柱分配色譜-紫外分光光度法阿司匹林膠囊測定USP課件

1、柱分配色譜-紫外分光光度法阿司匹林膠囊測定（USP）水楊酸的限量測定樣品的氯仿溶液沖洗：氯仿分次洗（阿司匹林）洗脫：冰HAc+乙醚（解吸）洗脫：氯仿（水楊酸）測定：306nm，A樣 A對限量：以阿司匹林標(biāo)示量計(jì)，允許水楊酸的量為0.75%三氯化鐵作用與水楊酸形成紫色配位物，使水楊酸保留在柱上。尿素作用高濃度尿素的存在可使配位物在柱上的移動變慢，譜帶較窄。磷酸的作用若有少量FeCl3被沖洗下來，色帶變黃，影響結(jié)果，磷酸可與Fe3+形成不溶性磷酸鐵而避免干擾。對照溶液75g10ml/50ml,樣品液100mg/50ml阿司匹林的含量測定上樣：樣品的氯仿溶液沖洗：氯仿（棄去）洗脫：冰HAc-CHCl

2、3（阿司匹林+水楊酸）測定 ：280nm計(jì)算：對照品比較法（測得的是總量）碳酸氫鈉的作用：使阿司匹林和水楊酸均成鈉鹽保留在柱上。冰Hac作用：解吸 高效液相色譜法高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入進(jìn)樣閥的供試品，由流動相帶入柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)入檢測器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。 現(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別。不同點(diǎn)僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實(shí)現(xiàn)了自動化 操作。經(jīng)典的液相色譜法，流動相在常壓下輸送，所用的固定相柱效低，分析周期長。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論，流動

3、相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達(dá)4.9107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬）；同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。因此，高效液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點(diǎn)。所以人們稱它為高壓、高速、高效或現(xiàn)代液相色譜法。溶液配制：內(nèi)標(biāo)溶液：取咖啡因，加乙醇制成4mg/ml對照品溶液：阿司匹林0.15g，精密加內(nèi)標(biāo)液5ml，稀釋至50ml，精密量取2ml，稀釋至50ml。供試品溶液：取5粒，精密稱定，在40-50C水浴上熔融，精密量取適量（相當(dāng)于阿司匹林0.15g），精密加內(nèi)標(biāo)液5ml，加乙醇至5

4、0ml，精密量取2ml，稀釋至50ml。測定法：取對照品溶液和供試品溶液各10ul分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算求得供試品溶液中阿司匹林的濃度Cx計(jì)算供試液 C樣=（R樣/R標(biāo)）C標(biāo)C樣稀釋倍數(shù)平均粒重稱樣量標(biāo)示量 100% 標(biāo)示量%=測定法：精密稱取丙磺舒對照品流動相溶液和供試品流動相溶液各20ul，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖（按課本頁公式計(jì)算丙磺舒含量）固定相填充劑的選擇最常用的色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠 反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用 正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等 硅膠適用PH2-8 當(dāng)pH大于8時(shí)，可使載體硅膠溶解；當(dāng)p

5、H小于2時(shí)，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落PH大于8需選用耐堿填充劑PH小于2需選用耐酸填充劑 返回流動相的選擇由于C18鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，故對于十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的反相色譜系統(tǒng)，流動相中有機(jī)溶劑的比例通常不應(yīng)低于5，否則C18鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。 返回 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)對一些儀器測試方法，在進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，有必要將分析設(shè)備、電子儀器與實(shí)驗(yàn)操作、被測試樣品等一起當(dāng)作完整的系統(tǒng)進(jìn)行評估。 系統(tǒng)適用性便是對整個系統(tǒng)進(jìn)行評估的指標(biāo)。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗(yàn)證方法類型而定。 色譜方法對分析設(shè)備、電子儀器的依賴程度較高，因此所有色譜方法均應(yīng)進(jìn)行該指標(biāo)驗(yàn)證，并將系統(tǒng)適用性作為分析方法的組成部分。 ：是色譜柱的理論板數(shù)：是分離度重復(fù)性：取各品種項(xiàng)下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣35次，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大