微生物限度方法學驗證

1、 微生物限度檢查方法的驗證微生物限度檢查方法的驗證微生物限度檢查方法的驗證微生物限度檢查方法的驗證 細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證 準確性（回收率）準確性（回收率） 控制菌檢查法的驗證控制菌檢查法的驗證專屬性專屬性細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證驗證的目的：驗證的目的： 確認所采用的方法適合該藥品的細菌、霉菌、酵母菌數(shù)的測定。照此檢查法和檢驗條件進行供試品細菌、霉菌、酵母菌數(shù)檢查能保證檢驗結(jié)果的準確、可靠。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證驗證的步驟：驗證的步驟： 根據(jù)樣品特性，制定檢驗方法和檢驗條

2、件。 保證驗證試驗所用的儀器、培養(yǎng)基和試劑等均符合試驗要求。 按制定的方法進行試驗。 根據(jù)驗證結(jié)果，判斷是否符合驗證的標準。若符合,按驗證的方法和條件進行藥品的微生物限度檢查；若不符合，應重新設立驗證方案，再進行驗證，直至驗證結(jié)果符合設立的驗證標準。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證 驗證時，按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)所規(guī)定的方法及要求進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗證。驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌計數(shù)驗證用菌株：細菌計數(shù)驗證用菌株：大

3、腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌。驗證用菌株驗證用菌株：白色念珠菌、黑曲霉。菌株選擇的原則菌株選擇的原則: :代表性,普遍性,低或非致病性,標準菌株(或該藥品中常見的污染菌)。菌種的要求：菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。加菌量:50100cfu。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證驗證方法選擇：驗證方法選擇：平皿法（包括稀釋法）、薄膜過濾法、中和法、離心沉淀法、聯(lián)合方法。樣品稀釋級的選擇：樣品稀釋級的選擇：最低稀釋級，1g或1ml。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂、改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法

4、的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證菌液制備菌液制備 (1)接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)肉湯中，3537培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7，使菌數(shù)約為50100cfu/ml。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證菌液制備菌液制備 (2)接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7，使菌數(shù)約為50100cfu/ml。細菌、霉菌、酵

5、母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證菌液制備菌液制備 (3)接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上， 2328培養(yǎng)57天，加35ml0.9無菌氯化鈉溶液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取 1ml菌液加0.9無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-410-6，使菌數(shù)約為50100cfu/ml。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證供試品的處理：供試品的處理： 固體：10g 供試品+稀釋劑至100ml 液體：10ml供試品+稀釋劑至100ml 抑菌性供試品可采用加中和劑、自然沉降、離心或薄膜過濾。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證 菌液組菌液

6、組 供試品對照組供試品對照組 試驗組試驗組 稀釋劑對照組稀釋劑對照組 每一驗證菌株均應進行上述試驗（順序）。每一驗證菌株均應進行上述試驗（順序）。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證菌液組：菌液組：測定所加的試驗菌數(shù)。平皿法：平皿法：取試驗用的1ml菌液（約50100cfu），分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌落數(shù)。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證 供試品對照組：供試品對照組：取規(guī)定量供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。（和試驗組采用同法）（和試驗組采用同法）細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方

7、法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組：試驗組：平皿法：平皿法：取試驗可能用的最低稀釋級供試液1ml和50100cfu試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌落數(shù)。 細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組：試驗組：培養(yǎng)基稀釋法（平皿法）：培養(yǎng)基稀釋法（平皿法）：取試驗可能用的最低稀釋級供試液1ml分別注入n個平皿，每個平皿再注入50100cfu試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2份，按平皿法測定其菌落數(shù)。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組：試驗

8、組：薄膜過濾法：薄膜過濾法：取規(guī)定量試驗可能用的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗，應在最后一次的沖洗液中加入50100cfu試驗菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。至少要一張膜。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組：試驗組：離心沉淀法：離心沉淀法：取規(guī)定量試驗可能用的最低稀釋級供試液，如供試液含許多藥渣，先以低速500r/min離心35min，取上清液，再以3000 r/min離心1030min，取下面1ml液體（A)，并用適當?shù)南♂寗┫礈旃艿祝瑢⑾礈煲号c液體（A)一起采用平皿法或薄膜過濾法計數(shù)。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證稀釋劑

9、對照組：稀釋劑對照組：若供試液制備需要分散、乳化，中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應的稀釋劑替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml 供試液含50100cfu，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證計數(shù)方法的驗證計數(shù)方法的驗證結(jié)果判斷指標結(jié)果判斷指標試驗組的菌回收率（70%）稀釋劑對照組的菌回收率（70%）細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組的菌回收率計算：試驗組的菌回收率計算： （試驗組菌落計數(shù)-供試

