硫酸氫氯吡格雷驗證

1、硫酸氫氯吡格雷殘留測定及方法學(xué)驗證報告實施人：審核人：批準(zhǔn)人：目錄1 . 驗證概述2 . 驗證目的3 . 驗證范圍4 . 驗證項目及可接受標(biāo)準(zhǔn)5 . 實施驗證的人員6 . 所用的儀器及設(shè)備7 . 驗證內(nèi)容8 . 驗證結(jié)論1 . 驗證概述根據(jù)中國藥典2005版對原料藥殘留溶媒測定及驗證的要求，我們對硫酸氫氯吡格雷工藝中使用到的甲醇、丙酮. 二氯甲烷，甲苯4種溶媒進行殘留測定分析方法驗證，由于硫酸氫氯吡格雷熱穩(wěn)定性較差，所以我們采用頂空方法分析驗證，所測溶媒二氯甲烷，甲苯與水不能互溶，我們?nèi)軇┻x擇采用50%二甲基甲酰胺（DMF）作為稀釋溶劑（簡稱溶劑A），并根據(jù)驗證結(jié)果，制定了硫酸氫氯吡格雷殘留溶

2、媒測定的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。2 . 驗證目的 為了建立硫酸氫氯吡格雷的殘留溶媒測定的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)和測定方法。3 . 驗證范圍 適合硫酸氫氯吡格雷的殘留溶媒的測定。4 . 驗證項目及可接受標(biāo)準(zhǔn)驗證項目可接受標(biāo)準(zhǔn) 專屬性 （分離度R、理論塔板數(shù)n）R3.0、n25000定量限最低檢測限測定（信噪比）信噪比10.0甲醇定量限檢測濃度3.0ug/ml丙酮定量限檢測濃度1.5ug/ml二氯甲烷定量限檢測濃度1.0ug/ml甲苯定量限檢測濃度0.5ug/ml信噪比3.0甲醇最低檢測濃度1.0ug/ml丙酮最低檢測濃度0.5ug/ml二氯甲烷最低檢測濃度0.3ug/ml甲苯最低檢測濃度0.15ug/ml線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)

3、r）r0.9995加樣回收率90.0%110.0%加樣平均回收率（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD）RSD5.0%精密度（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD）RSD10.0%5 . 實施驗證的人員：喬志毅6 . 所用的儀器及設(shè)備儀器自編號校驗日期有效期安捷倫-6890NCA0510032009.03.052010.03.047 .驗證內(nèi)容7.1 測定儀器及檢測條件儀器: 安捷倫-6890N氣相色色譜儀 ，7694E頂空進樣器，N2000工作站測定條件 柱:毛細管柱 DB-624 S/N: USA109036H規(guī)格: 30M×0.53mm×3.0µm載氣:N2 流速4.0ml/min , 柱溫:

4、 初始溫度50： 初溫時間2min：升溫速率10 /min 終止溫度160：.終溫保持時間2min：進樣器溫度:200 分流比:10:1 進樣體積1ml7694E頂空進樣器 頂空瓶加熱溫度80，進樣環(huán)140，傳輸管線150，頂空瓶加熱時間20min，進樣時間1.0min，瓶壓14psi. 頂空瓶 10ml檢測器 FID溫度：250 氫氣：40ml/min 空氣：400ml/min 尾吹：20ml/minRang 0 ATTEN 07.2. 專屬性試驗 精密吸取甲醇127µl（相當(dāng)于100mg），丙酮127µl（相當(dāng)于100mg），二氯甲烷75µl（相當(dāng)于100mg

5、）,甲苯57ul（相當(dāng)于50mg）分別置4個事先裝有少量溶劑A的100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋到刻度，配置成4個相應(yīng)的溶劑A溶液，分別吸取各溶液5ml到4個50ml的容量瓶中，用溶劑A稀釋到刻度，配置成含各溶劑濃度均為100µg/ml的4種溶液A（甲醇），B（丙酮）,C（二氯甲烷）,D(甲苯).取4個溶液及溶劑A溶液在信噪比3條件下頂空進樣分析，出樣順序：甲醇A（RT=2.498），丙酮B（RT=3.473），二氯甲烷C（RT=3.882），甲苯D(RT=8.057)取上述A-D.4溶液按1：1混合進樣。結(jié)果：甲醇.丙酮之間分離度13.5，丙酮.二氯甲烷之間分離度4.6.二氯甲烷.

