課題6血紅蛋白的提取和分離(學案)

1、省海中高二生物(選修)教學學案課題6 血紅蛋白的提取和分離一、達標(一) 知識目標知識與技能：1、嘗試從血液中提取和分離血紅蛋白 2、了解色譜法、電泳法等分離生物 大分子的基本原理過程與方法：體驗血紅蛋白提取和分離的實驗的嚴格要求，注意按照操作提示進行相關(guān)步驟情感態(tài)度與價值觀：初步形成科學的思維方式，發(fā)展科學素養(yǎng)和人文精神(二) 重點和難點：重點：凝膠色譜法的原理和方法難點：樣品的預處理；色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填二、基礎(chǔ)知識(一)原理1 .凝膠色譜法凝膠色譜法也稱做 ,是根據(jù)分離蛋白質(zhì)的有效方法。凝膠實際上是一些由 構(gòu)成的多孔球體，在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分

2、子通過凝膠時速度不同，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)進入凝膠內(nèi)部的通道，路程 ，移動速度 ;而相對分子質(zhì)量 的蛋白質(zhì)無法進入凝膠內(nèi)部的通道，只能在 移動，路程 ，移動速度 。相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。具體過程：(1)相對分子質(zhì)量 較小的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量 較大的蛋白質(zhì)凝膠顆粒0<5畿oo500OO000ooooo(2)00QOOO000oocoooo oo OoDOOooQAi r(3)(4)(5)多孑板A . 的蛋白質(zhì)由于 作用進入凝膠顆粒內(nèi)部而被滯留； 的蛋白質(zhì)被排阻在凝膠顆粒外面，在了里之間迅速通過。B . (1) 混合物上柱；(2 )洗脫開始，的蛋白質(zhì)擴散進入凝膠顆粒內(nèi)

3、；的蛋白質(zhì)被排阻于凝膠顆粒之外；(3) 的蛋白質(zhì)被滯留； 的蛋白質(zhì)被向下移動。(4) 不同的蛋白質(zhì)分子完全分開；(5) 的蛋白質(zhì)行程較短，已從 中洗脫出來，的蛋白質(zhì)還在行進中。2. 緩沖溶液緩沖溶液的作用是。緩沖溶液通常由溶解于水中配制而成的。生物體內(nèi)進行的各種生物化學反應都是在一定的pH下進行的，例如：血漿的 pH是，要在實驗條件下準確模擬生物體內(nèi)的過程，必須保持體外的pH與體內(nèi)的基本一致。思考：說出人體血液中緩沖對？思考：在血紅蛋白整個實驗室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么？3. 電泳(1 )概念：電泳是指。(2)原理：許多重要的生物大分子，如()等都具有( )在( )下，這些基團會帶上

4、( ) 。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其( )移動。電泳利用了待分離樣品中各種分子( )以及分子本身( )、( )的不同使帶電分子產(chǎn)生不同的 ( ),從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。兩種常用的電泳方法是 和，在測定蛋白質(zhì)分子量時通常使用 。蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于 以及等因素。4蛋白質(zhì)的提取和分離蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步： 、和。思考：是否所有種類的蛋白質(zhì)的提取和分離都是這樣的？為什么？5樣品處理血液由和組成，其中紅細胞最多。紅細胞具有 的特點。紅細胞中有一種非常重要的蛋白質(zhì) ，其作用是 ，血紅蛋白有個肽鏈組成，包括，其中每條肽鏈環(huán)繞一個 ，磁基團可攜帶 。血紅蛋白因

5、含有 呈現(xiàn)紅色。紅細胞的洗滌洗滌紅細胞的目的是 ，采集的血樣要及時采用分離紅細胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的 ,第13頁將下層暗紅色的 倒入燒杯，再加入 ，緩慢攪拌，低速短時間離心，如此重復洗滌三次，直至 ，表明紅細胞已洗滌干凈。血紅蛋白的釋放在和作用下，紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。分離血紅蛋白溶液將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的 ，第2層為白色薄層固體，是 ，第3層是紅色透明液體，這是，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。透析 取1mL的血紅蛋白溶液裝入 中，將透析袋放入