10、品對照組菌落計數(shù)）菌液組%稀釋劑對照組稀釋劑對照組的菌回收率計算：的菌回收率計算： 稀釋劑對照組菌落計數(shù)菌液組% 每一驗證菌株均應進行上述試驗。 驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證 驗證細菌各平皿傾入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。 驗證霉菌、酵母菌各平皿傾入玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。 置規(guī)定溫度培養(yǎng)48或72h,菌落計數(shù)。計算回收率。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證回收率測定舉例回收率測定舉例供試液不用特殊制備方法常規(guī)法常規(guī)法菌液組：菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個平

11、皿（計算平均菌數(shù)：C)供試品對照組：供試品對照組：最低稀釋級供試液1ml/平皿，平行2個平皿（計算供試液平均菌數(shù)：B）試驗組：試驗組：最低稀釋級供試液1ml+ 1ml菌液/平皿，平行2個平皿（計算供試液平均菌數(shù)：A）回收率回收率=(=(A AB)B)C C% %細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證回收率測定舉例回收率測定舉例供試液不用特殊制備方法培養(yǎng)基稀釋法（培養(yǎng)基稀釋法（5 5個平皿）個平皿）菌液組：菌液組：1ml菌液/平皿，每株菌平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：C)供試品對照組：供試品對照組：最低稀釋級供試液1ml分別注5個平皿，0.2ml /平皿，平行2份，共10

12、個平皿（計算0.2ml供試液平均菌數(shù)：B）試驗組：試驗組：最低稀釋級供試液0.2ml+1ml菌液/平皿，注5個平皿，平行2份（計算平均菌數(shù)：A)回收率回收率=(=(A AB)B)C C% %細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證 培養(yǎng)基稀釋法可以是1ml供試液注2個、5個或更多個平皿。但是更多的平皿由于操作繁瑣易污染一般不做。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證回收率測定舉例回收率測定舉例供試液需用特殊制備方法（如加中和劑或乳化劑等)常規(guī)法常規(guī)法菌液組：菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個平皿（計算平均菌數(shù)：C)供試品對照組：供試品

13、對照組：最低稀釋級供試液1ml /平皿，平行2個平皿（計算供試液平均菌數(shù)：B）細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組：試驗組：最低稀釋級供試液1ml+ 1ml菌液/平皿，平行2個平皿（計算供試液平均菌數(shù)：A）稀釋劑對照組：稀釋劑對照組：稀釋劑+加中和劑或乳化劑 + 1ml菌液， 平行2個平皿（計算供試液平均菌數(shù)：D）試驗組回收率試驗組回收率=(AB)C%稀釋劑對照組回收率稀釋劑對照組回收率=DC%細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證回收率測定舉例回收率測定舉例供試液需用特殊制備方法（如加中和劑或乳化劑等)培養(yǎng)基稀釋法（培養(yǎng)基稀釋法（5

14、 5個平皿）個平皿）菌液組菌液組：1ml菌液/平皿，每株菌平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：C)供試品對照組供試品對照組：最低稀釋級供試液1ml分別注5個平皿， 0.2ml /平皿，平行2份，共10個平皿（計算0.2ml供試液平均菌數(shù)：B）細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組試驗組：最低稀釋級供試液0.2ml+ +加中和劑或乳化劑1ml菌液/平皿，平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：A)試驗組回收率試驗組回收率=(AB)C%稀釋劑對照組稀釋劑對照組：稀釋劑+加中和劑或乳化劑+ 1ml菌液，平行2個平皿（稀釋劑對照組與試驗組同法操作）（計算平均菌數(shù)：D)稀釋劑對照組回收率稀釋

15、劑對照組回收率=DC%細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證回收率測定舉例回收率測定舉例供試液需用特殊制備方法（離心沉淀法）供試液需用特殊制備方法（離心沉淀法）菌液組：菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個平皿（計算平均菌數(shù)：C)供試品對照組：供試品對照組：最低稀釋級供試液10ml +離心，500rpm離心取上清，加稀釋劑至10ml ，取1ml 注平皿，平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：B)或3000rpm離心取沉淀，加稀釋劑至10ml ，取1ml 注平皿，平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：B)細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證試驗組：試驗組：

