校內(nèi)課題53項含醫(yī)院總公司藥學院03

1、受理：山東省高校中抗協(xié)同創(chuàng)新中心項目可行性項目名稱：七葉一枝花等 10 種中藥的抗譜研究項目責任：山東中大學：項目項目年限： 2015 年 1月 至 2016 年 12月填報日期： 2015 年 1月 30日填 寫 說 明為建立、規(guī)范的協(xié)同創(chuàng)新項目信息管理制度，加強項目信息的管理，特設(shè)計山東省高校中抗協(xié)同創(chuàng)新中心項目可行性（申報書）格式和填寫要求。一、請嚴格按照表中要求填寫各項。二、項目可行性可以由一家組織，也可以由多家聯(lián)合組織，牽頭為項目組織實施的責任。每個項目只能有一家責任和一個組長。三、項目可行性由項目責任編寫，并報中抗協(xié)同創(chuàng)新中心管理匯總；四、項目可行性中第一次出現(xiàn)外文名詞時，要寫清全

2、稱和縮寫，再出現(xiàn)同一詞時可以使用縮寫。五、組織機構(gòu)代碼是指項目責任組織機構(gòu)代碼證上的標識代碼，它是由組織機構(gòu)代碼管理中心所賦予的唯一法人標識代碼。六、編寫應(yīng)客觀、填報材料，尊重他人知識，遵守國家有關(guān)知識。在項目可行性中他人研究成果時，必須以腳注或其他方式注明出處，目的應(yīng)是介紹、評論與自己的研究相關(guān)的成果或說明與自己的研究相關(guān)的技術(shù)問題。對于、篡改科學數(shù)據(jù)，他人著作、或者剽竊他人科研成果等科研不端行為，一經(jīng)查實，將記入信用。七、此表為項目可行性的基本信息，請務(wù)必填寫正確。一、項目基本信息項目名稱七葉一枝花等 10 種中藥的抗譜研究預(yù)計完成時間2016 年 12 月預(yù)期成果類型論著、責任信息名稱山

3、東中大學性質(zhì)大專院校通訊地址山東省濟南清大學科技園區(qū)250355所在地區(qū)山東省濟南清區(qū)主管部門山東省衛(wèi)生廳053189628060組織機構(gòu)代碼49554084-1傳真號碼053189628060成立時間1958-7-8電子信箱cheng項目組長信息女出生日期1970-10-27正高級最高學位博士從事專業(yè)中藥化學固定移動傳真號碼電子信箱證件類型證件號碼聯(lián)合信息序號1山東省醫(yī)學基礎(chǔ)醫(yī)學23項目經(jīng)費來源（萬元）總經(jīng)費35項目經(jīng)費35企業(yè)投資其他二、項目簡介簡述項目目標和內(nèi)容，限 500 字以內(nèi)性疾病頻發(fā)，嚴重人類健康和社會安全。而抗藥物匱乏、易產(chǎn)生耐藥性，研制滯后，使抗藥物研發(fā)成為世界的科學問題。中

4、藥具有多組分、多靶點、低毒副作用等特點，已成為抗藥物研發(fā)的重要領(lǐng)域。本課題在傳統(tǒng)中理論指導(dǎo)下，采用溶劑提取、色譜分離的方法，分別提取分離七葉一枝花、白花蛇舌草、半枝蓮、龍膽、蒼耳子、蟬蛻、地榆、兒茶、防風、苦參等 10 味中藥的藥效部位、組分及成分；在建立的中抗協(xié)同創(chuàng)新中心 庫的基礎(chǔ)上，對庫中的 23 株分別以其敏感細胞進行擴增，并以細胞病變法測定毒力（TCID50）；用 10 種中藥分離純化得到的不同提取部位、組分及成分分別對 23 種做體外抗實驗，獲得這些提取成分的抗指數(shù)及細胞毒性等，最終明確其抗譜及抗效價；采用 LC-MS、GC-MS 等進行活性部位及組分的檢測與表征；采用 UV、IR、

5、HRMS、NMR 等方法確定活性成分的化學結(jié)構(gòu)；開展抗活性組分（成分）作用機制研究，確定其抗侵染不同環(huán)節(jié)的作用。在上述研究基礎(chǔ)上針對相應(yīng)，優(yōu)選抗最佳組分配伍，力爭發(fā)現(xiàn)并確定 12 個療效確切的抗中藥組方配方，為研發(fā)抗中藥新藥奠定基礎(chǔ)。二、項目立項的必要性分析立項的意義是危害人類健康的重要，人類健康迫切要求發(fā)現(xiàn)新的安全有效的抗藥物，抗藥物的研發(fā)屬于國家重點鼓勵支持的研究領(lǐng)域。SARS、甲型、H7N9 流感、呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀等傳染病的爆發(fā)和，都給人類生命和健康帶來嚴重。由引起的疾病多具有傳染性強、高、流行面廣及率高等特點，是人類至今尚不能有效控制的世界難題。隨著的不斷變異，新型性疾病的逐漸呈上升

6、趨勢。在傳統(tǒng)中學中，雖無這一名稱，但有關(guān)對性疾病的治療早有記載，并在數(shù)千年的臨床應(yīng)用中積累了豐富的經(jīng)驗，國內(nèi)外科研工作者已從中草藥中篩選和尋找到一些高效抗藥物。中藥抗作用無論在史料記載還是現(xiàn)代的臨床應(yīng)用中，都具有明顯優(yōu)勢，中藥的多組分、多靶點是其副作用小、抗譜廣、耐藥性低的物質(zhì)基礎(chǔ)；現(xiàn)代臨床與藥理藥效研究表明，中藥具有抑制和侵染細胞、提高抗免疫活性、以及調(diào)節(jié)宿主細胞炎性因子合成和等作用，充分體現(xiàn)了中藥治療疾病的多組分、多治療靶點特點和優(yōu)勢。因此以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，結(jié)合現(xiàn)代科學技術(shù)，基于中藥及其復(fù)方，以中醫(yī)臨床實踐作藥效基礎(chǔ)，從中提取分離中藥的藥效部位和組分，并進行抗譜篩選，發(fā)現(xiàn)并研制具有藥效物質(zhì)

7、明確、作用機制清晰、安全高效等特點的抗中藥組分配方，并確定其最佳配伍關(guān)系，研發(fā)具有獨立知識的中藥新藥，不僅符合中藥現(xiàn)代化的需要，而且對人類的生命健康、國家社會安全均具有意義。國內(nèi)外研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢中 抗 具有顯著優(yōu)勢中 抗 最早見于黃帝內(nèi)經(jīng)；東漢 所著的傷寒雜病論一直被公認為中國傳統(tǒng)醫(yī)學疫病防治的開篇之作；建國以來，溫病學的理論和方法廣泛用于臨床，在對流感、天花、小兒麻痹癥、 性肝炎、流行性腮腺炎、 性流行性 熱、 等許多危害健康的傳染病的預(yù)防和控制上發(fā)揮了巨大作用。國內(nèi)中抗研究始于上世紀 70 年代，當時主要采用體外細胞病變法篩選和評價中藥抗效果；近 20 年來，中藥抗研究不斷深入，尤其是

