血小板血型系統(tǒng)培訓課件

1、教學內(nèi)容血小板血型抗原及其抗體血小板血型檢測技術(shù)血小板血型的臨床應用適合型血小板輸注10/5/20221血小板血型系統(tǒng)教學內(nèi)容血小板血型抗原及其抗體10/3/20221血小板血型教學目的重點掌握：血小板輸注無效掌握：血小板血型檢測技術(shù)熟悉：血小板血型抗原及其抗體 血小板血型的臨床應用了解：適合型血小板輸注10/5/20222血小板血型系統(tǒng)教學目的重點掌握：血小板輸注無效10/3/20222血小板血一、血小板血型抗原及其抗體10/5/20223血小板血型系統(tǒng)一、血小板血型抗原及其抗體10/3/20223血小板血型系（一）血小板血型抗原定義: 指用同種免疫抗體檢測出 的血小板表面抗原分類：血小板相

2、關抗原 血小板特異性抗原10/5/20224血小板血型系統(tǒng)（一）血小板血型抗原定義: 指用同種免疫抗體檢測出 11. 血小板相關抗原(platelet-associated antigen)定義：血小板表面存在的與其他細胞或 組織共有的抗原分類：紅細胞血型系統(tǒng)相關抗原(ABO等） 組織相容性抗原（HLA）10/5/20225血小板血型系統(tǒng)1. 血小板相關抗原(platelet-associate血小板上的紅細胞血型抗原存在ABO、Lewis、I和P抗原缺失Rh、Duffy、Kell、Kidd和Lutheran系統(tǒng)的抗原10/5/20226血小板血型系統(tǒng)血小板上的紅細胞血型抗原10/3/2022

3、6血小板血型系統(tǒng)血小板HLA系統(tǒng)血型抗原Chromosome 6DPDQDRBCAClass IIClass I存在HLA-A和B位點的抗原HLA-C位點的抗原未發(fā)現(xiàn)HLA-DP、DQ和DR等位點抗原。但經(jīng)細胞因子刺激，可產(chǎn)生HLA-DR抗原 10/5/20227血小板血型系統(tǒng)血小板HLA系統(tǒng)血型抗原DPDQDRBCAClass IIC2. 血小板特異性抗原即人類血小板抗原 （human platelet antigen，HPA）血小板特有的，其他組織細胞沒有表現(xiàn)血小板獨特的遺傳多態(tài)性均存在于血小板膜糖蛋白（GP）上10/5/20228血小板血型系統(tǒng)2. 血小板特異性抗原即人類血小板抗原10/

4、3/20228血10/5/20229血小板血型系統(tǒng)10/3/20229血小板血型系統(tǒng)HPA的命名1990年國際血液學標準化委員會(ICSH)/國際輸血協(xié)會（ISBT）血小板血清學研討會對血小板抗原系統(tǒng)進行國際命名2003年國際輸血協(xié)會（ISBT）和國際血栓和止血協(xié)會（ISTH）建立的血小板命名委員會（PNC） 10/5/202210血小板血型系統(tǒng)HPA的命名1990年國際血液學標準化委員會(ICSH)/國命名規(guī)定在系統(tǒng)前冠以HPA按發(fā)現(xiàn)順序用數(shù)字編號只有在2個對偶抗原全被檢測出來后，才能被稱為系統(tǒng)，對偶抗原按其在人群中頻率由高到低，用字母命名，高的為a，低的為b尚未發(fā)現(xiàn)對偶抗原的，給予暫時命名

5、，在等位基因數(shù)字后加后綴w表示10/5/202211血小板血型系統(tǒng)命名規(guī)定在系統(tǒng)前冠以HPA10/3/202211血小板血型系10/5/202212血小板血型系統(tǒng)10/3/202212血小板血型系統(tǒng)（二）血小板抗體產(chǎn)生機理：機體對血小板表面或相關抗原免疫臨床分類：血循環(huán)里的游離抗體 結(jié)合于血小板上的抗體(PAIgG)血型學分類：血小板同種抗體 自身抗體見于：血小板輸注治療無效 同種免疫血小板減少癥 自身免疫血小板減少癥 藥物、病毒、細菌引起的血小板減少癥10/5/202213血小板血型系統(tǒng)（二）血小板抗體產(chǎn)生機理：機體對血小板表面或相關抗原免疫10血小板表面存在眾多復雜抗原，因此反復大量輸注血

