人參皂苷具有很高的抗腫瘤作用

1、人參皂苷具有很高的抗腫瘤作用腫瘤嚴(yán)重危害人類健康，目前腫瘤的主要治療方法包括手術(shù)、放療、化療和生物治 療。腫瘤化療的目的在于通過化療藥物殺傷腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的死亡或阻止其增 殖。但絕大多數(shù)藥物其細(xì)胞毒性缺乏特異性，造成正常細(xì)胞的死亡，特別是增生活躍的 造血干細(xì)胞，導(dǎo)致骨髓移植及全身毒性等并發(fā)癥，影響治療效果和患者依從性。因而近 年來從天然藥物中尋找高效低毒的抗腫瘤藥物成為研究熱點(diǎn)。人參皂苷 Rh2 是從人參中 提取的天然活性成分，眾多研究表明，其具有很高的抗腫瘤活性，而對正常細(xì)胞無毒副 作用，與其它化療藥物(如順鉑)聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同作用。人參皂苷 Rh2 抗腫瘤機(jī)制非常 廣泛，但主要通過調(diào)

2、控腫瘤細(xì)胞增殖周期、誘導(dǎo)細(xì)胞分化和凋亡來發(fā)揮抗腫瘤作用。將 腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化成正常細(xì)胞有利于控制腫瘤發(fā)展，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡使細(xì)胞解體后形 成凋亡小體，不引起周圍組織炎癥反應(yīng)。人參皂苷 Rh2 也可以通過調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體免疫 功能，發(fā)揮其抗腫瘤作用。1、人參皂苷Rh2對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的誘導(dǎo)分化作用。曾小莉等以MTT法、光鏡、電子顯微鏡觀察人參皂苷Rh2對SMMC-7721細(xì)胞增殖、 形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)的影響。用免疫組化染色和ELISA法檢測細(xì)胞漿中甲胎蛋白 (alpha-fe to pro tein,AFP )合成情況，酶促反應(yīng)試劑盒檢測細(xì)胞漿中堿性磷酸酶 (alkaline phosp

3、hatase,ALP)和丫 谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(Y -glutamyltranspeptidase, Y -CT)活性，放射免疫法檢測細(xì)胞AFP和白蛋白(albumin,Alb)分泌量，并觀察人參皂 苷 Rh2 對以上指標(biāo)的影響。結(jié)果表明人參皂苷 Rh2 以時間依賴性和濃度依賴性抑制 SMMC-7721細(xì)胞增殖，10p g/ml人參皂苷Rh2作用6天抑制率達(dá)50%；而20p g/ml人 參皂苷Rh2作用4天抑制率近50%。經(jīng)20p g/ml人參皂苷Rh2作用4天，肝癌細(xì)胞形 態(tài)及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)向正常肝細(xì)胞方向逆轉(zhuǎn)。10p g/ml、20p g/ml人參皂苷Rh2作用 SMMC-7721 細(xì)胞后， AFP

4、 合成明顯下降；分泌量從6.600.30 下降到 2.350.06； Y -CT 及耐熱型 ALb 活性顯著降低； ALP 活性及 ALb 分泌量顯著升高。2、人參皂苷 Rh2 對人肝癌 Bel- 7404 細(xì)胞增殖和凋亡的影響。南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院姜浩、樊光華采用 MTT 比色法觀察人參皂苷 Rh2 對體外培養(yǎng) 的 Bel-7404 細(xì)胞生長的抑制作用；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞和細(xì)胞周期變化；采 用免疫組化S-P法檢測藥物處理前后凋亡相關(guān)基因產(chǎn)物P 53、Bax 和 Bcl-2 蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示， Bel-7404 細(xì)胞經(jīng)人參皂苷 Rh2 作用后生長受抑 制，呈劑量依賴性和時間依賴性，半