8、 2003 年 SARS 突發(fā)，研究小組總結(jié)的 SARS 發(fā)病特點、證候特征、病機及治療方案，被 WHO 頒布的SARS 中醫(yī)治療方案收錄，在應(yīng)對 SARS 中現(xiàn)代醫(yī)學理論和試驗技術(shù)在中藥抗的研究應(yīng)用中應(yīng)用，使中抗進入一個新的，有效成分的分離成為抗中藥研究的重點。2009 年爆發(fā)，研究小組制定的中防治甲型流感診療方案，為范圍內(nèi)中及時、安全、有效應(yīng)對提供指導(dǎo)。目前，國外抗藥物的篩選研究，主要也是從天然生物中提取、分離有效成分，并采用多種分子生物學手研究其結(jié)構(gòu)與抗分子機理間的關(guān)系?，F(xiàn)代臨床與藥理藥效研究表明，中藥具有抑制病毒和侵染細胞、提高抗免疫活性、以及調(diào)節(jié)宿主細胞炎性因子和等作用，充分體現(xiàn)了中

9、藥治療疾病的多組分、多靶點的特點和優(yōu)勢。經(jīng)過 20 多年的發(fā)展，中藥抗研究有了較大的飛躍，大量的臨床觀察和實驗研究都證實了中藥治療性疾病的有效性，但中藥抗 目前也存在一定的局限性，如實驗結(jié)果和臨床療效的相互印證，中藥抗療效確切的有效成分分離等。目前國內(nèi)市場上多種中藥均有抗功效，但其研究不夠深入，抗病毒譜和抗機制方面的闡述較少，因此，開發(fā)研究新型抗中藥，開展深入研究勢在必行。七葉一枝花、白花蛇舌草和半枝蓮等 10 味中藥國內(nèi)外研究現(xiàn)狀七葉一枝花臨床應(yīng)用七葉一枝花性味苦、涼，小毒。歸心經(jīng)、肝經(jīng)、肺經(jīng)、胃經(jīng)、大腸經(jīng)。該植物具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚之功效；主治癰腫瘡毒、咽腫喉痹、乳癰同時對蛇蟲

10、咬傷、跌打傷痛、肝熱等也具有良好的治療作用；現(xiàn)代臨床也常應(yīng)用該藥物治療胃癌、肝癌、肺癌、腦瘤等 疾病。本草綱目載有“七葉一枝花，深山是我家，癰疽如遇我一似手拈拿”，由此可知該中藥的療效；唐本草言其“醋摩療癰腫，敷蛇毒”；滇南本草言其“消諸瘡，無名腫毒，利小便”。中醫(yī)認為，七葉一枝花有清熱解毒、涼肝定驚之功，適用于多種熱毒瘡瘍、咽喉腫痛、痄腮、毒蛇咬傷、驚癇、高熱神昏等。藥理作用現(xiàn)代藥理研究表明，該中藥對流感 有抑制作用，具有清熱解毒，散瘀消腫，治療咽喉腫痛等療效，并且有一定的平喘、止咳作用。 珊等曾用其水及醇提取物進行抗 研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其提取物對甲型和亞洲甲型流感 有較強的抑制作用，其煎劑對金

11、黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、腦膜炎雙球菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌和綠膿桿菌均有不同程度的抑制作用，對黏質(zhì) 桿菌有擴散色素作用，對腸道桿菌、化膿性球菌等多種細菌具有一定抑制作用；王強等研究表明七葉一枝花提取物具有很強的細胞毒活性，對癌瘤 RNA 逆轉(zhuǎn)錄酶均有抑制作 用，從而達到抗腫瘤的良好效果；七葉一枝花具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用；另外有研究發(fā)現(xiàn)，七葉一枝花提取物能顯著抑制小鼠耳腫廓脹和小鼠足趾腫脹等癥狀，降低炎癥組織中 PGE2 的含量從而達到 、鎮(zhèn)痛的功效；同時具有止血、殺毒以及殺精等不同藥理作用?；瘜W成分研究近年來，已有大量關(guān)于七葉一枝花植物的化學成分的研究，并從中分離鑒定了 50 余種化合物。

12、主要包括：甾體類、黃酮苷、氨基酸、脂肪酸酯、生物堿、多糖、鞣質(zhì)、肌酸酐、微量元素等。其中甾體類化合物主要包括：甾體皂苷、植物蛻 、植物甾醇和甾烷苷，甾體皂苷是該藥物的主要活性成分，含量占化合物的 80%以上，主要為薯蕷皂苷元和偏諾皂苷元；黃酮苷主要包括山萘酚-3-O-鼠李糖(14)-葡萄糖苷、山奈酚、蘆丁、楊霉素等物質(zhì)；另外七葉一枝花含 18 種氨基酸及肌酸酐，以丙氨酸、天冬酰胺、-氨基丁酸、-氨基異丁酸、天冬氨酸、絲氨酸和谷氨酸為最高；脂溶性成分主要包括油酸、亞油酸、棕桐酸、硬脂酸、花生烯酸等；還包括 Fe、Cu、Zn、Mn、Mg、Ca 等微量元素。2.2.2.2 白花蛇舌草臨床應(yīng)用白花蛇舌

13、草別名白花 草、蛇舌癀、鶴舌草，為茜草科草本植物，全草入藥。其功用主治及應(yīng)用散見于各種地方志中，諸如廣西中藥雜志、 本草、 本草等記載白花蛇舌草具有清熱解毒、活血化瘀、利濕通淋等功效，常用于癰腫瘡毒、腸癰腹痛、癥積痞塊、熱淋澀痛、濕熱黃疸、蛇蟲咬傷等病癥的治療。在臨 經(jīng)常用于各類腫瘤的治療如 性支氣管癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌、淋巴癌等；白花蛇舌草注射液治療急性上呼吸道 ，頑固性咽部膿腫以及小兒扁桃體炎等，療效顯著； 等采用白花蛇舌草煎劑聯(lián)合光量子療療毛囊閉鎖性三聯(lián)征（膿腫性穿掘性毛囊周圍炎、聚合性痤瘡、化膿性汗腺炎總稱）有效率為 100%；另外，白花蛇舌草單味藥或經(jīng)復(fù)方配伍還可以治療腎病、消化

14、系統(tǒng)疾病、痤瘡、甲狀腺病、頑固性 濕疹、 疾病以及毒蛇咬傷等。藥理作用樸紅梅等通過藥理實驗探討了白花蛇舌草對哮喘小鼠氣道炎癥的治療作用及其作用機制，結(jié)果顯示白花蛇舌草治療組與哮喘組小鼠相比炎癥細胞計數(shù)、IL-4，IL-5，IL-13 以及 NF-B p65表達水平均顯著降低而 IFN- 水平則上升，且具有顯著性差異，說明白花蛇舌草通過阻斷 NF-B p65 表達，下調(diào)哮喘小鼠 BALF 中 IL-4，IL-5，IL-13 水平，同時上調(diào) BALF 中 IFN- 水平以及降低炎細胞數(shù)量，從而抑制氣道炎癥；許 等研究發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草不同萃取物均具有較強抗氧化能力，其中粗多糖提取物抗氧化活性顯著；另外