6、小板的患者約50%以上產(chǎn)生血小板同種抗體據(jù)報道HLA抗體占多數(shù)，約80%左右HPA抗體單獨存在的頻率較低（2%-3%）HPA抗體與HLA抗體共存（18%）左右必須首先識別并去除血清中存在的HLA抗體，才能分析血小板抗體的特異性（二）血小板抗體10/5/202214血小板血型系統(tǒng)血小板表面存在眾多復雜抗原，因此反復大量輸注血小板的患者約5鑒別有無HLA抗體存在的方法 淋巴細胞毒試驗 混合淋巴細胞培養(yǎng)除去血小板表面HLA抗原方法 氯喹或酸溶液在0處理血小板10/5/202215血小板血型系統(tǒng)10/3/202215血小板血型系統(tǒng)二、血小板血型檢測技術(shù)血清學檢測分子生物學檢測 10/5/202216血

7、小板血型系統(tǒng)二、血小板血型檢測技術(shù)血清學檢測10/3/202216血小板（一）血清學技術(shù) 血小板免疫熒光試驗 簡易致敏紅細胞血小板血清學試驗 單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗 改進的抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗 流式細胞儀檢測技術(shù) 微柱凝膠血小板定型試驗當HLA類抗原在血小板定型時出現(xiàn)強表達時，要用氯喹或酸進行預處理，去除血小板上的HLA抗原10/5/202217血小板血型系統(tǒng)（一）血清學技術(shù) 血小板免疫熒光試驗10/3/202217血1. 血小板免疫熒光試驗(platelet immunofluorescence test, PIFT)10/5/202218血小板血型系統(tǒng)1. 血小板免疫熒光試

8、驗(platelet immunof原理 用多聚甲醛（PFA）或氯喹預處理的血小板，加入異硫氰酸熒光標記的抗血小板抗體，通過流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測血小板抗原抗體結(jié)合情況10/5/202219血小板血型系統(tǒng)原理 用多聚甲醛（PFA）或氯喹預處理的10/5/202220血小板血型系統(tǒng)10/3/202220血小板血型系統(tǒng)臨床應用同種異體抗體與血小板的反應活性檢測血小板配型10/5/202221血小板血型系統(tǒng)臨床應用10/3/202221血小板血型系統(tǒng)方法學評價 優(yōu)點熒光信號只評估血小板，避免了由細胞碎片引起的非特異性反應多特異性的抗球蛋白試劑可以識別IgG、IgA和IgM抗體最可靠的方法之一 缺

9、點對反應不敏感。血小板至少要結(jié)合1 000個IgG分子才能得到陽性結(jié)果10/5/202222血小板血型系統(tǒng)方法學評價 優(yōu)點10/3/202222血小板血型系統(tǒng)2. 簡易致敏紅細胞血小板血清學試驗（Simplified Sensitized Erythrocyte Platelet Serology Assay, SSEPA）10/5/202223血小板血型系統(tǒng)2. 簡易致敏紅細胞血小板血清學試驗（Simplified原理將血小板抗原固定在U型孔壁上，與被檢血清反應后洗凈，以抗IgG（或抗IgM)指示細胞反應結(jié)果如果血小板上結(jié)合了血小板抗體，則致敏在指示細胞上的抗IgG（抗IgM）與血小板抗體結(jié)

