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分子總結(jié)資料范文 第1-2章 1、分子生物學(xué)的定義、發(fā)展簡史和研究內(nèi)容。 從分子水平研究生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能從而闡明生命現(xiàn)象本質(zhì)的科學(xué)，主要指遺傳信息的傳遞（復(fù)制）、保持（損傷和修復(fù)）、基因的表達(dá)（轉(zhuǎn)錄和翻譯）與調(diào)控孕育階段（18201950年代）1865年，孟德爾發(fā)表了他的植物雜交實(shí)驗(yàn)一文，首次闡述了生物界有規(guī)律的遺傳現(xiàn)象。 “遺傳因子”1900年，孟德爾遺傳規(guī)律被證實(shí)，成為近代遺傳學(xué)基礎(chǔ)。 1910年，Morgan的染色體基因遺傳理論，Gene存在于染色體上。 進(jìn)一步將“性狀”與“基因”相耦聯(lián)，成為現(xiàn)代遺傳學(xué)的奠基石。 1944年，美國微生物學(xué)家Avery證明基因就是DNA分子，提出DNA是遺傳信息的載體。 1957年，Heinz Fraenkel-Conrat和B.Singre的雜合病毒實(shí)驗(yàn)1953年，美國科學(xué)家Watson和英國科學(xué)家Crick提出DNA DoubleHelix model1958年Crick提出中心法則。 1958年，Meselson和Stahl證明DNA半保留復(fù)制。 半保留復(fù)制是遺傳消息能準(zhǔn)確傳代的保證。 是物質(zhì)穩(wěn)性的分子基礎(chǔ)。 1961年，法國科學(xué)家Jacob（雅各布）和Monod（莫諾）提出操縱子學(xué)說（第六章）1968年，Nirenberg、Holley和Khorana解讀了遺傳密碼及其在蛋白質(zhì)合成方面的技能而分享諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。 1983年，美國遺傳學(xué)家McClintoc因發(fā)現(xiàn)可移動的遺傳因子而獲得諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)1989年Altman、Cech發(fā)現(xiàn)核酶（Ribozyme,某些RNA具有酶的功能）獲Nobel化學(xué)獎(jiǎng)。 基因與基因組的結(jié)構(gòu)與功能DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄與翻譯基因表達(dá)與調(diào)控DNA重組技術(shù)（基因工程）生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能研究(結(jié)構(gòu)分子生物學(xué) 2、DNA組成和結(jié)構(gòu)DNA的一級結(jié)構(gòu):就是指4種核苷酸的連接及其排列順序，表示了該DNA分子的化學(xué)構(gòu)成。 核苷酸序列對DNA高級結(jié)構(gòu)的形成有很大影響。 1、DNA分子是由兩條互相平行的脫氧核苷酸長鏈盤繞而成的。 2、DNA分子中的脫氧核糖和磷酸交替連接，排在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架，堿基排列在內(nèi)側(cè)。 3、兩條鏈上的堿基通過氫鍵相結(jié)合，形成堿基對，它的組成有一定的規(guī)律。 這就是嘌呤與嘧啶配對，而且腺嘌呤（A）只能與胸腺嘧啶（T）配對，鳥嘌呤（G）只能與胞嘧啶（C）配對。 組成DNA分子的堿基雖然只有4種，它們的配對方式也只有A與T，C與G兩種，但是，由于堿基可以任何順序排列，構(gòu)成了DNA分子的多樣性。 5、用實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證核小體是染色體的基本結(jié)構(gòu)單位？