15、，不同研究發(fā)現(xiàn)白花蛇舌草中的 6-O-( E) -p-香豆酰雞屎藤苷甲酯對 癌細胞有 抑制增殖作用；水提物能明顯抑制 k562 細胞的生長和白血病 CEM 細胞增殖；乙醇提取物抑制肺 A459 細胞增殖并且對結(jié)腸癌 HT-29 細胞具有顯著抑制作用，白花蛇舌草多糖提取物 PEHD 對多發(fā)性骨髓瘤細胞株 RPMI8226 具有增殖抑制及促進凋亡作用?；瘜W成分白花蛇舌草主要化學成分包括萜類、黃酮類、蒽醌類、苯丙素類、香豆素類、揮發(fā)油類、含酸化合物、多糖類、甾醇類、及其他類。萜類化合物包括三萜化合物和環(huán)烯醚萜化合物兩大類，環(huán)烯醚萜類是本品的主要萜類成分主要包括去乙酰車苷、雞屎苷甲酯、O -去氫京苷、

16、車苷、雞屎苷、(Z) -6-O-香豆酰雞屎苷甲酯、山柑子酮等；三萜類化合物主要有果酸、熊果酸、雙香豆酸、酸、山柑子酮、異山柑子醇等；黃酮類成分為山柰酚和槲以及二者的單糖苷和雙糖苷，少量成分還有雙黃酮和黃酮醇等；蒽醌類成分以茜草素型為主，也有少量屬于大型，包括 2-甲基-3-羥基蒽醌、2-甲基-3-羥基-4-甲氧基蒽醌、2-羥基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌、2，6-二羥基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌等；苯丙素和香豆素類成分如對羥基桂皮酸十八酯、7-羥基-6-甲氧基香豆素等；另外，等在白花蛇舌草中研究發(fā)現(xiàn)了己醛、2-戊基-呋喃、檸檬烯、冰片、長葉薄荷酮等 29 種揮發(fā)性成分并且對其多糖含量進行了測定，

17、甾醇類包括 -谷甾醇、3-羥基豆甾-5，22-二烯-7-酮等；熊果酸、果酸、香豆酸以及 Se， Mn，Ti，Zn，Mo，Mg，Al，F(xiàn)e，Ca 等微量元素和生物堿、三十一烷、5-羥色胺等化學成分也在白花蛇舌草中被發(fā)現(xiàn)。2.2.2.3 半枝蓮臨床應(yīng)用半枝蓮性 、苦、寒，歸肺、肝、腎經(jīng)，是中醫(yī)處方和中成藥中的常用中藥，具有清熱解毒、化瘀利尿的功效。近代對其功效和主治記載也很多， 本草記載半枝蓮主要具有清熱、解毒、祛風、散血等功效；內(nèi)服主 、吐血，外用治癰疽、疔瘡、毒蛇咬傷、無名腫毒；江西草藥記載了其清熱解毒之功效；浙江藥用植物志中曾記載了半枝 咽喉腫痛之功效；福建藥物志記載“半枝蓮主治瘡瘍腫毒、痢

18、疾、吐血、 、肝炎、肺結(jié)核、淋巴腺炎、癌腫、胃痛、風濕關(guān)節(jié)痛、小兒高燒、 、乳腺炎、蛇頭疔、頸淋 核、角膜炎、狂犬及毒蛇咬傷”等臨床應(yīng)用。藥理作用藥理實驗研究發(fā)現(xiàn)：半枝蓮總黃酮具有很好的抗作用，從細胞學機制探討發(fā)現(xiàn)該功能可能是通過改善細胞膜性，維持細胞膜的正常功能來發(fā)揮抗的作用；另外分離得到的部分黃酮類化合物均具有較好的抗幽門螺桿菌活性作用；半枝蓮總生物堿對革蘭氏陽性菌，特別是對金黃色葡萄球菌的抑菌作用較強；等通過藥理實驗證明半枝蓮中含有的紅花素有較強的對抗由組織胺引起的平滑肌收縮作用，同時還有較好的祛痰作用，是治療慢性支氣管炎的有效成分；大量藥理實驗證明半枝蓮醇提物具有顯著抑制腫瘤增殖活性作

19、用，謝等發(fā)現(xiàn)半枝蓮不同提取物抗腫瘤效果顯著，推測其作用機理是通過增強機體免疫力來實現(xiàn)其抗腫瘤作用的；通過動物移植性腫瘤藥理實驗發(fā)現(xiàn)半枝蓮多糖具有體內(nèi)抗腫瘤作用和免疫增強作用；半枝蓮中黃酮類化合物有較強的清除羥基基的能力從而良好的抗氧化作用；另外有藥理實驗證明半枝蓮還具有保肝、抗炎、抗動脈粥樣硬化等功能?；瘜W成分半枝蓮全草主要成分包括：黃酮類化合物、生物堿、二萜類化合物、酚類，甾體、多糖等。其中黃酮類成分研究較多，主要包括野黃芩苷、紅花素、異紅花素、柚、粗毛豚草素、2S-5,7,3,4-四羥基二氫黃酮、4-羥基漢黃芹素、5,7,4-三羥基黃酮、5,7,4-三羥基-6-甲氧基酮、半枝蓮素、5,2,

20、6-三羥基-7,8-二甲氧基黃酮-2-O-D-葡萄糖苷等；目前已從中分離得到二萜類化合物包括半枝蓮二萜(Sculone)A、B、C、D、E、F、G、H 和半枝蓮內(nèi)酯(Seuterivalaetone)A、 B、C、D 和 C2；甾體類化合物菜油甾醇、膽甾醇、豆甾醇、-谷甾醇、-谷甾醇、豆甾-4-烯-3-酮、豆甾-5,22-二烯-3-醇、豆甾-3,5,22-三烯、豆甾-5,22-二烯-3-醇-乙酸酯、甾烷-4, 6,22-三烯-3 醇、乙酸谷甾醇、植物甾醇-D 葡萄糖苷等；許益民等從半枝蓮中分離得到半枝蓮多糖 SBP、BP 鼠李糖、糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖等；現(xiàn)代分離技術(shù)還得到了半枝蓮堿

21、(seutebarbatins)A、B、C-F，芳香醛、酮、酸以及十六酸、油酸、亞油酸、硬脂酸等脂肪族化合物；半枝蓮還含有植物街醇(phytosterol)、熊果酸(ursolic acid)、硬脂酸以及半枝蓮酸 (Scularic acid)等成分。2.2.2.4 龍膽(1) 臨床應(yīng)用龍膽為植物條葉龍膽、龍膽、三花龍膽或滇龍膽的干燥根和根莖，性寒味苦，歸肝膽經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉肝膽火之功效，屬清熱燥濕藥。龍膽對慢性支氣管炎和上呼吸道疾病療效顯著；另外對肝膽疾病以及高血壓有一定療效；其復(fù)方龍膽瀉肝湯是中醫(yī)臨床治療肝膽疾病的重要方劑，用于治療傳染性肝炎，慢性乙型肝炎，陽黃黃疸及肝膽濕熱，黃疸型肝

22、炎及慢性膽囊炎都有較好的效果；此外龍膽瀉肝湯對高血壓及肝熱上擾高血壓有較好的治療效果；用龍膽瀉肝湯治療濕熱蘊于下焦所致腎盂腎炎、機型炎、等癥均有較好效果；龍膽明目湯治療性角膜炎取得較好效果；龍膽瀉肝湯用于治療急性結(jié)膜炎有較好效果。醫(yī)學啟源中記載，以柴胡為主，草龍膽為使，治眼疾中必用之藥也；治黃目赤腫、睛脹、瘀肉高起、痛不可忍；主治秘訣中記載，治下部風濕及濕熱，臍下至足腫痛，寒濕腳氣。藥理作用現(xiàn)代藥理實驗發(fā)現(xiàn)，龍膽具有抗 活性、抗炎解熱作用、保肝、利尿降壓、升血糖等作用。等研究發(fā)現(xiàn)龍膽水提液、抗有效部位 RG2-1 和 RG3-1 在體外對呼吸道合胞( RSV )有明顯抑制作用，且呈明顯的量效關(guān)