5、數(shù)抑制濃度(IC50)為27. 6p g/ml。流式細(xì)胞儀檢 測證實，人參皂苷Rh2能誘導(dǎo)Bel-7404細(xì)胞凋亡。當(dāng)人參皂苷Rh2濃度由12. 5p g/ml 增加至50. 0p g/ml時，細(xì)胞凋亡率(AR)依次升高；但人參皂苷Rh2濃度進(jìn)一步增 加時，AR未見相應(yīng)升高。人參皂苷Rh2可將細(xì)胞周期阻滯于G1期。人參皂苷Rh2處理 細(xì)胞后，突變型P 53表達(dá)下調(diào)而Bax表達(dá)上調(diào)，Bcl-2在人參皂苷Rh2處理前后無明顯 變化。3、人參皂苷 Rh2 對 C6 膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。李殿友等采用細(xì)胞計數(shù)法檢測細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和凋亡。結(jié)果發(fā) 現(xiàn)，人參皂苷Rh2 2，4

6、，8p mol/L對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞有增殖抑制作用，且呈明顯量效 關(guān)系；人參皂苷Rh2作用72h后，4p mol/L濃度對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用最為明 顯；人參皂苷Rh2作用后，G0/G1期細(xì)胞百分率明顯下降，而S期細(xì)胞百分率顯著增加。 表明人參皂苷Rh2對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞有明顯的增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用，且這種作用有 周期特異性。4、人參皂苷Rh2對食管癌細(xì)胞Eca-109周期的影響。河北醫(yī)科大學(xué)李麗、齊鳳英應(yīng)用MTT法測定人參皂苷Rh2對細(xì)胞的生長抑制作用， HE染色后光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)和Wes tern blot檢測細(xì)胞周期調(diào) 控因子cyclinE，CDK2,p 21W

7、AF1基因蛋白表達(dá)，采用半定量RT-PCR檢測基因mRNA 表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rh2對Eca-109細(xì)胞生長有抑制作用，并呈劑量、時間依賴 性。20p gml-1人參皂苷Rh2作用1 d后細(xì)胞達(dá)到半數(shù)抑制，作用3 d的Eca-109 細(xì)胞較對照細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞形態(tài)向正常細(xì)胞方向逆轉(zhuǎn)。細(xì)胞周期分析顯示，隨 著人參皂苷Rh2藥物劑量的增加，G0/G1期細(xì)胞數(shù)逐漸增加，S和G2/M期細(xì)胞數(shù)逐漸減 少，10p gml-1和20p gml-1人參皂苷Rh2處理組和對照組比較有顯著性差異。 20p gml-1人參皂苷Rh2處理細(xì)胞后，隨著作用時間延長，cyclinE和CDK2蛋白及 其mRNA

8、表達(dá)水平逐漸增高，而P21WAF1蛋白及其mRNA表達(dá)水平逐漸降低。結(jié)論：人 參皂苷Rh2可以將人食管癌細(xì)胞Eca-109阻滯于G0/G1期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，并且通 過影響細(xì)胞周期調(diào)控因子cyclinE，CDK2, p 21WAF1基因的表達(dá)抑制食管癌細(xì)胞的增殖。5、人參皂苷Rh2聯(lián)合順鉑應(yīng)用對人喉癌細(xì)胞Hep-2的作用。徐洪君等將體外培養(yǎng)的喉癌細(xì)胞Hep-2分別加入終濃度為0.5、1.0、2.0、5.0p g/m 1的順鉑（DDP）、終濃度為10、20、30、40p g/m 1的人參皂苷Rh2，以及終 濃度為20p g/m 1的Rh2分別聯(lián)合終濃度為0.5、1.0、2.0、5.0p g/m

9、 1的DDP， 設(shè)空白對照組，待藥物作用48小時后，分別用光學(xué)顯微鏡、MTT法、流式細(xì)胞儀（Flow cytometry, FCM）、熒光顯微鏡檢測培養(yǎng)細(xì)胞的作用效果。結(jié)果在光鏡下可見正常喉癌 細(xì)胞生長密集。細(xì)胞呈梭型或多角型，細(xì)胞彼此之間相接觸。在低劑量Rh2組和DDP 組，可見細(xì)胞數(shù)量略減少，細(xì)胞形態(tài)無明顯改變。在高劑量Rh2組和DDP組，細(xì)胞數(shù)量 明顯減少，可見細(xì)胞碎片。而低劑量Rh2和低劑量DDP聯(lián)合應(yīng)用后，可獲得與高劑量 Rh2組和DDP組相同的效果。MTT結(jié)果顯示Rh2、DDP單獨(dú)應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用都呈劑量依賴 性增加抑制喉癌細(xì)胞的生長。低劑量Rh2和低劑量DDP聯(lián)合應(yīng)用，可明顯抑制喉