答用微量的微球菌核酸酶處理染色質(zhì)，DNA按一定的距離被切斷，染色質(zhì)存在有一種規(guī)律性的抗核酸酶的形式，在凝膠電泳中發(fā)現(xiàn)長度為最小單位的2倍、3倍、4倍等，說明染色質(zhì)呈現(xiàn)有規(guī)律的重復(fù)性結(jié)構(gòu)單元，每個(gè)重復(fù)單位包括200bp左右的DNA和一套組蛋白分子。 而這個(gè)單位就是核小體。 核小體與DNA是怎樣包裝主城染色質(zhì)及至染色體結(jié)構(gòu)的？答4種組蛋白以八聚體形式形成核心顆粒，DNA纏繞在顆粒表面形成核小體，多個(gè)核小體形成串珠鏈，串珠鏈，繞成每圈6個(gè)核小體的中空螺線管的微纖絲，微纖絲與多種非組蛋白結(jié)合形成的突環(huán)，每個(gè)突環(huán)含有若干功能相關(guān)基因，6個(gè)突環(huán)形成一個(gè)玫瑰花結(jié)狀結(jié)構(gòu)，組裝成每圈30個(gè)玫瑰花結(jié)的螺旋圈，由10個(gè)螺旋圈再組裝成一個(gè)染色單體。 即核小體螺旋串珠鏈微絲結(jié)構(gòu)玫瑰花狀結(jié)構(gòu)螺旋圈染色單體 8、染色體蛋白質(zhì)有哪兩大類，兩著之間有什么不同。 染色體上的蛋白質(zhì)包括組蛋白和非組蛋白。 組蛋白是染色體的結(jié)構(gòu)蛋白，它與DNA組成核小體。 通?？梢杂?mol/L NaCl或0.25mol/L的HCl/H2SO4處理使組蛋白與DNA分開。 組蛋白分為H 1、H2A、H2B、H3及H4。 這些組蛋白都含有大量的賴氨酸和精氨酸，其中H 3、H4富含精氨酸，H1富含賴氨酸；H2A、H2B介于兩者之間。 組蛋白的一般特性1.進(jìn)化上的極端保守性。 2.無組織特異性。 3.肽鏈上氨基酸分布的不對稱性。 4.組蛋白的修飾作用。 非組蛋白的一般特性1.非組蛋白的多樣性2，非組蛋白的組織專一性和種屬專一性。 第三章 1、怎樣證實(shí)DNA復(fù)制是半保留復(fù)制答1958年，Melson和Stahl利用同位素標(biāo)記和密度梯度離心實(shí)驗(yàn)，具體133頁 7、為什么真核生物DNA的復(fù)制比大腸桿菌的更為復(fù)雜？真核生物的origin ofreplication被稱為ARS-autonomously replicatingsequences或者被稱為replicators。 Yeast replicators長約150bp，有多個(gè)保守重復(fù)區(qū)，共有約400個(gè)replicators分布于酵母的17條染色體中。 8、生物怎樣解決DNA復(fù)制時(shí)出現(xiàn)的末端問題？ 1、轉(zhuǎn)為環(huán)狀 2、形成發(fā)夾結(jié)構(gòu) 3、形成端粒結(jié)構(gòu) 4、末端蛋白的參與第四章 2、誘發(fā)突變產(chǎn)生的機(jī)制。 一、堿基類似物能與互補(bǔ)鏈上的堿基生成H鍵配對，DNA聚合酶的校對功能不能察覺。 經(jīng)常發(fā)生酮式和烯醇式的互變異構(gòu)，在復(fù)制子代時(shí)引起配對性質(zhì)的改變 二、DNA分子上堿基的化學(xué)修飾亞硝酸可以在pH5的緩沖溶液中通過氧化作用，以氧代替腺嘌呤和胞嘧啶C6位置上的氨基，使腺嘌呤和胞嘧啶變成次黃嘌呤和尿嘧啶烷化劑如甲基磺酸甲酯(NMS)烷化劑可將烷基(如甲基)加入到核酸上各種位點(diǎn)O6甲基鳥嘌呤可與T配對 三、嵌合劑的致突變作用嵌合劑可以嵌合到DNA堿基對之間，使原來相鄰的堿基對分開一定的距離。 使其在復(fù)制中引入一個(gè)新的堿基或缺失一個(gè)堿基，引起閱讀框的改變。 如吖啶類染料分子吖啶橙、原黃素等 四、轉(zhuǎn)座成分的致突變作用 五、增變基因增變基因的突變引起整個(gè)基因組突變率的明顯上升。 如編碼DNA聚合酶的各個(gè)基因，和修復(fù)相關(guān)酶的基因。 六、紫外線和高能射線的致突變作用 七、突變熱點(diǎn)形成突變熱點(diǎn)的最主要的原因是5甲基胞嘧啶的存在。 