23、系；試驗表明，龍膽水提液及 RG2-1 和RG3-1 在細胞水平上具有較強抑制 RSV 的作用；安卓鈴等研究證明龍膽草提取物與龍膽苦苷具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛、耐缺氧及抗疲勞作用，其抗炎機理與抑制多種炎癥介質(zhì)的活性有關(guān)； 慧等通過實驗研究發(fā)現(xiàn)龍膽草提取物與龍膽苦苷具有明顯的保肝作用，保護肝細胞的機制與其對抗基致脂質(zhì)過氧化密切相關(guān)；另外，中藥藥效學研究表明龍膽對消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、甲狀腺等都具有一定的治療作用?；瘜W成分龍膽化學成分主要包括環(huán)烯醚萜類、三萜類化合物、黃酮類、口山酮類、生物堿等化合物。環(huán)烯醚萜類主要以其甙類形式存在，最常見的是龍膽苦甙（gentiopicroside）、當藥甙（swe

24、roside）、當藥苦甙（swertiamarin）等，還包括：4-O-D-glucopyranosylgentiopicroside、gentiotrifloroside、 olivieroside、scabraside、loganicacide、benzylalcohol 等；三萜類化合物主要包括果酸、熊果酸及其衍生物等，（20S）-dammara-13（17），24-dien-3-one、-香樹脂醇、-谷甾醇-烏蘇醇、 -香樹脂醇乙酸酯、-香樹脂醇、-香樹脂醇棕櫚酸酯、-香樹脂醇棕櫚酸酯；黃酮類成分文獻不多，目前已分離得到的多數(shù)為異葒草苷、異牡荊甙衍生物、2-對羥基苯-異葒草苷-4-O-

25、D-葡萄糖苷、2-對羥基苯-異葒草苷、異葒草苷-3-O-葡萄糖苷、異葒草苷-4-O-D-葡萄糖苷等化合物；口山酮類是龍膽地上部分所含的主要有效成分之一，主要以苷的形式存在為芒果苷；生物堿類主要包括龍膽堿、龍膽次堿、龍膽醛堿和龍膽黃堿；另外還包括山奈酚、山奈酚-7-O-L-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-L-鼠李糖苷、異金雀花素、異金雀花素-7-O-葡萄糖苷、藤黃菌素-7-O-D-葡萄糖苷等。2.2.2.5 蒼耳子臨床作用蒼耳子始載于 本草經(jīng)，“蒼耳子，主治風頭寒痛，風濕 ，四肢拘 ，惡肉死肌，膝痛，久服益氣”。蒼耳子味苦、甘、辛，性溫，歸肺、肝經(jīng)。中醫(yī)認為其發(fā)散風寒、通鼻竅、祛風濕、止痛；常用于風寒

26、感冒、鼻淵、風濕痹痛、風疹瘙癢等證；臨床用于治療腰腿痛、反應(yīng)性鼻炎、慢性鼻炎、瘧疾、下肢潰瘍、腮腺炎等。藥理作用現(xiàn)代藥理研究表明蒼耳子具有抗 、抑菌、抗炎、抗癌、抗氧化、 作用，還能對呼吸系統(tǒng)、心 系統(tǒng)、血液系統(tǒng)以及免疫功能產(chǎn)生影響。臨床藥理實驗發(fā)現(xiàn)蒼耳子提取液對單純皰疹 有一定作用，表明蒼耳子確有抑制 作用；蒼耳子煎劑在體外對乙型肝炎多聚糖具有直接抑制作用，表明其有抗肝炎 作用；蒼耳子煎劑在體外還對金黃色葡萄球菌、炭疽桿菌、 球菌、乙型鏈球菌和白喉桿菌等多種微生物具有較強的抑制作用；蒼耳子或乙醇提取物對紅色發(fā)癬菌具有抑制作用；蒼耳子所含的二萜羥酸蒼術(shù)甙經(jīng)大鼠角叉菜膠水腫實驗表明有抗炎作用；在

27、配合化療、放療時，蒼耳子具有 癌細胞，抑制癌瘤增殖的作用；蒼耳子能有效地減少脂質(zhì)過氧化作用，降低組織過氧化脂質(zhì)含量，從而達到抗氧化作用；蒼耳子中所含白色結(jié)晶性甙可使正常家兔血糖下降；蒼耳子對純種小鼠的細胞免疫和體液免疫功能均有明顯抑制作用；另外，蒼耳子還具有鎮(zhèn)咳、降壓、抗凝血、抗腫瘤和細胞毒活性、抑制微生物生長等作用?；瘜W成分蒼耳子主要包括揮發(fā)油、脂類、苷類、脂肪油類、甾類、倍半萜類以及其他化學成分。其中揮發(fā)油種類較多，經(jīng)水蒸汽蒸餾法提取，GC-MS 聯(lián)用技術(shù)進行分析鑒定出壬醛、反式烯、-、2-壬烯醛、2-癸二烯醛、-芹子烯、十八烷醇、十九烷醇、二十烷醇、十五烷、十六烷、十七烷、十九烷、二十烷

28、、二十一烷、2,6,10,14-四甲基十五烷、2,6,10,14-四甲基十六烷等；其衍生物含百合內(nèi)酯、醋酸辛酯、十六酸乙酯、雙氫蒿本內(nèi)酯等；苷類有、羧基以及其它苷類衍生物等；蒼耳子中脂肪油含量較大，干燥果實含量達 92%，皂化后脂肪酸中含亞油酸 64.2%、油酸 26.8%、棕櫚酸 5.3%、硬脂酸 3.63%；蒼耳子中還含有酒石酸、琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸及多種氨基酸等；用甲醇提取經(jīng)苯萃取，皂化后分離得豆甾醇、-谷甾醇、菜油甾醇；而油脂未皂化物中則含 、 及 -谷甾醇；甾醇的糖苷類衍生物，如 -谷甾醇-D-葡萄糖苷；倍半萜類化合物有蒼耳農(nóng)、蒼耳亭等；另外有研究發(fā)現(xiàn)了 3 種 成分：毒蛋白、氫

29、醌和毒苷（但未鑒定）；近期又從蒼耳子中分離純化得到蒼耳子凝集素。2.2.2.6 蟬蛻臨床應(yīng)用蟬蛻，別名蟬退、蟬衣、蟬殼等，蟬科昆蟲羽化后的蛻殼。蟬蛻具有散風除熱、解毒消炎、止咳平喘、清肺利咽、解表透疹、明目退翳、平肝息風、安神定志、解痙之功；用于風熱感冒、疔腫毒瘡、支氣管哮喘、咽痛、音啞、麻疹不透、風疹瘙癢、目赤翳障、驚風、破傷風等的治療。臨用蟬蛻與其他藥物配伍治療呼吸系統(tǒng)（風熱、風寒類感冒、咳嗽以及風疹等）、心腦系統(tǒng)（冠心病不穩(wěn)定型心絞痛等）、泌尿系統(tǒng)（腎炎等）、神經(jīng)系統(tǒng)（各型癲癇）、皮膚科（瘙癢癥、蕁麻疹、銀屑病等）、五官科（耳聾、鼻炎、失音、角膜混濁等）、兒科（小兒驚風、夜啼、高熱、腦膜

