ABORhD血型定型檢測試劑卡操作指南演示教學(xué)

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。ABORhD血型定型檢測試劑卡操作指南-輸血相容性檢測培訓(xùn)課件ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作指南【試驗(yàn)?zāi)康暮驮怼緼BO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。對于成年個(gè)體被檢者，紅細(xì)胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應(yīng)關(guān)系。其獨(dú)特性質(zhì)在于：紅細(xì)胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應(yīng)的強(qiáng)反應(yīng)性抗體，如紅細(xì)胞上缺乏A抗原，則可以預(yù)見血漿中存在抗A抗體。常規(guī)的ABO定型必須包括正

2、定型（紅細(xì)胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結(jié)果相互驗(yàn)證，只有正反定型結(jié)果一致時(shí)才能準(zhǔn)確定型。Rh陽性和陰性的鑒定是通過檢測被檢者的紅細(xì)胞上是否有D抗原，有D抗原為Rh陽性，沒有D抗原則為Rh陰性。ABO/RhD血型定型檢測試劑卡采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學(xué)的凝膠分子篩過濾技術(shù)、離心技術(shù)和血型血清學(xué)的抗體特異性結(jié)合在一起，其中抗A凝膠管中灌注了含抗A抗體的凝膠，抗B凝膠管中灌注了含抗B抗體的凝膠，抗D凝膠管中灌注了含IgM抗D抗體的凝膠。A細(xì)胞、B細(xì)胞及Ctr管中灌注了不含血型抗體的凝膠，抗A、抗B及抗D凝膠管用于紅細(xì)胞上A、B及D抗原檢測，而A細(xì)胞、B細(xì)胞及Ctr管用于

3、檢測血漿中的抗體。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)，凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)；而抗原抗體沒有反應(yīng)時(shí)，未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現(xiàn)陰性反應(yīng)?！続BO/RhD血型定型檢測試劑卡的用途】1、用于輸血前檢測（1）鑒定ABO，以備選擇ABO血型相配合的血液用于交叉配血。（2）鑒定RhD血型，以備選擇RhD血型相配合的血液用于交叉配血。2、用于圍產(chǎn)期檢查（1）用于產(chǎn)前夫婦的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)前預(yù)測。（2）用于產(chǎn)后母子的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)后診斷。3、用于常規(guī)ABO、RhD血型化

4、驗(yàn)檢查，如健康體檢等?！緲颖疽蟆?、建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。2、血液樣本在采集后48小時(shí)以內(nèi)檢測?！舅鑳x器設(shè)備及耗材】1、Rh血型分型卡（含抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及自身陰性對照）2、血型血清學(xué)離心機(jī)（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）3、微柱凝膠卡離心機(jī)4、微量移液槍及吸頭【試驗(yàn)操作】按照下列步驟進(jìn)行操作一、被檢血液樣本的處理及反定型A型、B型紅細(xì)胞的準(zhǔn)備步驟操作1EDTA抗凝的血液樣本離心（900-1000g）1分鐘，將上清血漿轉(zhuǎn)入一支1275-mm試管中，余下的壓積紅細(xì)胞備用。如果血漿有不溶物（如混入的紅細(xì)胞）

5、或不澄清透明，則需要將血漿再次離心，直到澄清透明不含不溶物為止。2另取一支1275-mm試管中，加入0.1ml上述步驟1中的壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細(xì)胞。3在一支1275-mm試管中，加入1ml生理鹽水（或Liss液），加入步驟2中得到的壓積紅細(xì)胞10微升，混勻得到0.8-1%濃度的被檢紅細(xì)胞。4將反定型A及B紅細(xì)胞用生理鹽水調(diào)節(jié)到0.8-1%濃度。二、ABO、RhD定型步驟操作1取ABO/RhD血型定型檢測試劑卡一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會(huì)干枯。將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗(yàn)需要撕開封口膜。2用微量移液槍分別向抗A、抗B、抗D孔及Ct

6、r孔的每孔樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45角緩慢加入50微升0.8-1%濃度的被檢者紅細(xì)胞。3向A細(xì)胞孔中加入50微升0.8-1%濃度的A型紅細(xì)胞。4向B細(xì)胞孔中加入50微升0.8-1%濃度的B型紅細(xì)胞。5分別向A細(xì)胞、B細(xì)胞、Ctr孔中加入25微升被檢者血漿。6在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態(tài)，而不是偏向一側(cè)。7將卡放入微柱凝膠卡離心機(jī)離心，LB-3000低速離心機(jī)第一檔離心5分鐘，判讀結(jié)果并記錄?！窘Y(jié)果判讀及解釋】1、反應(yīng)陰、陽性的判讀反應(yīng)圖反應(yīng)強(qiáng)度4+3+2+1+雙群陰性紅細(xì)胞分布凝集紅細(xì)胞在凝膠頂部表面，呈線條形凝集紅細(xì)胞開始進(jìn)入凝膠，但集中在凝膠頂部