CU的錯(cuò)誤可由尿嘧啶糖基酶系統(tǒng)修復(fù)；CMeT的錯(cuò)誤，修復(fù)系統(tǒng)的修復(fù)效率較低。 第五章 2、同源重組的酶學(xué)機(jī)制是怎樣的？ 1、chi位點(diǎn)和RecBCD核酸酶在噬菌體的一些突變種內(nèi)，存在一些稱為chi的位點(diǎn)。 chi位點(diǎn)單一的堿基對的改變即可激發(fā)重組的發(fā)生。 這些位點(diǎn)皆含有一個(gè)恒定的非對稱的8bp序列5GCTGGTGC33CGACCACC5這些位點(diǎn)存在于大腸桿菌的DNA中，并且在每5-10kb長的序列中就出現(xiàn)一次。 Chi位點(diǎn)是一個(gè)由基因recBCD編碼的Rec BCD酶作用的靶部位。 RecBCD酶是一種多功能酶，具有幾種不同的活性。 它是一個(gè)強(qiáng)有力的降解DNA的核酸酶，早期被檢定為活性核酸外切酶V，具有解旋酶的活性。 RecBCD所介導(dǎo)的解旋和切割可以被用來產(chǎn)生末端，并引發(fā)異源雙鏈的形成。 2、RecA和Holliday連接體的形成RecA具有兩種相當(dāng)不同的活性:RecA可以促進(jìn)單鏈DNA與其在雙鏈DNA分子中互補(bǔ)的DNA鏈的堿基相配對。 RecA還可以在SOS反應(yīng)中激活蛋白酶。 RecA需要單鏈DNA和ATP才能激活蛋白酶RecA能夠利用由RecBCD在Chi位點(diǎn)附近切割所釋放的單鏈3末端。 RecA的DNA操作酶活性可以使一個(gè)單鏈DNA與雙螺旋中的同源序列發(fā)生置換，這一反應(yīng)被稱為單鏈攝取(single-strand uptake)或單鏈同化(single-strand assimilation 3、Ruv蛋白和Holliday連接體的拆分大腸桿菌有一組由三個(gè)基因編碼與隨后的重組相關(guān)聯(lián)的蛋白。 ruvA和ruvB基因的產(chǎn)物促進(jìn)異源雙鏈的形成。 Ruv A蛋白可以識別Holliday連接體的結(jié)構(gòu)，Ruv B是一個(gè)腺苷三磷酸酶并可能提供支鏈遷移的動力。 Ruv A在交叉點(diǎn)處與DNA所有的4條鏈相結(jié)合，在交叉點(diǎn)的上游，兩個(gè)Ruv B六聚體環(huán)狀結(jié)構(gòu)分別與每個(gè)雙螺旋相結(jié)合。 RuvAB蛋白復(fù)合體可以使支鏈以1020bp的速度遷移。 3、噬菌體的兩種存在形式是怎樣通過位點(diǎn)特異性重組實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)換的？噬菌體有兩種存在型式裂解狀態(tài)和溶源狀態(tài)。 為了進(jìn)入溶源狀態(tài)，游離的DNA必須整合（intergrate）到細(xì)菌DNA中去；而為了從溶源狀態(tài)向裂解狀態(tài)轉(zhuǎn)化，原噬菌體DNA則必須從細(xì)菌染色體DNA上切除（excise）。 整合和切除均通過細(xì)菌DNA和DNA上特定位點(diǎn)附著點(diǎn)（attachment site，att）之間的重組而實(shí)現(xiàn)。 5.轉(zhuǎn)座的機(jī)制是怎樣的？轉(zhuǎn)座的一般過程是怎樣的？1復(fù)制型轉(zhuǎn)座2非復(fù)制型轉(zhuǎn)座3保守轉(zhuǎn)座過程1.非復(fù)制轉(zhuǎn)座轉(zhuǎn)座子插入到DNA上新的位點(diǎn)，首先交錯(cuò)切開靶DNA，再將轉(zhuǎn)座子連接到靶DNA的凸出單鏈上，最后填補(bǔ)空缺完成轉(zhuǎn)座。 2.非復(fù)制轉(zhuǎn)座的斷裂和再連接過程Cross structure中供體與轉(zhuǎn)座子之間的未斷裂鏈被切開；轉(zhuǎn)座子與兩側(cè)的靶鏈連接。 3.