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文檔簡介
ELISA檢測乙肝抗體組員:李家成(1520150102)林其聰(1520150103)付強(1520150104)鄭海軍(1520150105)管汝(1420151143)分工匯報:林其聰PPT制作:李家成,付強ELISA檢測乙肝抗體肝表面抗體ELISA檢測實驗目的1.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶標儀的使用方法。細胞1細胞2標記物分類熒光素放射性核素酶
用酶標記的抗原或抗體進行的抗原抗體反應。可用酶標測定儀測定光密度(OD)來反應抗原或抗體含量,靈敏度可達到ng—pg/ml。細胞1標記物DH2+H2O2D+2H2O
酶具有高效催化性:可加快化學反應的速率;在反應前后沒有質和量的改變;微量的酶便可發(fā)揮巨大的催化作用酶聯(lián)免疫吸附試驗-ELISAELISA是一種免疫測定(immunoassay,IA)??乖蛘呖贵w的固相化及抗原或抗體的酶標記:加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物;產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,由此進行定性或定量分析。酶聯(lián)免疫吸附實驗—ELISA實驗原理抗原或抗體吸附到固體相載體表面后,以及抗原抗體與酶連接后,仍保持免疫活性和酶活性,當酶遇到相應第底物時,在酶的催化下引起底物水解顯色。產物的量與標體中受檢物質的量直接相關,故可根據(jù)顏色反應的深淺進行定性或定量分析。
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法有三個必要的試劑:(1)免疫吸附劑(2)結合物(3)酶反應的底物ELISA的類型間接法(測抗體)雙抗體夾心發(fā)(測大分子抗原)競爭發(fā)(測小分子抗原)競爭法
用于抗原和半抗原的定量測定,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體表面,經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和待測抗原的混合液,而另一組加酶標記抗原,再經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差即為所要測定的未知抗原的量。
這種方法所測定的抗原只有一個結合部位就可,因此,對小分子抗原如激素和藥物之類的測定常用此法。該法的優(yōu)點就是快,因此只有一個保溫洗滌過程,但常需用較多的酶標記抗原。操作步驟1.從冰箱取出試劑盒,室溫平衡30分鐘。2.按如下方式加待測血清,每孔1滴。3.每孔加酶結合物1滴(孔上方懸空滴加,無氣泡),混勻,空白孔不加,置37度溫箱30分鐘。4.取出反應板,棄液,拍干。5.每孔注滿洗條液,(不要溢出)靜置5秒后棄液,拍干,重復洗條5次,拍干。6.每孔加顯色劑A和B
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