7、及上半部分凝集紅細(xì)胞進(jìn)入凝膠內(nèi)部的中下部分凝集紅細(xì)胞集中在凝膠下半部分，且向底部集中離心后凝集的紅細(xì)胞位于凝膠頂部；而陰性紅細(xì)胞集中在微管底部所有紅細(xì)胞通過凝膠，沉積在微孔底部必須注意：如果紅細(xì)胞發(fā)生凝集，預(yù)期其凝集強(qiáng)度2+;如果反應(yīng)弱于2+則需要進(jìn)一步試驗(yàn)才能準(zhǔn)確定型。2、陰陽性結(jié)果解釋-A-B-DAcBcctr管結(jié)果2+02+02+0A型D陽性02+2+2+00B型D陽性002+2+2+0O型D陽性2+2+2+000AB型D陽性2+0002+0A型D陰性02+02+00B型D陰性0002+2+0O型D陰性2+2+0000AB型D陰性【注意事項(xiàng)】1.血液樣本建議是抗凝的樣本，尤其是EDTA抗

8、凝的樣本，以避免紅細(xì)胞凝集塊加入凝膠引起假陽性反應(yīng)。2.按照臨床輸血技術(shù)規(guī)范，血液樣本在采集后應(yīng)該在48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測。3.凝膠卡在使用前需仔細(xì)檢查，若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸、凝膠中有氣泡時(shí)，不可使用。4.撕開凝膠卡封口膜時(shí)，不宜用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。5.被檢的紅細(xì)胞懸液的濃度為0.81%，濃度過高或過低會(huì)影響檢測結(jié)果。6.溶血、脂血、細(xì)菌污染等情況的樣本可影響檢測結(jié)果。7.10.吸附部分無抗體或補(bǔ)體致敏體致敏的被檢紅細(xì)胞在配制成0.8-1%濃度前必須洗滌1次，保證充分去除血漿成分，且沒有纖維蛋白不溶物，否則會(huì)阻擊紅細(xì)胞在微柱凝膠中的沉降，呈現(xiàn)假陽性反應(yīng)。8.在Ctr孔

9、（自身陰性對照）孔結(jié)果為陽性時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果無效?？赡茉蚴怯捎诒粰z紅細(xì)胞已經(jīng)致敏IgM抗體導(dǎo)致自發(fā)凝集，此時(shí)可以用DTT將已經(jīng)致敏到紅細(xì)胞上的IgM抗體破壞后再行Rh分型試驗(yàn)。9.人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫(yī)療生物垃圾廢棄物處理。10.抗D凝膠不能鑒定弱D、部分D（如D）抗原。對于患者，如果抗D凝膠管中患者的紅細(xì)胞反應(yīng)為陰性，則確定為RhD陰性。11.若出現(xiàn)2+的弱陽性反應(yīng)，須做進(jìn)一步試驗(yàn)才能準(zhǔn)確定型，即確認(rèn)弱反應(yīng)是由于被檢者的抗原減弱還是凝膠微孔之間的交叉污染引起。12.若出現(xiàn)混合視野反應(yīng)，需要了解被檢者近期3個(gè)月內(nèi)是否有輸血史，或被檢者是否為骨髓移植患者。13.由于6月齡以

10、下的嬰兒其血漿/血清中不似成人一樣存在可預(yù)見的抗A/抗B抗體，因此只做正定型不做反定型?！続BO正反定型不一致原因分析】如果血型定型正反定型結(jié)果不一致時(shí)，則不能準(zhǔn)確定型，需要分析產(chǎn)生不一致的原因。引起正反定型不一致的原因如下：（一）正定型出現(xiàn)弱反應(yīng)或缺失抗原.亞型、亞型或亞型。.白血病導(dǎo)致或抗原減弱。.何杰金病（Hodgkins）有時(shí)會(huì)抑制抗原表達(dá)，與白血病類似。.由于某種疾病（如腹腔癌、胰腺癌）導(dǎo)致血漿中存在大量的型物質(zhì)，中和抗或抗抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。需要將正定型的紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。.骨髓移植.非ABO同型輸血（二）正定型紅細(xì)胞上多余的抗原反應(yīng).自身凝

11、集紅細(xì)胞、抗體致敏紅細(xì)胞導(dǎo)致。.細(xì)胞未洗滌，血漿蛋白引起的假陽性反應(yīng)。.細(xì)胞未洗滌，血漿中存在針對正定型試劑中某種成分的抗體導(dǎo)致。.骨髓移植。.獲得性B。.B(A)現(xiàn)象。.ABO非相合輸注。（三）正定型出現(xiàn)混合視野反應(yīng).近期輸血.骨髓移植.異卵雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。.胎兒和母體出血。（四）反定型血清中出現(xiàn)弱反應(yīng)或反應(yīng)缺失.年齡相關(guān)：新生兒以及小于6月齡的嬰兒以及老年人。.ABO亞型有亞型抗體，如A2、A2B型人的抗A1。.低球蛋白血癥（如白血病人、使用免疫抑制劑患者、免疫缺陷患者）。.移植患者使用抗排異藥物。.雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。（五）反定型出現(xiàn)多余的抗體反應(yīng).冷自身抗體.特異性冷同種抗體.血清中存在針對試劑紅細(xì)胞保存液成分的抗體。.某些疾病導(dǎo)致球蛋白水平增高（多發(fā)