10、癌細(xì)胞 生長。FCM顯示Rh2和DDP單獨(dú)應(yīng)用，可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而聯(lián)合應(yīng)用可獲得較單獨(dú)應(yīng)用 更為明顯的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡效應(yīng)。吖啶橙染色顯示各用藥組均可見細(xì)胞胞膜出芽、染色質(zhì) 凝集、核片段化及凋亡小體等典型的細(xì)胞凋亡特征?？梢姡藚⒃碥誖h2及DDP均可誘 導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡，二者聯(lián)合應(yīng)用后呈現(xiàn)出協(xié)同作用，可發(fā)揮更為明顯的抗癌作用，因此 可相應(yīng)減少DDP用量，從而降低毒副作用。6、人參皂苷 Rh2 對肺腺癌耐藥細(xì)胞促凋亡作用的研究。中南大學(xué)湘雅醫(yī)院胡碩等用MTT法分別檢測順鉑和Rh2對A549細(xì)胞、A549 DDP 細(xì)胞的抑制率（IC）。將Rh2作用于A549 DDP細(xì)胞，Hoechst 33258染色

11、熒光顯微鏡下 觀察細(xì)胞核形態(tài)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞跨膜電位（屮）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)順鉑對A549細(xì)胞、 A 549 DDP 細(xì)胞的 IC50 分別為 24p mol/l、325p mol/l，耐藥指數(shù)為 13.54。Rh210 M mol/l時，對A549 DDP細(xì)胞有明顯抑制作用，且與Rh2的濃度有一定的依賴關(guān)系。 Rh2作用后A549 DDP細(xì)胞核縮小或變形，熒光成團(tuán)塊分布，有凋亡小體形成；細(xì)胞線 粒體跨膜電位顯著性降低（P 0.01） o結(jié)論：Rh2能促使A549 DDP細(xì)胞凋亡。7、人參皂苷Rh2體外對小鼠黑色素瘤細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用。夏麗娟、韓銳以小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞為模型，研究了人參皂苷Rh

12、2對B16細(xì)胞的 分化誘導(dǎo)作用，結(jié)果表明，Rh2在10mg/l濃度下，對B16細(xì)胞有較強(qiáng)的分化誘導(dǎo)作用， 表現(xiàn)為黑色素生成能力明顯增加；形態(tài)向正常上皮樣細(xì)胞分化；細(xì)胞呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；黑色 素顆粒增加；生長變緩慢。酪氨酸是黑色素合成的限速酶，控制黑色素的合成，用 10mg/l 濃度的Rh2作用細(xì)胞，4 d后酪氨酸活力明顯升高，與黑色素生成能力成正比，說明Rh2 可誘導(dǎo)B16細(xì)胞向正常色素細(xì)胞分化。8、人參皂苷Rh2注射液對荷肝癌(H22)小鼠免疫功能的影響。大連市中醫(yī)研究所葛迎春等以荷肝癌(H22)小鼠為實驗?zāi)Ｐ?，觀察人參皂苷Rh2 注射液對荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、血清溶血素、NK細(xì)胞毒活性和

13、IL-2免疫指 標(biāo)的影響。結(jié)果表明，人參皂苷Rh2注射液能提咼荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能和 促進(jìn)荷瘤小鼠血清中羊紅血球抗體生成。NK細(xì)胞是細(xì)胞免疫中非特異部分，荷肝癌 (H22)模型組小鼠的NK細(xì)胞活性處于嚴(yán)重低下狀態(tài)，而人參皂苷Rh2注射液高、中劑量 組與荷瘤組比較NK細(xì)胞殺傷活性有明顯增強(qiáng)。IL-2主要是由活化的輔助性T淋巴細(xì)胞 產(chǎn)生的細(xì)胞因子，IL-2具有自身正向免疫調(diào)節(jié)作用，但在大多數(shù)荷瘤機(jī)體，IL-2系統(tǒng) 處于明顯的抑制或紊亂，荷瘤小鼠的IL-2活性低于正常組，而人參皂苷Rh2注射液高 劑量組顯著提高IL-2活性。人參皂苷Rh2注射液通過調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，發(fā)揮 其抗腫瘤作用。綜上所述，人參皂苷Rh2可以通過調(diào)控腫瘤細(xì)