6、盛有 300mL的物質(zhì)的量的濃度為20mmol/L的中，透析12h。透析可以去除樣品中 的雜質(zhì)，或用于更換樣品的。6 .凝膠色譜操作第一步要制作 ，第二步要 ，因為，所以裝柱前需要根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計算所需要的凝膠量。在裝填凝膠柱時，不得有 存在。因為氣泡會 ，降低分離效果。第三步是 。用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì)A .路程較長，移動速度較慢B .路程較長，移動速度較快C .路程較短，移動速度較慢D .路程較短，移動速度較快實驗操作1 .樣品處理（1）紅細胞的洗滌目的：去除（)方法：（）離心（速度越高和時間越長會使白細胞和淋巴細胞等一同沉淀達不到分離的效果），然后用膠頭吸管吸出上

7、層透明的（）,將下層（ ）的紅細胞液體倒入（ ）再加入用（ ）的）質(zhì)量分數(shù)為0. 9%的氯化鈉溶液洗滌 低速離心（低速短時間） 重復4、5步驟（ ）次，直至上清液中已沒有（ ）,表明洗滌干凈。利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化，不可洗滌次數(shù)過少。（2 ）血紅蛋白的釋放力口（）至卩（ ）體積，再加 40%體積的（ ）,置于（）上充分攪拌10分鐘（加速細胞破裂），細胞破裂釋放出血紅蛋白.（3）分離血紅蛋白溶液：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10 min，試管中的溶液分為 4層：第1層（最上層）:(）甲苯層第2層（中上層）:(）的沉淀層，（）色薄層固體第3層（中下層）:(）的水

8、溶液層，（）的液體第4層（最下層）：其它雜質(zhì)（ ）的沉淀層（4）透析2. 凝膠色譜制作1）凝膠色譜柱的制作 取長40厘米，內(nèi)徑1 . 6厘米的玻璃管，兩端需用砂紙磨平。 底塞的制作：打孔挖出凹穴安裝移液管頭部覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100目尼龍紗包好。a、選擇合適的的橡皮塞，中間打孔；b、在橡皮塞頂部切出鍋底狀的（），在0. 5ml的（）頭部切下（）長的一段，插入橡皮塞孔內(nèi)，上部不得超過橡皮塞的凹穴底面。c、剪尼龍網(wǎng)小圓片覆蓋在 （）上，用（ ）的尼龍紗將橡皮塞 （）包好，插到玻璃管一端。d、 色譜柱下端用移液頭部做（ ），連接一細的（），并用螺旋夾控制尼龍管的（），另一端放入收集（ ）的收集器內(nèi) 頂

9、塞的制作：插入安裝了玻璃管的橡皮塞 組裝：將上述三者按相應位置組裝成一個整體。 安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。2）凝膠色譜柱填料的處理（1）凝膠的選擇：（）。（2）方法：配置凝膠懸浮液：計算并稱取一定量的凝膠浸泡于（）中充分溶脹后，配成。（3）凝膠色譜柱的裝填方法 固定：將色譜柱處置固定在支架上 裝填：將（ ） 一次性的緩慢倒入（）內(nèi)，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻。 洗滌平衡裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在（）高的操作壓下，用 300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液（pH為7. 0）充分（） 12小時。3）樣品加入與洗脫（1）加樣前：打開下端出口，使柱內(nèi)凝膠面上的（）緩慢下降到與平齊，關(guān)閉出口