復(fù)制型轉(zhuǎn)座:在轉(zhuǎn)座子和靶位點(diǎn)兩端分別交錯(cuò)切割產(chǎn)生切口;轉(zhuǎn)座子和靶位點(diǎn)的切口末端交互連接(a-f,g-d),形成一種交換結(jié)構(gòu)(cross structure);以游離的3末端作為引物進(jìn)行復(fù)制，產(chǎn)生一個(gè)包含兩個(gè)正向重復(fù)的轉(zhuǎn)座子拷貝的復(fù)合物，稱為共合體(cointegrate),這一過程在轉(zhuǎn)座酶作用下進(jìn)行; （4）轉(zhuǎn)座子的兩個(gè)拷貝在res（site ofresolution）位點(diǎn)發(fā)生重組，釋放兩個(gè)復(fù)制子。 這一過程稱為拆分(Resolution)，在解離酶的作用下進(jìn)行。 第六章 1、RNA聚合酶的性質(zhì)？RNA聚合酶能起始一條新鏈的合成，起始核苷酸一般是嘌呤核苷三磷酸（pppA或pppG）RNA聚合酶以單鏈為模板，一個(gè)NTP的3-OH和另一個(gè)NTP的5-P反應(yīng)，去掉焦磷酸，形成磷酸酯鍵。 2、原核生物的啟動子、真核生物的各類啟動子及轉(zhuǎn)錄因子 一、原核生物啟動子-10序列T80A95T45A60A50T96又稱為Pribnow box，在這一區(qū)域DNA雙鏈熔解，形成開放復(fù)合物-35序列T82T84G78A65C54A45為RNA聚合酶識別位點(diǎn)，又稱為初始結(jié)合位點(diǎn)-10序列和-35序列之間一般相距1619bp，使兩個(gè)位點(diǎn)恰好位于DNA雙螺旋的同一側(cè)，它們之間距離的改變可影響因子的作用力而改變效率 二、真核生物啟動子和轉(zhuǎn)錄因子真核生物啟動子由轉(zhuǎn)錄因子而不是RNA聚合酶識別1.RNA聚合酶I啟動子1)核心啟動子序列（core promoter）-45+20富含G/C，能起始轉(zhuǎn)錄2)上游啟動子序列（upstream promoterelement，UPE或UCE）from180to107富含G/C，能極大地提高啟動子效率3)RNA聚合酶I需要兩類轉(zhuǎn)錄因子參與作用:a)UBF因子與UPE序列結(jié)合:UBF因子結(jié)合于DNA的小溝，使DNA形成一個(gè)約360的環(huán)，核心序列和UPE序列相互靠近b)SL1因子不單獨(dú)與核心啟動子序列結(jié)合，一旦UBF結(jié)合在核心啟動子和UCE上，SL1就可以協(xié)同擴(kuò)展DNA覆蓋區(qū)域，使RNA聚合酶I定位于起始位點(diǎn)上，SL1為四聚體蛋白，其組分TBP蛋白，也參與RNA聚合酶II和III的作用2.RNA聚合酶III啟動子:RNA聚合酶III同時(shí)使用上游和下游啟動子1)5SrRNA和tRNA基因?yàn)閮?nèi)在啟動子，位于轉(zhuǎn)錄單位內(nèi)部a)5S rRNA基因的啟動子位于+55+80區(qū)域，由boxA+boxC組成(type1)b)tRNA基因的啟動子由boxA+boxB組成(type2)2)核內(nèi)小RNA(snRNA)基因的啟動子位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游(type3)3)RNA聚合酶III的轉(zhuǎn)錄因子TFIIIC結(jié)合到boxA和boxB上(I型啟動子中，TFIIIA結(jié)合到box A上使TFIIIC結(jié)合)TFIIIC的存在使TFIIIB結(jié)合到轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)TFIIIB(由三個(gè)亞基組成，其中一個(gè)亞基是TBP)使RNA聚合酶III結(jié)合到起始位點(diǎn)PIC:pre-initiation plex3.RNA聚合酶II的啟動子:核心啟動子的成分主要決定轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的位置起始子（Inr）:3+5TATA box:位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-25bp區(qū)域，核心序列為TATAA TATA-less promoters:不含TATA box的啟動子通常包含DPE元件（downstream promoterelement），位于+28-+32區(qū)域上游啟動子元件控制轉(zhuǎn)錄起始頻率3)RNA聚合酶II的轉(zhuǎn)錄因子:TFII D因子結(jié)合到TATA box的上游序列。 