譜圖異常問題與原因

1、天津市天興達(dá)科技有限公司譜 圖 問 題液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。a、 峰拖尾原 因解決方法1、篩板阻塞1、a、反沖色譜柱 b、更換進(jìn)口篩板 c、更換色譜柱2、色譜柱塌陷2、填充色譜柱3、干擾峰3、a、使用更長(zhǎng)的色譜柱 b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤4、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑 b、更改色譜柱b、 峰前延原 因解決方法1、柱

2、溫低1、升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑3、樣品過載3、降低樣品含量4、色譜柱損壞4、見A1、A2c、 峰分叉原 因解決方法1、 保護(hù)柱或分析柱污染1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。d、 峰變形原 因解決方法1、樣品過載1、減少樣品載量e、 早出的峰變形原 因解決方法1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)1、a、減少進(jìn)樣體積 b、運(yùn)用低極性樣品溶劑f、

3、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因解決方法1、柱外效應(yīng)1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路） b、使用小體積的流通池g、 K增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重原 因解決方法1、二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式1、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品） d、更換一支柱子 2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式2、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入水（或多官能團(tuán)化合物） d、試用另一種方法3、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì)3、加入三乙胺（或堿性樣品）h、 酸性或堿性化合物的峰拖尾原 因解決方法1、緩沖不合適1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b

4、、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液i、 額外的峰原 因解決方法1、樣品中有其他組份1、正常2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率 b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、檢查流動(dòng)相是否純凈 b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 c、減少進(jìn)樣體積j、 保留時(shí)間波動(dòng)原 因解決方法1、溫控不當(dāng)1、調(diào)好柱溫2、流動(dòng)相組分變化2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等）3、色譜柱沒有平衡3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱k、 保留時(shí)間不斷變化原 因解決方法1、流速變化1、重新設(shè)定流速2、泵中有氣泡2、從泵中除去氣泡3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng)3、a、更換合適的流動(dòng)相 b、選擇合適的混合流動(dòng)相l(xiāng)、 基線漂移原 因解決方

5、法1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。）1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。）2、使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）4、檢測(cè)器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化5、更改

6、配比或流速。為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。10、將波長(zhǎng)調(diào)整至最大

7、吸收波長(zhǎng)處m、 基線噪音（規(guī)則的）原 因解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。2、漏液2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動(dòng)相混合不完全3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響（柱溫過高，檢測(cè)器未加熱）4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。6、泵振動(dòng)6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器n、 基線噪音（不規(guī)則的）原 因解決方法1、 漏液1、見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出

8、和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動(dòng)相的組成。3、流動(dòng)相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動(dòng)相4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正。5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染（即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、檢測(cè)器燈能量不足8、更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置o

9、、 寬峰原 因解決方法1、流動(dòng)相組成變化1、重新制備新的流動(dòng)相2、流動(dòng)相流速太低2、調(diào)節(jié)流速3、漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器之間）3、見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。4、檢測(cè)器設(shè)定不正確4、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響a、 柱子過載b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)5、a、 小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品b、 減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路d、 減少響應(yīng)時(shí)間6、緩沖液濃度太

10、低6、增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效7、更換保護(hù)柱8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果11、柱溫過低11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過7512、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)p、 分離度降低原 因解決方法1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）1、重新配置流動(dòng)相2、保護(hù)柱或分析柱阻塞圖2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在

11、色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。q、 所有的峰面積都太小原 因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過高1、減少衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、進(jìn)樣量太少3、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接r、 所有的峰面積都太大原 因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過低1、采取較大的衰減2、進(jìn)樣過多2、減少進(jìn)樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀資料由天津市天興達(dá)科技有限公司整理提供，天津市天興達(dá)科技有限公司是依托天津著名高校建立的專業(yè)服務(wù)于科研人員及各個(gè)企事業(yè)單位檢測(cè)機(jī)構(gòu)的科技公司。目前主要代理美國(guó)SCIENTIFIC SYSTEM公司（SSI）的LabAlliance品牌液相色譜儀及各種國(guó)內(nèi)外液相耗材。同時(shí)也從事液相色譜柱的生產(chǎn)和銷售、液相色譜檢測(cè)方法的開發(fā)。目前SSI儀器及各種液相色譜耗材正在優(yōu)惠熱銷中，歡迎登陸公司網(wǎng)址查詢或來電來