10、（2）加透析樣品 調(diào)整緩沖液面：與凝膠面平齊 滴加透析樣品： 用（ ）將1ml（）的樣品加到色譜柱的 （） 樣品滲入凝膠床：（ 洗脫：打開下端，用磷酸緩沖液洗脫 收集：待（）接近色譜柱底端時，用試管收集流出液,每（ ）收集一試管連續(xù)收集思考：與其它真核細胞相比，紅細胞有什么特點？這一特點對你進行蛋白質(zhì)的分離有什 么意義？思考：你能描述血紅蛋白分離的完整過程嗎？血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理； 再經(jīng)過透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即（）；然后通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量較大雜

11、質(zhì)蛋白除去， 即樣品的（）；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進行（）。3. SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷（）的蛋白質(zhì)是否達到要求，需要進行蛋白質(zhì)純度的鑒定。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血紅蛋白純度電泳方法步驟1 ）根據(jù)廠家說明書安裝電泳用的玻璃板2） SDS聚丙烯酰胺凝膠制備3）樣品處理：4）把凝膠固定于電泳裝置上5） 加樣：按順序加樣，加樣量通常為10 25 it L樣品可以多加幾個，例如，血漿樣品 紅細胞破碎后（即進行凝膠色譜分離之前）的樣品和凝膠色譜分離之后的樣品6） 電泳7）剝膠8）染色9）脫色10）觀察結(jié)果SDS電泳的成功關(guān)鍵之一是電泳過程中，待別是樣品制備過程中蛋白質(zhì)與SDS的結(jié)合程度。

12、三實驗結(jié)果分析與評價觀察血液樣品離心后是否分層，如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋 白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純 凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū) 帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的 效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。討論：如何測定蛋白質(zhì)的分子量？使用SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的分子量時，可選用一組已知分子量的標準蛋白同時進行電泳，根據(jù)已知分子量的標準蛋白的電泳區(qū)帶位置，用電泳遷移率和分子

13、量的 對數(shù)作標準曲線，可以測定未知蛋白質(zhì)的分子量。四、突破訓練 一選擇題1 .凝膠色譜法是根據(jù)（）分離蛋白質(zhì)的有效方法。A .分子的大小B .相對分子質(zhì)量的大小C 帶電荷的多少D 溶解度2緩沖液的作用是：在一定范圍內(nèi)，抵制外界的影響來維持（）基本不變。A .溫度B . pHC.滲透壓D .氧氣濃度3.電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷（）的電極移動。A .相同B .相反4. 哺乳動物和人的成熟的紅細胞中的（A .血紅蛋白B .肌紅蛋白5. 血液由血漿和各種血細胞組成，其中（A .白細胞B .血小板C.相對）與氧氣的運輸有關(guān)。C.肌動蛋白）的含量最多。C.紅細胞D .相向D .肌球蛋

14、白D .淋巴細胞6. 為防止血液凝固，在采血容器中要預先加入抗凝血劑A. NaCIB .甲苯C.蒸餾水D .檸檬酸鈉7. 將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，離心后，可以明顯看到試管中的溶液分為4層,其中第3層是A .無色透明的甲苯層B. 脂溶性物質(zhì)的沉淀層C. 血紅蛋白的水溶液8凝膠色譜法可以有效的分離蛋白質(zhì)的根據(jù)是A .分子的大小D .其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物B.相對分子質(zhì)量的大小C.帶電荷的多少D .溶解度9利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)，最先洗脫的蛋白質(zhì)特點是A .相對分子 質(zhì)量大的B.溶解度高的C.相對分子質(zhì)量小的D .所帶電荷多的10.凝膠色譜法中所用的凝膠化學本質(zhì)大多是A .糖類化合物B .