6、甲苯之間分離度40，甲苯.DMF之間分離度10.9.甲醇N=43362，丙酮N=35593，二氯甲烷N=41221，甲苯N=105679.符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。7.3定量限最低檢測限測定（1）取專屬性項下A甲醇溶液5.0ml到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10的條件下測定一次，再吸取A甲醇溶液2.0ml到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10的條件下，測得定量限濃度為2.0ug/ml,在符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。再吸取A甲醇溶液0.7ml到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于3的條件下，測得最低檢測濃度為0.7ug/ml，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。（2）取專屬性項

7、下B丙酮溶液1.5ml到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10的條件下測定一次，再吸取B丙酮溶液0.75ml到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10的條件下，測得定量限濃度為0.75ug/ml：在符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。再吸取B丙酮溶液250ul到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于3的條件下，測得最低檢測濃度為0.25ug/ml，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。(3)取專屬性項下C二氯甲烷溶液1.5ml到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10的條件下測定一次，再吸取C二氯甲烷溶液300ul到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10

8、的條件下測定一次，再吸取C二氯甲烷溶液100ul到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10的條件下測定一次，測得定測得定量限濃度為0.1ug/ml：在符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。再吸取C二氯甲烷溶液30ul到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于3的條件下，測得最低檢測濃度為0.03ug/ml，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。 (4)取專屬性項下D甲苯溶液1.0ml到100ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，配成0.5ug/ml甲苯溶液,在信噪比大于10的條件下測定一次，再吸取0.5ug/ml甲苯溶液2.5ml到50ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于10的條件下，測得定量限濃度為0

9、.025ug/ml：在符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。再吸取0.5ug/ml甲苯溶液0.8ml到50ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，在信噪比大于3的條件下，測得最低檢測濃度為0.008ug/ml，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果見表一 。表一：甲醇、丙酮，二氯甲烷，甲苯，定量限最低檢測濃度溶劑定量限 ug/ml檢測限 ug/ml甲醇2.00.75丙酮0.750.25二氯甲烷0.10.03甲苯0.0250.0087.4. 線性關(guān)系測定. 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置精密吸取甲醇380µl（相當(dāng)于300mg），丙酮380µl（相當(dāng)于300mg）,二氯甲烷45ul（相當(dāng)于60mg）甲苯34.5ul（相當(dāng)于30mg）同一個

10、事先裝有溶劑A的200ml容量瓶中，用溶劑A稀釋至刻度，配成含甲醇1500µg/ml，丙酮1500µg/ml，二氯甲烷300ug/ml,甲苯150ug/ml,的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液：1ml，2ml, 5ml，10ml，15ml，20ml到6個100ml的容量瓶中，用溶劑A稀釋到刻度，配成1#6#的6個標(biāo)準(zhǔn)溶液。取上述六個標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進樣，線性關(guān)系見表二，三，四，五。 表二： 甲醇的線性關(guān)系濃度（µg/ml）峰面積回歸方程相關(guān)系數(shù)1519305Y=1296.8x-31480.999930347767592385150191550225285581300

11、388470表三：丙酮的線性關(guān)系濃度（µg/ml）峰面積回歸方程相關(guān)系數(shù)1584105Y=6205x-64650.99997301838657545612215092983222513814543001858852表四：二氯甲烷的線性關(guān)系濃度（µg/ml）峰面積回歸方程相關(guān)系數(shù)317276Y=7259x-52330.999764350615967303021063145324571 60430083表五：甲苯的線性關(guān)系濃度（µg/ml）峰面積回歸方程相關(guān)系數(shù)1.554400Y=42661x-87540.99993.01282937.5300084156309432