TFII D因子包含TBP和TAFs兩個(gè)組分 3、TBP怎樣參與三種RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄起始的？TBP是三種RNA聚合酶通用的轉(zhuǎn)錄因子:1)TBP與DNA小溝結(jié)合，形成一個(gè)馬鞍形結(jié)構(gòu)2)TBP的結(jié)合使DNA彎曲約80TBP的DNA結(jié)合位點(diǎn)由C端結(jié)構(gòu)域組成，比較保守，可變的N端結(jié)構(gòu)域則暴露在外面，用來與其他蛋白質(zhì)相互作用 5、原核生物轉(zhuǎn)錄的起始、延伸和終止過程。 一、起始:1）起始識別RNA聚合酶與啟動子結(jié)合形成封閉的啟動子復(fù)合物，識別位點(diǎn)在-35處；2）活化-10區(qū)域形成形成開放的啟動子復(fù)合物，解開雙鏈；3）形成三元起始復(fù)合物，開始轉(zhuǎn)錄。 二、延伸核苷酸不斷加到RNA鏈的3-OH上。 RNA合成起始不久，RNA聚合酶核心酶變構(gòu)，因子脫落。 三、轉(zhuǎn)錄的終止 一、原核生物終止子的兩種類型1不依賴因子的終止子可以在不依賴其它輔助因子的情況下，終止細(xì)菌RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄2依賴因子的終止子 6、原核生物三種RNA是怎樣進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加工的？mRNA原核生物中，mRNA轉(zhuǎn)錄之后立即翻譯，一般沒有轉(zhuǎn)錄后加工過程tRNA前體的加工1.RNase內(nèi)切酶將tRNA多順反子前體切割為單體2.tRNA5端的成熟在RNase P的作用下生成5成熟末端。 該酶識別加工部位的空間結(jié)構(gòu)，含有蛋白質(zhì)和RNA兩部分。 所含的RNA(M1RNA)可單獨(dú)完成切割功能3.形成tRNA3成熟末端核酸外切酶從3端切去附加序列，進(jìn)行修剪在tRNA3末端添加上CCA，這是一個(gè)酶促反應(yīng)，在不同的組織中存在不同的反應(yīng)模式4.核苷酸的修飾tRNA包含50種以上的修飾堿基rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工1.rRNA轉(zhuǎn)錄單位由16S rRNA、23S rRNA、5S rRNA和若干tRNA基因組成2.原初始轉(zhuǎn)錄物為30S rRNA前體3.在RNaseIII作用下形成16S rRNA和23S rRNA前體P16和P23，在RNase E作用下產(chǎn)生5S rRNA前體P54.核酸酶進(jìn)一步切除附加序列產(chǎn)生成熟rRNA分子三種RNA在翻譯過程的作用？mRNA即信使RNA，上面有一系列分別由3個(gè)堿基構(gòu)成的密碼子，在合成蛋白質(zhì)時(shí)與核糖體結(jié)合，提供合成的模板。 他直接決定著合成哪一種蛋白質(zhì)，表達(dá)何種性狀。 rRNA即核糖體RNA，與多種小分子蛋白質(zhì)結(jié)合成核糖體顆粒（也就是構(gòu)成核糖體），而核糖體就是蛋白質(zhì)的場所，在細(xì)胞蛋白質(zhì)合成發(fā)揮重要的作用。 tRNA即轉(zhuǎn)運(yùn)RNA，上有反密碼子（與密碼子結(jié)合），每三個(gè)反密碼子對應(yīng)一個(gè)氨基酸，不同的氨基酸分別和不同的tRNA結(jié)合。 tRNA起運(yùn)輸氨基酸的作用 7、真核生物怎樣進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加工？