15、脂質(zhì)C.蛋白質(zhì)11 .相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進行過程可表示為圖中哪一個D .核酸()12. 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì)A .路程較長，移動速度較慢C.路程較短，移動速度較慢13. 能進入凝膠內(nèi)部通道的蛋白質(zhì)是指B.路程較長，移動速度較快 D .路程較短，移動速度較快A.相對分子質(zhì)量大的C.相對分子質(zhì)量小的14.凝膠色譜法中移動得快的是A .相對分子質(zhì)量大的B .溶解度高的B. 吸附性高的D .溶解度低的 相對分子質(zhì)量小的D .溶解度低的第17頁15. 緩沖液的作用是在一定范圍內(nèi)，抵制外界的影響來維持下列哪一項狀態(tài)基本不變的A. 溫度B. pHC.滲透壓D.氧氣濃度1

16、6. 初步分離血紅蛋白的實驗中用到的緩沖溶液為A. H2CO3一 NaHCC>3緩7中液B. NH4OH NH4CI 緩7中液C. CH3COOH CHsCOONa 緩7中液D. H3PO4緩7中液17. 蛋白質(zhì)提取和分離分為哪幾步A. 樣品處理、凝膠色譜操作、SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳B. 樣品處理、凝膠色譜操作、純化C.樣品處 理、粗分離、純化、純度鑒定C. 樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定18. 血紅蛋白因含有什么物質(zhì)而呈紅色A. 02B. COC. CO2D.血紅素19. 將攪拌好的混合液離心來分離血紅蛋白溶液時，第二層是A. 甲苯B.血紅蛋白水溶液C. 脂溶性物質(zhì)的沉淀層D.其

17、他雜質(zhì)的沉淀20. 分離血紅蛋白溶液時，離心后試管中的溶液分四層，血紅蛋白位于A. B.二C.三D.四21 .下列操作正確的是A .分離紅細胞時采用低速長時間離心B. 紅細胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸懈水就可C. 分離血紅蛋白溶液是低速短時間離心D.透析時要用20mmol/L的磷酸緩沖液，透析 12h22. 使用十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的遷移速度完全取決于 A .電荷的多少B .分子的大小C.肽鏈的多少23. 洗滌紅細胞的目的是A .去除血清B .去除雜蛋白24. 洗滌紅細胞時，分離所用的方法為A. 低速長時間離心C.高速長時間離心25. SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳法中

18、加入A .增大蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量C.掩蓋不同種蛋白質(zhì)問的電荷差別D.分子形狀的差異C. 除去血小板D.除去水B. 低速短時間離心D. 高速短時間離心SDS的作用是B. 改變蛋白質(zhì)的形狀D .減少蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量26. 制作凝膠色譜柱時，橡皮塞頂部凹穴內(nèi)插入的移液管的部位及長度是A .移液 管頭部5 cmB .移液管尾部5 cmC. 移液管頭部3 cmD .移液管尾部3 cm27. 下列有關(guān)凝膠色譜法中樣品的加入和洗脫的敘述中，正確的是先加入1 mL透析后的樣品第19頁A. 加樣前要使緩沖液緩慢下降，全部流出B. 如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動，說明色譜柱制作成功C. 洗脫時可以用緩沖液也可以

19、用清水28. 在下列哪一種條件下生物大分子具有的可解離的基團會帶上正電或負電A.一定溫度B. 一定 pHC.一定壓強D.一定容器29.電泳時帶電粒子在電場的作用下，移動所向的電極的方向與其所帶電荷是A.相同B.相反C.相對D.相向30.裝填凝膠色譜柱時，下端的尼龍管應A.先打開后關(guān)閉B .關(guān)閉C.先關(guān)閉后打開D.打開31.D亞鐵血紅索基團PJ攜帶A.一分子COB. 一分子NOC.分子0?或co?D.分子NO 232. 人體正常的血紅蛋白中應含有Fe,若誤食亞硝酸鹽，則導致血紅蛋白中的F尹。轉(zhuǎn)化為Fe'S產(chǎn)生高價鐵血紅蛋白而中毒。服用維生素 C可解除亞硝酸鹽中毒。在維生素 C 參與的反應