10、合，指示細胞向孔底移動被組織，廣泛覆蓋在固定的血小板單層上，為陽性結(jié)果若血小板上無抗體，則指示細胞向孔底移動不受阻，聚集在孔底中央，呈扣狀，為陰性結(jié)果10/5/202224血小板血型系統(tǒng)原理將血小板抗原固定在U型孔壁上，與被檢血清反應后洗凈，以抗陽性結(jié)果陰性結(jié)果10/5/202225血小板血型系統(tǒng)陽性結(jié)果陰性結(jié)果10/3/202225血小板血型系統(tǒng)結(jié)果圖示10/5/202226血小板血型系統(tǒng)結(jié)果圖示10/3/202226血小板血型系統(tǒng)方法直接測定法：測定血小板表面結(jié)合的血小板抗體間接測定法：測定血清內(nèi)的血小板抗體交叉配血試驗：選擇配合的血小板供體10/5/202227血小板血型系統(tǒng)方法直接測定

11、法：測定血小板表面結(jié)合的血小板抗體10/3/20臨床應用血小板抗體鑒定血小板血型研究開展母嬰血小板血型及多種血液病的研究適合性血小板輸注10/5/202228血小板血型系統(tǒng)臨床應用血小板抗體鑒定10/3/202228血小板血型系統(tǒng)方法學評價簡單、微量，重復性、特異性和敏感性均較理想應用范圍廣，可用于檢測血小板抗原抗體以及交叉配合試驗；可開展大量樣本的檢測工作及研究工作固相化的血小板及指示細胞能長期保存?zhèn)溆貌恍枰厥獾膬x器設備，易于推廣10/5/202229血小板血型系統(tǒng)方法學評價簡單、微量，重復性、特異性和敏感性均較理想10/33. 單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗(Monoclonal a

12、ntibody-specific immobilization of platelet antigens assay, MAIPA)10/5/202230血小板血型系統(tǒng)3. 單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗(Monoclon原理在血小板上先結(jié)合人的同種抗體，然后再結(jié)合鼠抗人血小板抗體，裂解血小板后，把裂解產(chǎn)物移至包被的羊抗鼠IgG微孔板內(nèi)，通過辣根過氧化物酶標記羊抗人IgG檢測人的血小板同種抗體10/5/202231血小板血型系統(tǒng)原理在血小板上先結(jié)合人的同種抗體，然后再結(jié)合鼠抗人血小板抗體單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗10/5/202232血小板血型系統(tǒng)單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗

13、10/3/202232血小方法學評價優(yōu)點：敏感性強。可檢測出被污染的抗體、微量抗原（HPA-5）、低頻率抗原。缺點：在未知抗原檢測時必須使用一組單克隆抗體，而又不能對所有糖蛋白具有活性 如果人抗體與單克隆抗體和同一個抗原決定簇反應，就會引起假陰性結(jié)果10/5/202233血小板血型系統(tǒng)方法學評價優(yōu)點：敏感性強?？蓹z測出被污染的抗體、微量抗原（H4. 改進的抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(Modified antigen capture ELISA, MACE)10/5/202234血小板血型系統(tǒng)4. 改進的抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(Modified a原理血小板與抗體致敏，將形成的抗原-抗體復合物分

14、別加入包被有抗GP Ib、GP IIb、GP IIIa、GP IX、HLA等鼠抗人單克隆抗體的微孔內(nèi)，再加入酶標羊抗人IgG底物顯色，終止反應后測405nm吸光度10/5/202235血小板血型系統(tǒng)原理血小板與抗體致敏，將形成的抗原-抗體復合物分別加入包被有方法學評價及應用優(yōu)點：特異性較高缺點：非特異的物質(zhì)和某些血清中的IgG結(jié)合非常牢固應用：對于已經(jīng)去除了HPA-1a的大量標本的定型常使用競爭性ELISA技術(shù)10/5/202236血小板血型系統(tǒng)方法學評價及應用10/3/202236血小板血型系統(tǒng)5. 流式細胞儀檢測技術(shù)(Flow cytometry, FCM)10/5/202237血小板血型