30、炎、喘咳、癥、脫肛）等疾??；此外，臨床應(yīng)用表明其還具有治療產(chǎn)后尿潴留和抗動脈粥樣硬化的作用。藥理研究現(xiàn)代藥理研究表明，該中藥具有 、鎮(zhèn)痛、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、解痙等作用。蔡等研究表明蟬蛻復(fù)方抗戾散在細胞培養(yǎng)上具有明顯的抗 作用，隨著濃度的加大，其抗效應(yīng)增強，抗戾散的細胞無毒劑量即為最佳抗 劑量，而且其抗 效果隨著藥物對細胞作用時間的延長而增強，該復(fù)方還具有一定的誘生干擾素作用；研究發(fā)現(xiàn)蟬蛻具有免疫抑制及抗過敏作用，其提取物能抑制非特異性免疫，對型反應(yīng)及機體細胞免疫功能也有明顯抑制作用；張美玉研究發(fā)現(xiàn)蟬蛻水提物具有明顯的鎮(zhèn)咳、 祛痰、平喘作用；韓國學者 Ming-Zhe Xu 等的研究證明，

31、從蟬蛻中分離得到的 2 個乙酰多巴胺二聚體成分均有抗炎和抗氧化活性；此外該中藥還具有抗驚厥、抗腫瘤、抗凝、紅細胞膜保護等藥理作用，對平滑肌、對及妊娠、心、血壓、 呼吸、心率及肝腎功能也有一定的影響。化學成分蟬蛻中的氨基酸類成分，其中游離氨基酸 12 種，水解氨基酸 17 種。相對含量以丙氨酸、脯氨酸和天冬氨酸等最高；絲氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸、和 氨基丁酸次之；異亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸較低；纈氨酸、鳥氨酸、蛋氨酸等量最低；2000 年，學者 Naoki NODA 等從蟬蛻中分離得到 2 個乙酰多巴胺二聚體成分和 4 個酚類化合物單體；2006 年，韓國學者 Ming-Zhe Xu

32、 等從蟬蛻中分離得到 1 個新的乙酰多巴胺二聚體成分(2R，3S)2(3，4二羥苯基)3乙酰氨基7(N乙?；?氨乙烯基)1，4哌氧環(huán)烷；此外，蟬蛻中還 蛋白質(zhì)、甲殼素、可溶性鈣及 24 種微量元素，其中鋁的含量最高，其次是鈣、鐵、鋅、錳，眾所周知，微量元素中磷和鎂對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有著重要的調(diào)節(jié)作用。2.2.2.7 地榆臨床應(yīng)用地榆味苦、酸，性微寒。歸肝、胃、大腸經(jīng)。該植物具有涼血止 熱解毒、消腫斂瘡之功效。主治吐血、 、衄血、尿血、便血、痔血、血痢、崩漏、赤 下、瘡癰腫痛、濕疹、陰癢、水火燙傷、蛇蟲咬傷等。臨床用于治療便血、痔血、血痢、崩漏、水火燙傷、痛腫瘡毒等病癥。歷代本草專著對地榆抗 有所論

33、述。藥品化義記載地榆“解諸熱毒癰”；藥物圖考記載地榆“調(diào)敷湯火傷，疳瘡潰爛”；中華本草記載“地榆性涼，有瀉火解毒，涼血消腫之功，適宜于癰疽腫毒初起未成膿者，可單用搗敷，亦可與三七、 研磨調(diào)敷”；“地榆外用有斂瘡收濕作用；治燒燙傷，可用本品研末，或配大黃粉，以麻油調(diào)敷，以減少滲出，減輕疼痛；治療皮膚濕疹，皮膚潰爛，可用本品與苦參，大黃同煎，以紗布蘸藥汁濕敷；亦可配煅石膏粉、枯礬或 粉加凡士林調(diào)膏外涂，以助清熱收濕止癢斂瘡之功”。藥理作用現(xiàn)代藥理研究表明，該中藥對乙型肝炎 具有抑制作用，具有止血、抗氧化、抗腫瘤、抗過敏、抗炎、抑菌、保護細胞損傷、升白保髓等藥理作用，并且有一定的調(diào)節(jié)免疫作用。C g

34、 TH 等人 了地榆等 4 種中藥 80水提液的抗鴨乙型肝炎 作用，其結(jié)果表明 4 種提取物通過 DHBV DNA 聚合酶的活性，降低 DHBV DNA 濃度，對 DHBV 有抑制作用； 等在研究了虎杖和地榆單獨抑菌的基礎(chǔ)上，進一步探討了兩藥的不同比例組合對金黃色葡萄球菌、甲型鏈球菌、表皮葡萄球菌、枯草桿菌、變形桿菌和綠膿桿菌的體外抗菌作用；通過給小鼠耳部涂抹地榆鞣質(zhì)實驗發(fā)現(xiàn)，該中藥可明顯抑制巴豆油誘發(fā)的耳腫脹；黨氏等測定了地榆對家兔血液流變學的影響，結(jié)果表明其具有抗凝血作用；此外，還有文獻 地榆有抗腫瘤、增強免疫、鎮(zhèn)吐、保護作用胃粘膜等作用，可抑制紫外線 B 導(dǎo)致的大鼠皮膚光損傷，對過氧化亞

35、硝酸鹽所致的腎損傷也有保護作用?；瘜W成分地榆植物中主要含有單萜苷類、三萜及其苷類、黃酮及其苷類、酚類、鞣質(zhì)類以及有機酸類等多種化學成分。主要有香茅醇-1-O-L-呋喃 糖基-（16）-D-吡喃葡萄糖苷、香葉醇-1-O-L-呋喃 糖基-（16）-D-吡喃葡萄糖苷、香葉醇-1-O-L-吡喃 糖基-（16）-D-吡喃葡萄糖苷、citronellol-1-O-L-arabinofuranosyl-(16)-D-glucopyranoside、 3-(-L-arabinopyranosyl)-oxy-19-hydroxyurs-12-en-28-oic acid 、 28-D-glucopyranosi

36、de (ziyu-glycoside I,5),3,19-hydroxyolean-12-en-28-oic acid 、 28-D-glucopyranoside 3,19- dihydroxyurs- 12-en-28-oic acid、28-D-glucopyranoside、沒食子酸、兒茶素、單酯型 二聚體、鞣花酸 3,3,4-O-逆沒食子酸、3-O-甲基沒食子酸甲酯、大黃酚大 甲醚、 (+)-catechin、槲 、山奈酚、ziyu glycoside I、daucosterol、熊果酸、3-羥基-28-去甲 -17, 19, 21-三烯、阿魏酸、-谷甾醇等。2.2.2.8 兒茶臨床

