸附劑（2）結(jié)合物（3）酶反應(yīng)的底物ELISA的類型間接法（測抗體）雙抗體夾心發(fā)（測大分子抗原）競爭發(fā)（測小分子抗原）競爭法

用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和待測抗原的混合液，而另一組加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差即為所要測定的未知抗原的量。

這種方法所測定的抗原只有一個結(jié)合部位就可，因此，對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點(diǎn)就是快，因此只有一個保溫洗滌過程，但常需用較多的酶標(biāo)記抗原。操作步驟1.從冰箱取出試劑盒，室溫平衡30分鐘。2.按如下方式加待測血清，每孔1滴。3.每孔加酶結(jié)合物1滴（孔上方懸空滴加，無氣泡），混勻，空白孔不加，置37度溫箱30分鐘。4.取出反應(yīng)板，棄液，拍干。5.每孔注滿洗條液，（不要溢出）靜置5秒后棄液，拍干，重復(fù)洗條5次，拍干。6.每孔加顯色劑A和B