真核生物rRNA前體的加工145S的5端序列被切除，產(chǎn)生41S前體2.41S前體被切割分成兩部分，20S前體和32S前體3.20S3端序列被切除，產(chǎn)生18S rRNA4.32S rRNA被切割生成5.8S和28S rRNA5.5.8S和28S rRNA互補(bǔ)配對真核生物tRNA前體的拼接酵母的272個(gè)tRNA基因中，有59個(gè)為斷裂基因斷裂基因均含一個(gè)內(nèi)含子，長1460bp,插入到反密碼子下一個(gè)核苷酸的3側(cè)位點(diǎn)內(nèi)含子都有一個(gè)反密碼子互補(bǔ)序列，反密碼子環(huán)不再存在剪接過程前體tRNA在核酸酶作用下，切除內(nèi)含子序列，生成兩個(gè)半分子tRNA反密碼子環(huán)形成在RNA連接酶作用下生成成熟tRNA分子酶切和連接過程核酸內(nèi)切酶產(chǎn)生2，3環(huán)磷酸基和5羥基末端環(huán)磷酸二酯酶打開環(huán)；激酶在外顯子5羥基添加磷酸基團(tuán)連接酶將AMP加到5磷酸基團(tuán)連接酶將外顯子共價(jià)連接磷酸酯酶除去2磷酸基團(tuán)真核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工包括5端形成特殊的帽子結(jié)構(gòu)；在3端切斷并添加poly A尾巴；通過拼接除去由內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄而來的序列；鏈內(nèi)部核苷酸的甲基化帽子的功能為核糖體對mRNA的識別提供信號。 帽子0的結(jié)構(gòu)為核糖體識別所必須。 帽子1和帽子2中的甲基化能增進(jìn)核糖體對mRNA的結(jié)合帽子結(jié)構(gòu)增加mRNA的穩(wěn)定性，保護(hù)mRNA免遭5外切核酸酶的攻擊被蛋白質(zhì)合成起始因子識別，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成促進(jìn)mRNA從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到胞外帽子的分布帽子0存在于所有真核生物中；帽子1存在于除單細(xì)胞真核生物以外的其余真核生物；帽子2只存在于某些特定真核生物中帽子的合成核苷酸磷酸水解酶從mRNA前體5端三磷酸脫去一個(gè)磷酸在鳥苷酰轉(zhuǎn)移酶(Guanylyl transferase）作用下和一個(gè)GTP反應(yīng)生成55三磷酸二酯鍵并釋放一個(gè)PPi 8、真核生物中剪接體怎樣催化內(nèi)含子的剪接的？剪接體SnRNA(核內(nèi)小RNA）與特異性蛋白結(jié)合，形成核內(nèi)小核糖核蛋白顆粒(SnRNPs).mRNA前體和SnRNPs動態(tài)聚合，形成剪接體。 SnRNPsU 1、U 2、U 4、U 5、U6SnRNA與mRNA、或snRNAs之間具有互補(bǔ)序列，這種堿基互補(bǔ)配對在剪切過程中具有重要作用剪接體催化過程U1snRNA起始剪切過程U1snRNP和ASF/SF2因子在5剪切位點(diǎn)結(jié)合U2AF因子結(jié)合到3剪切位點(diǎn)SF1/BBP連接U1snRNP和U2AF，形成E復(fù)合物 1、U1識別5剪接位點(diǎn)形成E復(fù)合物 2、U2結(jié)合在內(nèi)含子的分支點(diǎn)上形成A復(fù)合物 3、A復(fù)合物與事先組裝好的U4-U5-U6三聚體連接在一起，形成B1復(fù)合物。 其中U5結(jié)合 4、于5位點(diǎn)，U6與U2結(jié)合 5、U1釋放，U5從外顯子轉(zhuǎn)移到內(nèi)含子區(qū)，U6與5位點(diǎn)結(jié)合，形成B2復(fù)合物 6、U4釋放，U6/U2催化酯交換反應(yīng)，U5與3剪切位點(diǎn)結(jié)合，形成C1復(fù)合物；（5位點(diǎn)斷開，形成套索） 7、U2/U5/U6仍與套索結(jié)合，為C2復(fù)合物（3位點(diǎn)斷開，外顯子連接）套索解開分支 9、兩種類型的內(nèi)含子的自我剪切rRNA的剪接和催化作用剪接體SnRNA(核內(nèi)小RNA）與特異性蛋白結(jié)合，形成核內(nèi)小核糖核蛋白顆粒rRNA的自我剪接和催化（一）四膜蟲rRNA具有自我剪切功能1981年，Cech發(fā)現(xiàn)四膜蟲rRNA前體具有高度專一的催化活性，能在沒有蛋白質(zhì)的情況下進(jìn)行自我剪接。 （二）Group I內(nèi)含子的自我剪切過程:1.G的3-OH攻擊內(nèi)含子的5末端；2.外顯子A的3-OH攻擊外顯子B的5末端；3.內(nèi)含子3-OH攻擊5末端附近的鍵。 Group內(nèi)含子的自我剪切過程:內(nèi)含子靠近3端的腺苷酸2-OH攻擊5磷酸基引起的，在線粒體和葉綠體中會出現(xiàn)。 RNA的是改變RNA分子序列的一種轉(zhuǎn)錄后修飾現(xiàn)象，包括堿基的插入、缺失或核苷酸的替換。 剪接只影響RNA分子本身的結(jié)構(gòu)特性，與編碼的序列內(nèi)容無關(guān)，而RNA能改變轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的信息特性，導(dǎo)致編碼蛋白質(zhì)的氨基酸序列改變，改變密碼子的含義甚至整個(gè)可讀框。 涉及到脫氨酶的作用。 第七章 1、遺傳密碼是怎樣被破譯的？1954年Gamov G首先對遺傳密碼進(jìn)行探討，指出遺傳密碼子應(yīng)該是三聯(lián)體，并且是不重疊的1961年，Crick FH C及其同事觀察了噬菌體特定位點(diǎn)插入或缺失核苷酸，對噬菌體感染能力的影響，證明三聯(lián)體密碼子是非重疊的，并且沒有標(biāo)點(diǎn)證明三聯(lián)體密碼子的三個(gè)著名實(shí)驗(yàn):多聚同一核苷酸的翻譯:Nirenberg MW和Matthaej JH采用人工合成的多核苷酸鏈，在無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)中尋找氨基酸和三聯(lián)體密碼子的對應(yīng)關(guān)系核糖體結(jié)合技術(shù)以人工合成的三核苷酸，在含核糖體、AA-tRNA的適當(dāng)離子強(qiáng)度的反應(yīng)液中保溫使反應(yīng)液通過硝酸纖維素濾膜,游離的AA-tRNA因相對分子質(zhì)量小能自由通過濾膜加入三核苷酸模板可以促使其對應(yīng)的AA-tRNA結(jié)合到核糖體上，體積超過膜上的微孔而被滯留，這樣就能把已結(jié)合到核糖體上的AA-tRNA與未結(jié)合的AA-tRNA分開用14C標(biāo)記特定氨基酸，從模板三核苷酸與氨基酸的關(guān)系可測知該氨基酸的密碼子。 多聚重復(fù)核苷酸的翻譯:Jones,Khorana利用有機(jī)化學(xué)和酶法制備了已知的核苷酸重復(fù)序列，以此多聚核苷酸作模板，在體外進(jìn)行蛋白質(zhì)合成，發(fā)現(xiàn)可以生成三種重復(fù)的多肽鏈（下圖C）。 若從A翻譯，則合成出多聚Ile，即AUC對應(yīng)Ile；若從U翻譯，則合成出多聚Ser，即UCA對應(yīng)Ser；若從C翻譯，則合成出多聚His，即CAU對應(yīng)His。 這是因?yàn)轶w外合成是無調(diào)控的合成，可以隨機(jī)地從A、或U、或C翻譯，所以有三種重復(fù)的多肽鏈生成。 2、tRNA的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)是怎樣的？tRNA的二級結(jié)構(gòu)受體臂（aeptor arm）3端的最后3個(gè)堿基序列永遠(yuǎn)是CCA，最后一個(gè)堿基的3或2自由羥基（-OH）可以被氨?；?TC臂是根據(jù)3個(gè)核苷酸命名的，其中表示擬尿嘧啶反密碼子臂含有三聯(lián)反密碼子。 D臂中含有二氫尿嘧啶（dihydrouracil）可變臂，tRNA大小變化最大的區(qū)域tRNA的三級結(jié)構(gòu)tRNA的三級結(jié)構(gòu)主要由在二級結(jié)構(gòu)中未配對堿基間形成氫鍵而引發(fā)的。 