37、作用兒茶性味苦、澀、微寒。歸肺、心經(jīng)。本草綱目記載兒茶“清膈上熱，化痰生津，涂金瘡，一切諸瘡，生肌定痛，止血，收濕”；本草正記載其“降火生津，清痰涎咳嗽，煩熱，止消渴，吐血，衄血，便血，尿血，濕熱痢血，及婦人崩淋不止，小兒疳熱，口疳，熱瘡，濕爛諸瘡，斂肌長肉，亦殺諸蟲。該植物具有活血療傷，止血生肌，收濕斂瘡，消肺化痰之功效”；中醫(yī)主治跌打損傷，瘡瘍，濕瘡，牙疳，下疳，痔瘡，肺熱咳嗽等；現(xiàn)代臨床應(yīng)用該藥物治療炎癥、燒燙傷、口瘡、頑固性皮膚潰瘍、濕疹、皰疹、腹瀉等疾病。藥理作用現(xiàn)代藥理研究表明，該中藥對流感 、乙型肝炎 有一定的抑制作用。(+)-兒茶素對 MDCK 細胞中流感 A-PRS 的生長具

38、有良好的抑制作用。 等用流感 鼠肺適應(yīng)株 A/FM/1/47（ ） 的小鼠 為模型，研究兒茶提取物對流感 機體免疫功能的影響，兒茶提取物可顯著增強 2,4-二硝基氟苯（DNFB）誘發(fā)的小鼠 DTH 反應(yīng)，增強小鼠 T 細胞免疫功能的作用； 等 鴨乙型肝炎 （DHBV）模型，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兒茶素類成分在抗 、降低轉(zhuǎn)氨酶活性及減輕肝臟病理損傷方面作用明顯； 等通過兒茶對 308 株臨床菌株的體外抗菌活性研究結(jié)果表明，兒茶對革蘭氏陽性球菌、蘭氏 桿菌均有很好的抑菌效果；近來通過對 11 種天然藥物的抑菌作用研究發(fā)現(xiàn)，兒茶對內(nèi)氏放線菌的生長和產(chǎn)酸有一定的抑制作用；此外，兒茶還有升高白細胞數(shù)目、抗血小板

39、、調(diào)血脂、抗心衰、抗心律失常、防治腫瘤、抗脂質(zhì)過氧化、改善脂代謝與腎功能等作用?；瘜W成分現(xiàn)代化學研究已從兒茶中分離得到兒茶鞣酸、兒茶素、表兒茶素、赭樸鞣質(zhì)、非瑟素、槲、槲皮萬壽菊素、原兒茶鞣質(zhì)和焦性沒食子酚鞣質(zhì)、兒茶鞣質(zhì)、兒茶熒光素、沒食子酸、鞣花酸、兒茶酚、兒茶紅等；還得到兒茶鉤藤堿 AE 以及鉤藤堿、異鉤藤堿、圓葉帽木堿、二氫 因堿。 等從兒茶乙酸乙酯部位中分離出 12 個化合物，分別鑒定為對-羥基苯甲酸(4-hydroxybenzoic acid)、山柰酚(kaempfero)、槲 (quercetin)、3,4c,7-三羥基-3c,5-二甲氧基黃酮(3,4c,7-trihydroxy-

40、l3c,5-dimethoxyflavone)、兒茶素(catechin)、表兒茶素(catechin)、豆素(afz-elechin)、表豆素(afzelechin)、mesquitol、ophioglonin、香橙素(aromadendrin)和苯酚(pheno)等。2.2.2.9 防風臨床應(yīng)用防風，始載于 本草經(jīng)，主治“大風頭眩痛，惡風， ，目盲無所見，風行周身，骨節(jié)疼痹，煩滿，久服輕身”，可見防風可以治療外感 ，具有祛風之功效；總體來看諸家本草將防風的功效歸為祛風，勝濕； 認為防風“祛風解表，勝濕止痛，止痙”；除此之外，文獻記載里的防風臨床應(yīng)用非常靈活，經(jīng)不同配伍之后除祛風除濕功效以外

41、，還分別具有升陽運脾、散郁火、補虛、 、通絡(luò)、通竅、載藥上行、順氣通便、疏肝、 、息風止痙等作用。藥理作用現(xiàn)代藥理實驗證明，防風及其復(fù)方水煎液具有一定的抑制流感 A3 的作用；防風 95%乙醇提取物能顯著降低傷寒、副傷寒甲乙三聯(lián)菌苗致熱大鼠體溫；防 煎液對酵母、蛋白凍及傷寒、副傷寒甲菌苗精制破傷風類毒素混合制劑致熱大鼠有解熱作用，防風煎劑與浸劑對人工發(fā)熱家兔出現(xiàn)明顯的解熱作用；在平板法體外抑菌實驗中，防風對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、 雙球菌及兩種酶菌(產(chǎn)黃青酶、雜色曲酶)等均有抑制作用；在巴豆油涂耳致炎實驗中發(fā)現(xiàn)，防 煎液能降低炎癥模型中 PGE2 的含量，以及毛細 通透性而起到抗炎作

42、用；防風能提高小鼠巨噬細胞的吞噬能力，具有增強非特異性免疫功能的作用；防 煎液具有協(xié)同戊巴比妥鈉的 作用；另外，藥理實驗證明防風具有鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗過敏、抗凝血、止血以及抗驚厥等諸多作用?；瘜W成分防風主要化學成分包括：揮發(fā)性成分、色原酮成分、香豆素類成分、多糖類成分、有機酸類等。其中揮發(fā)性成分有庚醛、-蒎烯、-蒎烯、香素、桉油腦、辛烯醛、2-壬酮、戊醛、樟腦、薄荷腦、辛酸、長葉薄荷酮、壬酸、檜烯、1甲基3( 1異丙基)苯、辛酸甲酯、2-辛酮、苯、香松烯、月桂烯、冰片烯、E2壬烯醛等；國內(nèi)外學者對防風中色原酮 類 成 分 研 究 比 較 深 入 ， 從 防 風 中 分 離 鑒 定 出 升 麻 素

43、 (cimifugin) 、 升 麻 素 苷 (prim-o-glucosylcimifugin)、亥茅酚 (hamaudol)、亥茅酚苷 (sec-o-glucosylhamaudol)、3-O-乙酰亥茅酚(3-O-acetylhamaudol) 、漢黃芩素(wogonin) 等成分； 香豆素類成分主要有補骨脂素 (psoralen)、香柑內(nèi)酯 (bergapten)、( imperation)、異(isoimperation)、紫花前胡苷元(nodakenetin)、花椒毒素(xanthotoxin)、東素(scopoletin)等；防風中酸性雜多糖類成分 XC-1、XC-2，平均分子量為

44、 13100 和 73500學者從防風中分得三種均一多糖 SaponikovanA、 B、C，其分子量分別為 54000、280000、132000；從防風超臨界 CO2 萃取物中鑒定出有機酸類成分的甲酯化衍生物，如 2-(E)-壬烯二酸甲酯、10-十一碳烯甲酯、十四烷酸甲酯、十五烷酸甲酯、7-十六烷酸甲酯；其他還包括甘油酯類、胡蘿卜苷、腺苷(adeno-sine)及微量元素鋅、鍶、鉻、鎳鉬等。2.2.2.10 苦參臨床應(yīng)用苦參始見于本草經(jīng)，異名水槐(本經(jīng))，苦骨(綱目)，地槐、白莖(別錄)，川參(民間方藥集)；現(xiàn)代認為，苦參苦寒，歸心、肝、胃、大腸、經(jīng)；功能清熱燥濕、殺蟲、利尿。藥性論云：“