16、最低稀釋級供試液10ml+離心，500rpm離心取上清，加稀釋劑至10ml，取1ml+1ml菌液/平皿，平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：A)或3000rpm離心取沉淀，加稀釋劑至10ml，取1ml+1ml菌液/平皿，平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：A)試驗組回收率試驗組回收率=(=(A AB)B)C C% %稀釋劑對照組稀釋劑對照組：取與菌液組細菌濃度相同的稀釋劑10ml， 3000rpm離心取沉淀，加稀釋劑至10ml，取1ml注平皿，平行2個平皿（計算平均菌數(shù)：D)（稀釋劑對照組與試驗組同法操作）稀釋劑對照組回收率稀釋劑對照組回收率= =D DC C% %細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、

17、酵母菌計數(shù)方法的驗證回收率測定舉例回收率測定舉例試液需用特殊制備方法（薄膜過濾法）試液需用特殊制備方法（薄膜過濾法）菌液組：菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個平皿（計算平均菌數(shù)：C)供試品對照組：供試品對照組：含1g或1ml的供試液，過濾沖洗，至少1張膜（菌落計數(shù)：B)試驗組：試驗組：含1g或1ml的供試液，過濾沖洗，+1ml菌液，過濾，至少1張膜（菌落計數(shù)：A)稀釋劑對照組：稀釋劑對照組：稀釋劑+菌液，過濾沖洗，至少1張膜（菌落計數(shù)：D)細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證 過濾細菌的膜貼在預先倒好并預培養(yǎng)過的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，菌面朝上。 過濾霉菌酵

18、母菌的膜貼在預先倒好并預培養(yǎng)過的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平平板上，菌面朝上。試驗組回收率試驗組回收率=(=(A AB)B)C C% %稀釋基對照組回收率稀釋基對照組回收率= =D DC C% %細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證計數(shù)方法的確定計數(shù)方法的確定 細菌計數(shù)方法與霉菌和酵母菌計數(shù)方法可以不一致。 細菌以各試驗菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）的回收率均能達到70%以上的檢測方法為準。 霉菌和酵母菌以各試驗菌（白色念珠菌、黑曲霉）的回收率均能達到70%以上的檢測方法為準。細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證細菌、霉菌、酵母菌計數(shù)方法的驗證計數(shù)方法的驗證計數(shù)方

19、法的驗證結(jié)果判斷結(jié)果判斷 在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率應均不低于70%。 若試驗組的菌回收率均不低于70%，則按此供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)能保證檢驗結(jié)果的準確、可靠。 若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于70%，應采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新驗證?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證試驗菌株：試驗菌株：按規(guī)定檢查的控制菌選擇相應驗證的菌株。陰性對照菌株陰性對照菌株: :選擇原則，口服選用金黃色葡萄球菌，外用選用大腸埃希菌 。菌種的要求：菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方

20、法保存。加菌量加菌量: :1010100100cfucfu控制菌檢查法的驗證控制菌檢查法的驗證 驗證試驗按供試液的制備和控制菌檢查法的規(guī)定及下列要求進行。 驗證試驗可與供試品的控制菌檢查同時進行。 試驗組：試驗組：取規(guī)定量供試液及10100cfu試驗菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應控制菌檢查法進行檢查. 陰性菌對照組：陰性菌對照組：設立陰性菌對照組是為了驗證該控制菌檢查方法的特異性，方法同試驗組?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證 控制菌檢查驗證用菌株：控制菌檢查驗證用菌株：大腸埃希菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌 ?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證 口服制劑口服制劑驗證用菌

21、株：驗證用菌株：大腸埃希菌 大腸菌群 沙門菌 陰性對照菌菌株：陰性對照菌菌株：金黃色葡萄球菌 檢查方法：檢查方法：大腸埃希菌按大腸埃希菌項下檢查 大腸菌群按大腸菌群項下檢查 沙門菌按沙門菌項下檢查控制菌檢查法的驗證控制菌檢查法的驗證 外用制劑外用制劑驗證用菌株：驗證用菌株：銅綠假單胞菌 金黃色葡萄球菌 生孢梭菌 陰性對照菌菌株：陰性對照菌菌株：大腸埃希菌檢查方法：檢查方法：銅綠假單胞菌按銅綠假單胞菌項下檢查 金黃色葡萄球菌按金黃色葡萄球菌項下檢查 生孢梭菌按生孢梭菌項下檢查控制菌檢查法的驗證控制菌檢查法的驗證驗證方法選擇：驗證方法選擇：常規(guī)法、稀釋法、薄膜過濾法、中和法、離心沉淀法、聯(lián)合方法。