15、系統(tǒng)5. 流式細胞儀檢測技術(shù)(Flow cytometry, 原理免疫熒光標記技術(shù)，抗原抗體結(jié)合同一激光光源激發(fā)得到特異熒光色細胞體積、結(jié)構(gòu)、熒光種類及性質(zhì)等多種參數(shù)分析10/5/202238血小板血型系統(tǒng)原理免疫熒光標記技術(shù)，抗原抗體結(jié)合10/3/202238血小FCM檢測血小板相關抗體10/5/202239血小板血型系統(tǒng)FCM檢測血小板相關抗體10/3/202239血小板血型系統(tǒng)6. 微柱凝膠血小板定型試驗（microcolume gel test for platelet typing）10/5/202240血小板血型系統(tǒng)6. 微柱凝膠血小板定型試驗（microcolume ge原理向微

16、柱凝膠中依次加入待檢血清、血小板、指示紅細胞陽性結(jié)果：若待檢血清中存在血小板抗體，則形成血小板-血小板抗體-抗IgG-指示紅細胞四位一體的免疫復合物不能通過凝膠柱陰性結(jié)果：若待檢血清無血小板抗體，則不能形成免疫復合物，指示紅細胞離心后沉于柱底10/5/202241血小板血型系統(tǒng)原理向微柱凝膠中依次加入待檢血清、血小板、指示紅細胞10/310/5/202242血小板血型系統(tǒng)10/3/202242血小板血型系統(tǒng)10/5/202243血小板血型系統(tǒng)10/3/202243血小板血型系統(tǒng)10/5/202244血小板血型系統(tǒng)10/3/202244血小板血型系統(tǒng)10/5/202245血小板血型系統(tǒng)10/3/

17、202245血小板血型系統(tǒng)10/5/202246血小板血型系統(tǒng)10/3/202246血小板血型系統(tǒng)方法學評價方法快速、敏感、操作簡單操作標準化（試劑、設備、工作程序）標本試劑用量少結(jié)果判斷客觀準確結(jié)果保存時間長（數(shù)天或數(shù)周）安全：減少醫(yī)源性傳播10/5/202247血小板血型系統(tǒng)方法學評價方法快速、敏感、操作簡單10/3/202247血?。ǘ┓肿由飳W檢測22個HPA抗原中除HPA-14bw基因外，其它所有HPA基因多態(tài)性都表現(xiàn)為SNP（單核苷酸多態(tài)性），因此檢測SNP的方法基本上適用于HPA基因分型 共同特點：以聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）為基

18、礎，所不同的只是在于PCR引物設計以及檢測PCR產(chǎn)物的方法10/5/202248血小板血型系統(tǒng)（二）分子生物學檢測22個HPA抗原中除HPA-14bw基因方法PCR-SSP: 首選，最簡單常用，快速經(jīng)濟PCR-RFLP: 繁瑣，無法對HPA-4基因分型PCR-ASO: 繁瑣，不太容易判斷結(jié)果SSCP： 不適合常規(guī)HPA檢查DNA序列分析法: 操作復雜，成本較高10/5/202249血小板血型系統(tǒng)方法PCR-SSP: 首選，最簡單常用，快速經(jīng)濟10/10/5/202250血小板血型系統(tǒng)10/3/202250血小板血型系統(tǒng)（三）血清學檢測與分子生物學檢測的關系 血清學檢測簡單、快速成本低主要用于血

19、小板抗體檢測和交叉試驗血型抗原的血清學定型是基因分型的前提10/5/202251血小板血型系統(tǒng)（三）血清學檢測與分子生物學檢測的關系 血清學檢測10/三、血清學檢測與分子生物學檢測的關系 分子生物學檢測結(jié)果準確、可靠不需要特異性抗體的血小板基因組DNA的來源：可為尿沉淀物、口腔黏膜細胞和羊水細胞主要用于血小板血型抗原分型10/5/202252血小板血型系統(tǒng)三、血清學檢測與分子生物學檢測的關系 分子生物學檢測10三、血小板血型的臨床應用 血小板輸注無效 輸血后紫癜 新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜 特發(fā)性血小板減少性紫癜10/5/202253血小板血型系統(tǒng)三、血小板血型的臨床應用 血小板輸注無效