45、能治熱毒風，皮肌煩燥生瘡，赤癩眉脫，主除大熱嗜唾治心腹積聚”；名醫(yī)別錄評價苦參：“養(yǎng)肝膽氣除伏熱腸小便，治惡瘡”；本草經(jīng)百種錄言“癥瘕積聚，苦極則能泄。黃疸，寒能除郁熱除癰腫，諸瘡皆屬心火，心火清則癰腫自去也”；本草綱目“苦參、黃柏之苦寒，皆能補腎，蓋取其苦燥濕，寒除熱也”；本草崇原認為“苦參苦主下泄，故逐水；苦能清熱，故除癰腫”。藥理研究陳亞苦參素治療慢性患者，發(fā)現(xiàn)苦參素對慢性療效較好，能改善癥狀，促進肝功能恢復(fù)，對有一定的抑制作用，且用藥中未見不良反應(yīng)；現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿、氧化苦參堿及槐果堿等具有鎮(zhèn)痛、解熱降溫等中樞抑制作用，對小鼠腦中遞質(zhì) -氨基丁酸和甘氨酸含量的影響具有降壓作用，

46、對腦水腫有防治作用；等采用 K-B 紙片擴散法研究苦參水煎液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌以及變形桿菌的影響，結(jié)果顯示，苦參水煎液對上述細菌均有明顯抑制作用；苦參堿能有效抑制人肝癌細胞株的增殖，能誘導(dǎo)腫瘤細胞分化和凋亡；誘導(dǎo)細胞分化時廣泛的組 DNA 甲基化水平升高； 抑制腫瘤內(nèi)皮細胞增殖、降低粘附因子活性；另外，苦參還具有抗心律失常、抗、中樞抑制、抗過敏、平喘、利尿以及保護骨髓升高白細胞的作用?；瘜W成分苦參化學成分：從苦參中分離鑒定了氨基酸類、糖類、脂肪酸類、三萜皂苷類、甾醇類、生物堿類、黃酮類、二烷基色原酮、醌類、香豆素類等成分。氨基酸類和糖類成分共鑒定出天冬氨酸、蘇氨

47、酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸、精氨酸、脯氨酸等，還分離鑒定了蔗糖；目前已從苦參中分離的到50 多種黃酮類化合物，按黃酮類化合物的骨架劃分多數(shù)為二氫黃酮和二氫黃酮醇類，少數(shù)為黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、查耳酮類和雙環(huán)系黃酮類；苦參中的生物堿類成分，主要成分為苦參堿、氧化苦參堿、異苦參堿、苦參烯堿、異槐果堿等；等從苦參中分離鑒定了三葉豆紫檀苷、異去氫 羊藿素、7-甲氧基-4-羥基異黃酮、7-甲氧基香豆素等；另還苦參中還含有揮發(fā)油類、糖類、有機酸類、內(nèi)酯類、-谷甾醇等成分。三、項目內(nèi)容和研究方案研究目標和考核指標研究目標分別提取分離七

48、葉一枝花、白花蛇舌草、半枝蓮、龍膽、蒼耳子、蟬蛻、地榆、兒茶、防風、苦參等 10 味中藥的藥效部位、組分及成分；針對 23 種開展 10 味中藥的至少 50 個部位、100 個組分、50 個成分的抗譜研究，確定其抗活性、活性程度和抗譜，篩選抗活性部位、組分及成分；優(yōu)化抗活性組分（成分）的配伍，力爭發(fā)現(xiàn) 12 個抗最佳中藥組分配方。3.1.2 考核指標完成 10 味目標中藥藥效部位和組分的提取與分離；完成其抗譜篩選，得到 23 個活性組分（或成分）；在抗活性篩選的基礎(chǔ)上，優(yōu)化抗組方配伍，力爭發(fā)現(xiàn) 12 個療效確切的抗病毒中藥組分配方；（3相關(guān) SCI累計 IF3，重點培養(yǎng) 12 名青年技術(shù)骨干，

49、培養(yǎng) 35 名、23 名本科生。研究內(nèi)容、研究方案研究內(nèi)容開展10味中藥有效部位、組分、成分的分離 。對七葉一枝花、白花蛇舌草、半枝蓮、龍膽、蒼耳子、蟬蛻、地榆、兒茶、防風、苦參等10味中藥，分別通過溶劑提取與萃取， 不同極性部位；集成不同類型的色譜技術(shù)（硅膠色譜、大孔樹脂吸附、凝膠色譜、鍵合相色譜等），分離、 不同的組分與成分。開展10味中藥抗 譜研究，明確藥材、不同部位的抗 活性、程度及抗 譜；高通量快速 分離純化抗 活性組分及成分。采用 細胞 模型體外病變（CPE法）觀察方法，測定藥材的抗 活性、活性程度，為其是否具有“繼續(xù)分離提取抗 化合物、尋找抗 活性部位或組分”提供可靠依據(jù)；采用

50、庫中所述 譜，采用CPE法每種藥材的抗 譜， 分離目標藥材分離提取物；根據(jù)初步活性和抗 譜檢測結(jié)果，選定一種 細胞 模型為 工具，對目標藥材的化學分離樣品進行全程、全息活性檢測和 ；重復(fù)分離、重復(fù) ，直至確定有效組分、部位或單體?；钚圆课患敖M分的化學表征采用LC-MS、GC-MS等進行活性部位及組分的檢測與表征；采用UV、IR、HRMS、2D-NMR、X-RAY衍射等方法確定活性成分的化學結(jié)構(gòu)?？?組方配伍優(yōu)化篩選在活性物質(zhì)篩選的基礎(chǔ)上，針對相應(yīng) ，優(yōu)選抗 最佳組分配伍，為研發(fā)抗 中藥新藥奠定基礎(chǔ)?？?活性組分（成分）作用機制研究針對篩選出來的抗 活性組分（成分），分別對 吸附細胞的抑制作用、

51、 的阻滯作用（保護作用）、 的抑制作用以及對 的滅活作用開展研究，確定抗 活性所基于的抗 侵染的哪個環(huán)節(jié)發(fā)揮作用。3.2.2 研究方案（1）10 味中藥藥效部位（組分、成分）的分離、藥材提取方法：根據(jù)文獻，所選 10 味中藥七葉一枝花、白花蛇舌草、半枝蓮、龍膽、蒼耳子、蟬蛻、地榆、兒茶、防風、苦參，由于藥物之間存在差異以及提取目標成分不同，所以提取方法也存在一定差別，提取方法主要包括：水煎煮、水蒸氣回流提取、不同濃度的醇回流提取、超聲、浸提和 CO2 超臨界萃取等方法。根據(jù)文獻提供的方法，結(jié)合所選 10 味中藥各自的特征，設(shè)計以下提取方案：七葉一枝花、龍膽、地榆和兒茶等 4 味藥主要成分包括苷

52、類、有機酸和生物堿等，故選擇水煎煮方法進行提?。豢鄥⒅饕煞譃樯飰A使用水煎煮或者乙醇回流提取的方法進行提??；防風和蒼耳子含有揮發(fā)油和油脂類成分較多，因此考慮選用傳統(tǒng)水蒸氣蒸餾法或者 CO2 超臨界萃取法，根據(jù)需要也會考慮使用乙醇回流提??；白花蛇舌草和半枝蓮一般都是全草入藥，主要成分為黃酮和蒽醌類物質(zhì)，選擇使用乙醇回流提取的方法進行提?。幌s蛻是所選藥材中唯一一味動物藥，主要含有氨基酸、多糖等物質(zhì)，為了盡量避免提取方法對其有效成分造成損失或破壞，決定將蟬蛻粉粹后使用水超生提取方法進行提取。匯總?cè)缦拢褐兴幉乃幱貌课豢茖儆行Р课粩M采用的提取方法七葉一枝花 根莖 百合科重樓屬 苷類水煎法龍膽 根和根莖