20、中A. 亞硝酸鹽是還原劑B.維生素C是氧化劑C. 亞硝酸鹽被氧化D.維生素C將Fe'+還原為Fe廿33. 加有少量檸檬酸鈉(防止血液凝固)的豬血分裝于標號、的試管中，隨后 依次加入質(zhì)量分數(shù)為 0. 3%、0. 9%和1. 5%的氯化鈉溶液稀釋，30 min后離心。下列敘 述中，正確的是A. 和試管的上清液中有血紅蛋白，沉淀中都有紅細胞B. 和試管的上清液呈淡黃色，沉淀中均有皺縮的紅細胞C. 和試管的沉淀中分別有紅細胞的碎片和皺縮的紅細胞D. 和試管的上清液是血清34. 在血紅蛋白的整個提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理的目的是A. 磷酸緩沖液會加速血紅蛋白的提取過程B. 血紅蛋白是一種兩

21、性物質(zhì)，需要酸中和C. 防止血紅蛋白被 02氧化D. 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和功能35. 在盛有紅褐色的 Fe(OH) 3,膠體的U形管的兩個管口，各插一個電極，通直流電 后，發(fā)現(xiàn)陰極附近的顏色逐漸加深，這說明A. Fe (OH) 3膠體粒子帶正電荷，向陰極移動B. Fe (OH) 3膠體粒子帶負電荷，向陽極移動C. Fe (OH) 3膠體粒子帶正電荷，向陽極移動D. Fe (OH) 3膠體粒子帶負電荷，向陰極移動36. 下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的程度敘述錯誤的是A .樣品的處理就是通過一系列操作收集到血紅蛋白溶液通過透析可以去除樣品中分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)，此為樣品的粗提

22、取B .血紅蛋白溶液離心后分為C .血紅蛋白溶液離心后分為D .血紅蛋白溶液離心后分為B .紅細胞無細胞核C 可通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化D .可通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血紅蛋白的純度37 凝膠色譜法操作正確的是A .將橡皮塞上 部用刀切出鍋底狀的凹穴B .將橡皮塞下部切出凹穴C .插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D .將尼龍網(wǎng)剪成與橡皮塞下部一樣大小的圓片38. 樣品的加入和洗脫的操作不正確的是A .加樣前，打開色譜 柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到凝膠面的 F面B .加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)C .等樣品完全進

23、入凝膠層后，關(guān)閉下端出口D .用吸管小心的將1ml透析后的樣品加到色譜柱的頂端，不要破壞凝膠面39. 下列說法不正確的是A .血紅蛋白在釋放時，加蒸餾水到原血液的體積，再加40%體積的甲苯，充分攪拌4層，第1層為白色薄層固體4層，第4層為暗紅色沉淀物4層，第3層為紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液、多選題40. 選用紅細胞作分離蛋白質(zhì)的實驗材料，下列是其優(yōu)點的是A .血紅蛋白是有色蛋白C .紅細胞蛋白質(zhì)含量高D .紅細胞DNA含量高41. 下面關(guān)于對血紅蛋白提取和分離的樣品的處理措施中，正確的是A .采集血樣后要高速短時問離心獲得血細胞B .洗滌三次后如上清液仍有黃色，可增加洗滌次數(shù)，否則血漿

24、蛋白無法除凈。C .在蒸餾水和甲苯的作用下，細胞破裂，釋放出血紅蛋白D .釋放血紅蛋 白后再經(jīng)過離心，就可以使血紅蛋白和其他雜質(zhì)分離開來42. 凝膠色譜柱取長為 40 cm,內(nèi)徑為1 . 6 cm,有關(guān)說法中，正確的是 A .一般凝膠色譜柱直徑的大小不影響分離的效果B .凝膠色譜柱過高超過 1m，不影響分離的效果C .凝膠色譜柱過矮，則影響混合物的分離度D .凝膠色譜柱直徑過大會耗用過多洗脫液，樣品的稀釋度過大43. 下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的過程的敘述中，正確的是A .樣品的處理就是通過一系列操作收集到血紅蛋白溶液B .通過透析可以去除樣品中相對分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)，此為樣品的粗提取C .可