12、2.5955441301269845結(jié)果：乙醇，丙酮在濃度15µg/ml300µg/ml之間，二氯甲烷在濃度3.0µg/ml60µg/ml之間,甲苯在濃度1.5µg/ml30µg/ml之間性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.9995，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。 7.5. 硫酸氫氯吡格雷加樣回收率實驗精密稱取供試品(20090501)4份，每份500mg，分別置4個10ml容量瓶中，其中一份精密加入溶劑A溶液溶解，作為空白檢測溶液。其余的每份分別加入線性項下的2#，4#，6#標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解。空白樣進樣2次，空白檢測溶液中測出甲醇A=8450,丙酮A=12

13、2094,未測出二氯甲烷. 甲苯，再將其余3份樣品分別測定(n=3)，并用各自相對應(yīng)的線性方程計算回收率。結(jié)果：回收率均在90.0110.0之間，平均回收率RSD5.0%符合可接受標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見表六.七. 八.九.。表六： 甲醇加樣回收率次數(shù)加入濃度（µg/ml）峰面積測定濃度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%13041399-845027.8492.895.93.323043872-845029.7499.133041630-845028.0193.44150193598-8450145.0996.75150190261-8450142.6395.161501847

14、80-8450138.4092.37300374180-8450284.4594.88300401742-8450305.71101.99300382797-8450291.1097.0表七： 丙酮加樣回收率次數(shù)加入濃度（µg/ml）峰面積測定濃度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%130297277-12209429.2797.699.33.3230311439-12209431.56105.2330300239-12209429.7599.241501026673-122094146.8297.951501022955-122094146.2297.5615010

15、08759-122094143.9496.073001902250-122094287.9396.083002050435-122094311.81103.993001977075-122094300.00100.0表八：二氯甲烷加樣回收率次數(shù)加入濃度（µg/ml）峰面積測定濃度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%16.0408496.35105.8103.24.826.0419166.50108.336.0419726.50108.343020342428.7495.853021098529.7899.363021823630.78102.676041441557.

16、8196.386045486363.38105.696046065064.18107.0表九：甲苯加樣回收率次數(shù)加入濃度（µg/ml）峰面積測定濃度（µg/ml）回收率%平均回收率%RSD%13.01179952.9799.0101.93.423.01227213.08102.733.01207643.04101.241561693014.6797.851563349815.05100.361564518515.33102.2730125899029.7299.1830137084232.34107.8930135993232.08106.97.6. 硫酸氫氯吡格雷精密度測

17、定精密稱取供試品（批號20090501）6份，每份500mg，置10ml容量瓶中用溶劑A稀釋到刻度，標(biāo)準(zhǔn)溶液配置，精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液10ml到100ml容量瓶的，用溶劑A稀釋到刻度，配成含乙醇150ug/ml，丙酮150ug/ml, 二氯甲烷30ug/ml,甲苯15ug/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液進6次，標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積誤差10%，供試品進2次，按外標(biāo)法計算供試品中殘留溶劑含量（ppm）。6次測定結(jié)果見下表十，十一，精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD10.0% ，符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。表十：硫酸氫氯吡格雷精密度(甲醇)供試品濃度（g/ml）標(biāo)準(zhǔn)峰面積甲醇平均RSD（%）樣品峰面積A均含量（ppm）平均（ppm）RS

18、D（%）0.0501221956151.185851311361.80.05030588631350.05003088841360.05061090661370.049882 89121370.0500219004138表十一：硫酸氫氯吡格雷精密度(丙酮)供試品濃度（g/ml）標(biāo)準(zhǔn)峰面積丙酮平均RSD（%）樣品峰面積A均含量（ppm）平均（ppm）RSD（%）0.0501229629641.31250293893951.40.0503051273963940.0500301296644040.0506101266913900.049882 1278793990.0500211264733947.7. 硫酸氫氯吡格雷殘留測定供試品配制：取供試品(批號：20090501，20090502，20090503), 3批樣每個批號精密稱取500mg到10ml容量瓶中，用溶劑A溶解并稀釋