熒光定量PCR儀使用說明

1、7500熒光定量PCR儀使用說明注意事項:按壓此處注：關(guān)閉儀器托盤時，應(yīng)按一個角度推壓托盤的右側(cè)。實驗過程必須戴干凈的一次性乳膠手套 進行操作。PCR反應(yīng)所用的96孔板、8聯(lián)管或單管必須為ABI7500專用，凸蓋PCR管禁止使用。 使用8聯(lián)管兩側(cè)需用空管支撐，使用單管四角需用空管支撐，以防止板槽受力不均。實驗數(shù)據(jù)用光盤刻錄，禁止 U盤拷取，數(shù)據(jù)可暫存于本機電腦硬盤中，各實驗室 D盤中有 指定文件夾，中心外部人員數(shù)據(jù)存于 FUWU文件夾下的子文件夾中。操作步驟?開機依次打開電腦顯示屏、主機，輸入開機密碼“7500”待電腦啟動穩(wěn)定后，按壓 7500儀器電源按扭，等待儀 器啟動（約30 s）。當儀器

2、只顯示Power狀態(tài)指 示燈時，方可按壓托盤以打 開它。放入反應(yīng)板（以下過程按字母順序a- q進行操作）?創(chuàng)建反應(yīng)板文件雙擊電腦桌面上SDS軟件圖標打開SDS軟件;在對話框中選擇 Create New Document，或選擇菜單欄 File > New；XNew Docuinnent Wizard padcr: |AdmmistratDra.從 Assay下拉列表中選擇反應(yīng)板類型反應(yīng)板文件類型有以下幾種:1.2.3.4.Relative Quantification （ddCt） Plate （相對定 量）Absolute Quantification （Standard Curve）

3、（絕對定量，標準曲線）Allelic Discrimination （等位基因鑒別）Plus/Minus （陽性/陰性實驗）b.為反應(yīng)板文件命名 c.單擊 Nextd.選擇要添加到反應(yīng)板文件的探針（引物）， 單擊Add添加選中探 針e.如果在列表中未列出 所需探針，請單擊NewDetector創(chuàng)建新探針4 f.單擊 Next?為每個反應(yīng)孔指定探針和任務(wù)hgkg. 選取探針相同的反應(yīng)孔h. 點擊反應(yīng)孔對應(yīng)的探針。i. 單擊Task欄的下邊指定探 針任務(wù)。j. 選擇Use （使用）。k. 單擊Finish （完成）。?為反應(yīng)孔設(shè)置樣品名I.選取反應(yīng)孔，直接輸入 相應(yīng)樣品名（也可右鍵， 調(diào)出反 We

4、ll Inspector 對 話框，在 Sample Name 中進行修改）r* Jr” ： ViiLQ-i-iarliF?設(shè)定PCR循環(huán)參數(shù)、運行程序J tiM t J'lJBtrnlZJL醫(yī)E卿¥InstSvkgft-rnrt stnrtg> 750C SymteF S XftBE - PlalsL 洛lardedp 日1令 過力薩 工gk Jnstrjrnnt Anlyis Wndow HlpELiltM TLlwm.選擇 Instrument 選項卡，默認條件下顯示標準PCR條件，可跟據(jù)實 驗具體情況修改；n.單擊 Add DissociationStage添加溶解曲線循環(huán)；o.修改PCR反應(yīng)體積；p.將反應(yīng)板文件保存至指定路徑。q.點擊Start運行程序?結(jié)束實驗1. 實驗結(jié)束后關(guān)閉軟件。（確認反應(yīng)板文件數(shù)據(jù)已保存）2. 打開拖盤，將反應(yīng)板取出，關(guān)閉拖盤。3. 按下7500儀器電源開關(guān)關(guān)閉機器。4.