在三葉草結(jié)構(gòu)中的氫鍵被稱為次級氫鍵，在三級結(jié)構(gòu)中的就稱為三級氫鍵 3、氨酰tRNA合成酶有哪些重要的結(jié)構(gòu)域？它催化怎樣的反應(yīng)？aa-tRNA合成酶的組成:催化域:ATP和aa結(jié)合位點(diǎn)tRNA接受臂結(jié)合域tRNA反密碼子結(jié)合域寡聚體形成域,合成酶可以是單體、二聚體或四聚體催化反應(yīng):AA+tRNA+ATPAA-tRNA+AMP+PPi它實(shí)際上包括兩步反應(yīng):第一步是氨基酸活化生成酶-氨基酰腺苷酸復(fù)合物。 AA+ATP+酶（E）E-AA-AMP+PPi第二步是氨?；D(zhuǎn)移到tRNA3末端腺苷殘基的2或3-羥基上。 4、怎樣體現(xiàn)AA-tRNA合成酶的專一性？AA-tRNA合成酶既要能識別tRNA，又要能識別氨基酸，它對兩者都具有高度的專一性專一性體現(xiàn)在對tRNA和氨基酸的識別（一組同功tRNA由一種AA-tRNA合成酶催化而攜帶氨基酸），識別機(jī)制AA-tRNA合成酶一般通過15個(gè)特定堿基識別tRNA一個(gè)（或更多）反密碼子堿基接受臂最后三個(gè)堿基對中的其中一對位于接受臂和CCA之間的識別堿基，在同功tRNA之間固定不變AA-tRNA合成酶的校對功能動力學(xué)校對和化學(xué)反應(yīng)校正 5、核糖體的組成和功能？核糖體（或稱核糖核蛋白體）由蛋白質(zhì)和rRNA組成。 是存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的微小顆粒。 核糖體的基本功能結(jié)合mRNA，在mRNA上選擇適當(dāng)?shù)膮^(qū)域開始翻譯密碼子（mRNA）和反密碼子（tRNA）的正確配對肽鍵的形成 6、核糖體上具有哪些活性位點(diǎn)？其功能怎樣？核糖體的活性位點(diǎn):A位點(diǎn)(氨?；鵷RNA位點(diǎn)，amino acyl-tRNA site)在延伸過程中與進(jìn)入的負(fù)載tRNA結(jié)合P位點(diǎn)(肽酰tRNA位點(diǎn)，peptidyl-tRNA site)與攜帶新生多肽鏈的tRNA結(jié)合。 E-位點(diǎn)(退出位點(diǎn)，Exit site),空載的tRNAs從此位點(diǎn)被排出。 肽基轉(zhuǎn)移酶位點(diǎn)，在50S亞基上,提供肽鍵形成的催化活性EF-G結(jié)合位點(diǎn),其活性是核糖體在mRNA移位所必需的多肽出口位點(diǎn)，核糖體通過這個(gè)區(qū)域附著在膜上 7、原核、真核生物蛋白質(zhì)的合成過程是怎樣的？ 一、肽鏈合成的起始過程第一步，30S小亞基首先與翻譯起始因子IF-1，IF-3結(jié)合，通過SD序列與mRNA模板結(jié)合。 第二步，在IF-2和GTP的幫助下，fMet-tRNA進(jìn)入小亞基的P位，tRNA上的反密碼子與mRNA上的起始密碼子配對。 第三步，IF-1，IF-3釋放，帶有tRNA，mRNA的小亞基復(fù)合物與50S大亞基結(jié)合，GTP水解，釋放翻譯起始因子IF-2。 2.翻譯起始因子:IF3因子具有多重功能:4.起始tRNA(fMet-tRNAi):5.起始過程中mRNA和rRNA的堿基互補(bǔ)配對 二、肽鏈的延伸延伸過程:新進(jìn)入的氨酰tRNA結(jié)合到70S核糖體的A位點(diǎn)上。 肽鍵的形成:這一過程需要肽酰轉(zhuǎn)移酶。 同時(shí)，P位點(diǎn)上tRNA卸載肽鏈移位:核糖體沿mRNA移動一個(gè)密碼子的距離肽鍵的形成:反應(yīng)由肽基轉(zhuǎn)移酶（peptidyl transferase）完成.肽基轉(zhuǎn)移酶活性是核糖體大亞基（50或60S）的功能.rRNA和50S亞基蛋白對該活性都是必需的,但實(shí)際催化反應(yīng)由23S rRNA完成移位核糖體從mRNA的5向3方向移動一個(gè)三聯(lián)體的距離，于是攜帶著肽基的tRNA連同mRNA