20、10/3/20225 （一）血小板輸注無效(platelet transfusion refractoriness, PTR)10/5/202254血小板血型系統(tǒng) （一）血小板輸注無效(platelet transfus1. 定義指患者在輸注合適劑量的血小板后沒有產(chǎn)生“適當?shù)姆磻?，即連續(xù)兩次輸注足量隨機供者血小板后，沒有達到合適的校正血小板計數(shù)增加值（CCI），臨床出血表現(xiàn)亦未見改善長期依靠血小板支持治療這是臨床輸血中頗為棘手的問題10/5/202255血小板血型系統(tǒng)1. 定義指患者在輸注合適劑量的血小板后沒有產(chǎn)生“適當?shù)姆磻?. 原因免疫因素（17.5%） ： HLA抗體、HPA抗體、AB

21、O抗體、自身抗體、藥物抗體、循環(huán)免疫復合物等非免疫因素（67.5%） ：發(fā)熱、敗血癥、脾腫大、骨髓移植、DIC、靜注抗菌素等；血小板質(zhì)量非免疫+免疫因素（15%）10/5/202256血小板血型系統(tǒng)2. 原因免疫因素（17.5%） ： HLA抗體、HPA抗體3. 判定指標臨床: 出血趨勢不減輕，或出現(xiàn)輸血性紫癜，出血加重 血小板計數(shù)較輸注前不僅不增高，有時還會下降校正血小板計數(shù)增加值 (corrected count increment, CCI) CCI = (輸注后血小板計數(shù)- 輸注前血小板計數(shù)) 體表面積(m2)輸入血小板總數(shù)（1011L） PTR判定標準: 1 小時 CCI 7.5 1

22、09L 20-24小時 CCI 4.5 109L血小板回收率 (percentage platelet recovery, PPR) PPR = (輸注后血小板數(shù)輸注前血小板數(shù))血容量(L) 輸入血小板總數(shù)2/3 PTR判定標準： 1小時 PPR30% 20-24小時PPR 20%10/5/202257血小板血型系統(tǒng)3. 判定指標臨床: 出血趨勢不減輕，或出現(xiàn)輸血性紫癜，出血4. 預防措施 選用單一供者血小板（機釆血小板） 自身血小板輸注 去除血小板中白細胞：WBC 5 106/L 去除血小板表面抗原：用氯喹或枸櫞酸解離技術(shù)去除HLA抗原 紫外線照射滅活抗原提呈細胞（antigen prese

23、nting cell, APC）功能10/5/202258血小板血型系統(tǒng)4. 預防措施 選用單一供者血小板（機釆血小板）10/3/25. 處理流程 首先要考慮血小板質(zhì)量問題，可輸注ABO 同型的非庫存血小板，以排除ABO系統(tǒng)的抗體或血小板質(zhì)量因素 若有發(fā)熱、感染、DIC 等導致血小板消耗增加的因素存在，積極治療原發(fā)病，并增加輸注劑量 若有同種抗體存在，則挑選HLA、HPA 相合的供者血小板，或使用激素、免疫抑制劑或靜脈注射免疫球蛋白 若病人持續(xù)輸注血小板效果不佳而又找不到明確的原因，則應考慮藥物性抗體的存在，停用或換用相關藥物10/5/202259血小板血型系統(tǒng)5. 處理流程 首先要考慮血小板

24、質(zhì)量問題，可輸注ABO6. 處理 供者選擇：ABO和Rh相合 HLA相合 HPA相合大量靜脈注射免疫球蛋白（IVIG）血漿置換免疫抑制劑抗纖溶藥物等10/5/202260血小板血型系統(tǒng)6. 處理 供者選擇：ABO和Rh相合10/3/202260病 因 處 理免疫性因素 HLA 同種抗體 輸注HLA抗原配合的血小板或交叉配合試驗相合的血小板血小板特異性抗體 輸注血小板特異性抗原（HPA）配合的血小板或交叉配合試驗相合的血小板自身抗體 IVIG、皮質(zhì)類固醇、脾切除術(shù)藥物（如肝素） 停用誘發(fā)藥物 非免疫性因素脾腫大 治療病因 藥物（如兩性霉素B） 若可能時，停用誘發(fā)藥物 消耗增加 治療病因 敗血癥