53、龍膽屬 苷類、生物堿水煎法地榆根 薔薇科地榆屬 有機酸、鞣酸水煎法兒茶 去皮枝、干燥的 豆科合歡屬 生物堿水煎法煎膏苦參根豆科槐屬生物堿水煎法或乙醇回流提取法防風根傘形科防風屬揮發(fā)油揮發(fā)油：共水蒸餾法或者 CO2 超蒼耳子成熟帶總苞的菊科油脂、揮發(fā)油界萃取法果實其他：乙醇回流提取蟬蛻動物藥動物藥氨基酸，多糖水超聲提取白花蛇舌草全草茜草科耳草屬黃酮、蒽醌乙醇回流提取半枝蓮全草唇形科黃芩屬黃酮乙醇回流提取不同極性部位的 ：對于不同提取方法得到的浸膏，采用不同極性溶劑提取、萃取的方法，進一步分離、 ；可采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等溶劑，通過索氏提取、萃取等方 備不同極性部位。組分與成分的分離、 ：

54、采用硅 色譜、聚酰胺柱色譜、大孔吸附樹脂柱色譜、凝 色譜等不同類型色譜固定相，采用經(jīng)典柱色譜、Flash 系統(tǒng)、中低壓 液相色譜、 型高效液相色譜等色譜技術(shù)，對不同的極性部位進行分離純化；采用高效液相色譜檢測、抗 活性 ，對不同的組分進一步分離、純化，篩選抗 活性成分。（2）抗 譜研究與抗 活性組分及成分的高通量快速 分離純化針對分離 的不同部位、組分和成分，采用標準 株或臨床分離 株進行抗 譜或活性檢測，通過觀察 的細胞病變效應(yīng)的發(fā)生率，計算半數(shù)抑毒濃度和半數(shù) 濃度，并以兩者比值計算抑毒指數(shù)，以指數(shù)大小判斷其抗 活性?？?譜研究涉及的 類型有流感 （甲、乙），副流感 ，呼吸道合胞 ，麻疹 ，

55、腮腺炎 ，腺 （3、5），鼻 、coxB16，HSV12，HCMV，EBV，乙腦，EV71，coxA16，輪狀 SA11 等。 庫中 23 株 進行擴增及毒力測定（TCID50）a 的擴增分別將凍存于-80的 23 株 的 液以 200L/100mL 細胞培養(yǎng)瓶的接種量接種各自的敏感細胞，37、5%CO2 培養(yǎng)。每天觀察細胞病變（CPE），培養(yǎng)至 CPE 達“+”（細胞病變達 75%-100%），將細胞瓶放入-80冰箱反復(fù)凍化 3 次，無菌離心管收集細胞懸液，普通離心機 4，1000r/min 離心 5min，去除細胞碎片，取上清，分裝，寫 、登記后-80冰凍存放，作為毒種備做毒力測定和用于體

56、外抗 試驗。b TCID50 測定首先 96 單層細胞，傳細胞后培養(yǎng)一天，即長成單層即可。取 0.1mL 原液用細胞維持液做 10 倍比系列稀釋（10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9），依次接種于單層細胞板，每孔 100L，每個稀釋度重復(fù) 3 孔。37、5% co2 培養(yǎng)， 觀察細胞病變，培養(yǎng)滿 96h（4 天）時， 高于 50%和低于 50%病變孔的 稀釋度。每孔加中性紅染液 100L，37作用 2h，棄上清，PBS 生理鹽水充分洗滌后去除懸浮 ，每孔加酸乙醇 100L 脫色，輕振 5min，在酶標儀（波長 540nm） 吸光度值，計算兩個

57、稀釋度的細胞存活率或病變率。Reed-Muench 法計算組織培養(yǎng)半數(shù) 量（TCID50）。計算比距，獲得 TCID50。TCID50 的兩個計算公式：公式 1：2-6、2-7、2-8、2-9），將各稀釋度中藥分離組分以每孔100L加入培養(yǎng)板，每稀釋度設(shè)3個復(fù)孔，同時設(shè)正常細胞對照組。37、5%CO2條件培養(yǎng)，觀察CPE，連續(xù)觀察5d。根據(jù)Reed-Muench公式計算中藥分離組分的半數(shù)毒性濃度（TC50）。b 藥物半數(shù)有效濃度測定首先將敏感細胞傳代，接種96孔細胞培養(yǎng)板，待細胞鋪滿單層后棄去96中的培養(yǎng)液，用200L/孔PBS洗滌兩遍。將中藥分離組分從最高濃度起做2倍比系列稀釋（2-1、2-

58、2、2-3、2-4、2-5、2-7、2-8、2-9），將各稀釋度中藥分離組分與等體積含100個TCID的稀釋液混合，50于37作用1h后，接種于準備好的長有單層細胞的96，每稀釋度重復(fù)3孔，同時設(shè)細胞對照組、對照組及陽性藥物對照組。37、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，在對照組出現(xiàn)90以上病變時終止培養(yǎng)。光學倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。觀察各孔病變率，并用中性紅染色，在540nm吸光度值，根據(jù)各孔病變率用ReedMuench方法計算中藥分離組分抑制的半數(shù)有效濃度（IC50）。藥物抑毒指數(shù)的計算抑毒指數(shù)又稱選擇指數(shù)，能最直觀的反應(yīng)藥物抗 作用的強弱，抑毒指數(shù)越大抗 效果越好。抑毒指數(shù)（TI）TC50/IC50

59、。高抑毒指數(shù)中藥分離組分的篩選以及抗 譜的確定整理實驗數(shù)據(jù)，分析每種中藥分離的不同組分中抗 活性最好的部分或成分，并與其他中藥具有抗 活性的分離組分進行比較。明確每種中藥具有抗 活性的分離組分或成分，并確定其抗 譜。針對需要活性篩選的 ，采用以下實驗方案：正 ：以 、H2N3 甲型流感 ，乙型流感 為檢測指標，采用MDCK（狗腎傳代細胞） 模型，通過CPE方法評價抑毒效果。副黏 科：以麻疹 （Ad-3）、呼吸道合胞 （RSV）、腮腺炎 （MPV）、仙臺（SV，乙型副流感 ）為檢測指標，分別通過Vero細胞、Hep-2細胞、人胚肺（HEL）細胞、BHK21細胞模型，通過CPE方法和血凝效價評價抑

60、毒效果。皰疹科 ：HSV-1、HSV-2、人巨細胞 （Human Cytoegola , HCMV）為檢測指標，分別采用人胚腎（Human Embryo Kidney, HEK）細胞 模型和人胚肺（Human Embryo g,HEL）細胞 模型，通過CPE 方法評價抑毒效果。小RNA 科：腸 屬的 A16(手足口病原)、EV71(手足口病原)、 B1B6，肝 科的甲肝 株（EV72）、鼻 屬的鼻 。均可采用MA104 細胞、RD 細胞感染模型通過CPE方法評價抑毒效果。腺 科：采用腺 3型、腺 5型為測活目標，以HEK細胞 模型評價抑毒效果。冠狀科：采用SARS-CoV BJ01為測活目標，