25、通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化D .可通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血紅蛋白的純度44. 雄性激素是小分子脂溶性物質(zhì)，很容易穿過細胞膜。睪丸每天分泌的雄性激素約mg,其中約2%呈游離狀態(tài)，其余在血中與血漿蛋白呈可逆性結(jié)合。下列有關(guān)雄性激素與 血漿蛋白結(jié)合后的作用的敘述中，正確的是A .使其不容易通過腎臟排出B.使其不容易進入細胞B. 使其有效濃度處于特定水平D .抑制雄性激素發(fā)揮作用45. 下列敘述中錯誤的是A .改變NaCI溶液的濃度只能使 DNA溶解而不能使其析出B .在沸水浴中，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色C.加鹽和加酒都能抑制微生物的生長D .密封瓶口前

26、最好將瓶口通過火焰以防雜菌污染46 .電泳利用了待分離樣品中各種分子以及、的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。47. 分離血紅蛋白溶液時，將混合液離心后可看到試管中的液體分為4層：第一層為，第二層為固體，是的沉淀層，第三層是 液體，是的水溶 液，第四層是其他雜質(zhì)的 沉淀物。48. 細胞含有大量的血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶氧氣或二氧化碳，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進行實驗，來 提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關(guān)問題：(1) 血紅蛋白提取和分離的程度可分為四步： 、和。(2) 實驗前取新鮮的血液，要切記在采血

27、容器中預先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。 加入檸檬酸鈉的目的是 。 以上所述的過程即是樣品處理，它包括 、收集血紅蛋白溶液。(3) 收集的血紅蛋白溶液在透析袋中可以經(jīng)過透析，這就是樣品的粗分離。 透析的目的是。 透析的原理是 。(4) 然后通過凝膠色譜法將樣品進一步純化，最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行 純度鑒定。 樣品純化的目的是。 血紅蛋白有什么特點？ 。這一特點對進行蛋白質(zhì)的分離有什么意義？ 。49. 早在上世紀六十年代，在美國的黃石國家森林公園發(fā)現(xiàn)了一種嗜熱細菌，從這種細菌中分離提取了一種酶，稱為TaqDNA聚合酶。實驗得知 PCR反應變性時溫度為 95&

28、#176;C，經(jīng)50個循環(huán)后TaqDNA聚合酶仍有 65%的活性；TaqDNA聚合酶表現(xiàn)為 Mg2賴，濃度在 2. 0mmol/L的MgCl 2能最大限度地激活 TaqDNA聚合酶的活性 ;(1) 若要培養(yǎng)嗜熱細菌，培養(yǎng)基中應有水、碳源、 、等營養(yǎng)物質(zhì)。在此基礎(chǔ)上，培養(yǎng)該菌時需先將培養(yǎng)基 。(2) 若將培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基用于植物組織培養(yǎng)，還應加入 。(3) TaqDNA聚合酶可用于 PCR,原因是該酶有，因此在PCR擴增時可以加入。第17頁分離血紅蛋白目的：去除雜蛋白操作：取血樣加抗凝劑低速短時離心用吸管去上層透明的血漿加五倍體積的生理鹽水攪拌、低速短時離心目的：防止血液凝固操作：重復洗液三次以離心管，高速長 時離心 I離心后試管中溶液分為 4層 操作：加等體積的蒸餾水將離心管中液體用濾紙過濾 加甲苯濾液置于分液漏斗中靜止分層置于攪拌器上攪拌 10分鐘作用：避免白細胞和淋巴細胞等一同沉淀，達不到分離的效果保持紅細胞的形態(tài)結(jié)果：上清液沒有黃色，表明紅細胞已洗純純度鑒定通過凝膠色譜法將相對分子 質(zhì)量較 大的雜質(zhì)蛋白除去 經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也 正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū) 帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