25、治療病因 PTR的病因及處理10/5/202261血小板血型系統(tǒng)病 因 處 理免疫性因素 HLA 同種抗體 輸注H（二）輸血后紫癜(post-transfusion purpura, PTP)10/5/202262血小板血型系統(tǒng)（二）輸血后紫癜(post-transfusion pur1. 定義及臨床表現(xiàn) 定義指輸注全血或血小板后引起的急性、暫時性的同種免疫性血小板減少綜合征 臨床表現(xiàn)在輸血后1周左右突然發(fā)生皮膚瘀點、瘀斑和黏膜出血，嚴重者有內(nèi)臟和顱內(nèi)出血大多數(shù)的患者是女性，有輸血或妊娠史10/5/202263血小板血型系統(tǒng)1. 定義及臨床表現(xiàn) 定義10/3/202263血小板2. 病因出現(xiàn)血

26、小板特異性同種抗體常見的是抗HPA-1a通常發(fā)生于HPA-1a陰性患者，歐美多見10/5/202264血小板血型系統(tǒng)2. 病因出現(xiàn)血小板特異性同種抗體10/3/202264血小3. 預防和治療措施血小板抗體篩選血小板交叉配血試驗，選擇配合型的血小板供體輸注免疫抑制劑血漿置換大量靜脈注射免疫球蛋白10/5/202265血小板血型系統(tǒng)3. 預防和治療措施血小板抗體篩選10/3/202265血?。ㄈ┬律鷥和N免疫性血小板減少性紫癜(neonatal alloimmune thrombocytopenic purpura, NAITP)10/5/202266血小板血型系統(tǒng)（三）新生兒同種免疫性血小板

27、減少性紫癜(neonatal1. 定義妊娠期間由于母嬰間血小板血型不合，胎兒血小板抗原刺激母體產(chǎn)生血小板相關抗體，通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，導致胎兒和新生兒血小板減少常見，病死率較高，約13%10/5/202267血小板血型系統(tǒng)1. 定義妊娠期間由于母嬰間血小板血型不合，胎兒血小板抗原刺10/5/202268血小板血型系統(tǒng)10/3/202268血小板血型系統(tǒng) 內(nèi)臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)出血 腦水腫 出生時有嚴重而廣泛的瘀點和瘀斑 出生時正常，2-3天后出現(xiàn)血小板顯著減少2. 臨床癥狀10/5/202269血小板血型系統(tǒng) 2. 臨床癥狀10/3/202269血小板血型系統(tǒng)3. 實驗室檢查血小板抗原的鑒定血小

28、板抗體的檢查指 標HDNNAITP母細胞表面缺乏常見抗原紅細胞抗原鑒定血小板抗原鑒定抗體特異性紅細胞抗體篩選血小板抗體篩選嬰兒血細胞包被有IgG直接抗人球蛋白試驗血小板相關Ig檢測低頻率抗原抗體母血清+父紅細胞母血清+父血小板10/5/202270血小板血型系統(tǒng)3. 實驗室檢查血小板抗原的鑒定指 標HDNNAITP母細 治療患者輸入母體中同種抗體無不良反應性的血小板對患者進行換血治療給新生兒靜脈內(nèi)注射免疫球蛋白 預防隨時監(jiān)測母親血清中血小板抗體效價高時可對母親作血漿置換治療，降低母親血漿中抗體的含量4. 治療及預防10/5/202271血小板血型系統(tǒng) 治療4. 治療及預防10/3/202271血小板血型系統(tǒng)（四）特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP)10/5/202272血小板血型系統(tǒng)（四）特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic th1. 定義及臨床表現(xiàn)定義