22、供試品量：供試品量：1g或1ml，沙門菌檢查為10g。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：營營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、膽鹽乳糖增菌液、MUG培養(yǎng)基、膽鹽乳糖發(fā)酵管、四硫磺酸鹽增菌液、膽鹽硫乳瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、溴代十六烷三甲胺平板、甘露醇氯化鈉平板、0.1%皰肉培養(yǎng)基、含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂平板。控制菌檢查法的驗證控制菌檢查法的驗證菌液制備菌液制備 接種大腸埃希菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3537培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7，使菌數(shù)約為10100cfu/ml?？刂凭鷻z查法的驗

23、證控制菌檢查法的驗證 常規(guī)法：常規(guī)法：大腸埃希菌：大腸埃希菌：取相當于1g或1ml供試品的供試液至100ml膽鹽乳糖增菌液，陽性菌對照加入大腸埃希菌10100cfu，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌10100cfu，3537培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)物0.2ml接種至含5ml MUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)培養(yǎng)，觀察熒光及靛基質(zhì)試驗。陽性菌MUG陽性，靛基質(zhì)陽性，則表明該樣品對大腸埃希菌沒有抑菌作用。陰性菌未檢出表明該控制菌檢查方法的專屬性好。若陽性菌未檢出則表明該樣品對大腸埃希菌有抑菌作用，需對供試液進行處理?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證 常規(guī)法常規(guī)法大腸菌群：大腸菌群：取含適量（不少于10ml）

24、的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入含供試品0.1g或0.1ml 、0.01g或0.01ml、0.001g或0.001ml的供試液，陽性菌對照加入大腸埃希菌10100cfu，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌10100cfu， 3537培養(yǎng)1824小時觀察結(jié)果。若陽性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對大腸菌群無抑菌作用且專屬性好。若陽性菌未檢出則表明該樣品對大腸菌群有抑菌作用，需對供試液進行處理?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證 常規(guī)法常規(guī)法沙門菌：沙門菌：取供試品10g或10ml,直接或處理后接種至適量（不少于200ml）營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，混勻，陽性菌對照加入沙門菌10100cfu，陰性菌對照

25、加入金黃色葡萄球菌10100cfu ，3537培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)物1ml接種于10ml四硫磺酸鹽增菌液，培養(yǎng)1824小時后劃線于膽鹽硫乳瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板觀察結(jié)果。若陽性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對沙門菌無抑菌作用且專屬性好。若陽性菌未檢出則表明該樣品對沙門菌有抑菌作用，需對供試液進行處理?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證 常規(guī)法常規(guī)法銅綠假單胞菌：銅綠假單胞菌：取相當于1g或1ml供試品的供試液至100ml膽鹽乳糖增菌液,陽性菌對照加入銅綠假單胞菌10100cfu，陰性菌對照加入大腸埃希菌10100cfu， 3537培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)物劃線接種于溴代十六烷三甲

26、銨平板觀察結(jié)果。若陽性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對銅綠假單胞菌無抑菌作用且專屬性好。若陽性菌未檢出則表明該樣品對銅綠假單胞菌有抑菌作用，需對供試液進行處理。控制菌檢查法的驗證控制菌檢查法的驗證 常規(guī)法常規(guī)法金黃色葡萄球菌：金黃色葡萄球菌：取相當于1g或1ml供試品的供試液至100ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,陽性菌對照加入金黃色葡萄球菌10100cfu，陰性菌對照加入大腸埃希菌10100cfu，3537培養(yǎng)1824小時，取此培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇氯化鈉平板觀察結(jié)果。若陽性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對金黃色葡萄球菌無抑菌作用且專屬性好。若陽性菌未檢出則表明該樣品對金黃色葡萄球菌有抑菌作用，需對供試液進行處理?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證 常規(guī)法常規(guī)法生孢梭菌：生孢梭菌：取相當于1g或1ml供試品的供試液至100ml 0.1%皰肉培養(yǎng)基,陽性菌對照加入生孢梭菌10100cfu陰性菌對照加入大腸埃希菌10100cfu， 3537厭氧培養(yǎng)7296小時，取0.2ml涂抹于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂平板 3537 厭氧4872h觀察結(jié)果。若陽性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對生孢梭菌無抑菌作用且專屬性好。若陽性菌未檢出則表明該樣品對生孢梭菌有抑菌作用，需對供試液進行處理?？刂凭鷻z查法的驗證控制菌檢查法的驗證結(jié)果判斷：結(jié)果判斷： 陰性菌對照組未檢出陰性對照菌，試驗組檢出試驗