紅細(xì)胞檢驗(yàn)的基礎(chǔ)課件

紅細(xì)胞檢驗(yàn)的基礎(chǔ)理論紅細(xì)胞檢驗(yàn)的基礎(chǔ)理論紅細(xì)胞膜血紅蛋白紅細(xì)胞代謝紅細(xì)胞的衰老和死亡紅細(xì)胞膜一、紅細(xì)胞膜的組成與結(jié)構(gòu)二、紅細(xì)胞膜的功能三、影響紅細(xì)胞膜穩(wěn)定的因素紅細(xì)胞膜脂質(zhì)組成

人紅細(xì)胞膜的主要蛋白E.GorterandF.GrendelModel,1925結(jié)構(gòu)有關(guān)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的幾個(gè)紅細(xì)胞膜骨架結(jié)構(gòu)：膜下0.2ul膠溶層，包括主體蛋白和外周蛋白主體蛋白：鑲嵌于脂質(zhì)雙層中，多屬糖蛋白外周蛋白：與脂質(zhì)雙層疏松結(jié)合，易被水解血影（ghost）：RBC裂解釋放Hb后留下一個(gè)保留原形的空殼結(jié)構(gòu)概念紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)構(gòu)示意圖膜骨架功能維持紅細(xì)胞的正常形態(tài)及變形性膜結(jié)構(gòu)最基本的特征細(xì)胞膜的不對(duì)稱性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的不對(duì)稱性膜脂的不對(duì)稱性膜蛋白的不對(duì)稱性（功能上的方向性不對(duì)稱）復(fù)合糖的不對(duì)稱性細(xì)胞膜的不對(duì)稱性是生物膜完成復(fù)雜的在時(shí)間與空間上有序的各種生理功能的保證膜脂質(zhì)不對(duì)稱性外小頁：PC（膽堿磷脂）、PM（鞘磷脂）內(nèi)小頁：PE（乙醇胺磷脂）、PS（絲氨酸磷脂）與細(xì)胞老化、調(diào)亡、細(xì)胞識(shí)別和吞飲有關(guān)膜蛋白不對(duì)稱性特性：具有明顯方向性和區(qū)域性蛋白激酶C磷脂酰絲氨酸（內(nèi)小頁）細(xì)胞膜的不對(duì)稱性示意圖膜流動(dòng)性主要指脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的運(yùn)動(dòng)脂質(zhì)液態(tài)晶態(tài)蛋白質(zhì)側(cè)向運(yùn)動(dòng)、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)生理意義：保證細(xì)胞生理功能必要條件二、細(xì)胞膜的生物學(xué)功能為細(xì)胞生命活動(dòng)提供相對(duì)穩(wěn)定的環(huán)境選擇性的物質(zhì)運(yùn)輸，其中伴隨能量的傳遞提供細(xì)胞識(shí)別位點(diǎn)，完成信息傳遞提供多種酶結(jié)合位點(diǎn)，使酶促反應(yīng)高效進(jìn)行介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間的連接參與形成具有不同功能的細(xì)胞表面特化結(jié)構(gòu)膜功能一、穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境一、屏障作用二、賦予高度變性能力膜功能三、細(xì)胞識(shí)別及信息傳遞細(xì)胞識(shí)別：與寡糖鏈密切相關(guān)1、血型抗原2、補(bǔ)體受體（CRI）二、影響紅細(xì)胞膜穩(wěn)定因素化學(xué)因素影響膜穩(wěn)定和因素免疫因素紅細(xì)胞膜蛋白的遺傳性缺陷

酶代謝異常,ATP生成不足生物因素血紅蛋白血紅蛋白組成血紅蛋白結(jié)構(gòu)、功能血紅蛋白種類影響血紅蛋白結(jié)構(gòu)、功能因素血紅蛋白組成血紅素：鐵原子、原卟啉Ⅸ珠蛋白血紅蛋白血紅蛋白結(jié)構(gòu)與功能結(jié)構(gòu)：二條α鏈和二條β鏈緊密型（T）、松弛型（R）功能：運(yùn)輸氧，具有協(xié)同效應(yīng)生理性血紅蛋白種類胚胎期：成人：影響血紅蛋白結(jié)構(gòu)和功能的因素珠蛋白基因缺失或缺陷Heinz酶缺陷MHb化學(xué)藥物中毒MHb、SHb、HbCO第三節(jié)紅細(xì)胞代謝紅細(xì)胞糖代謝鐵代謝核苷酸代謝紅細(xì)胞糖代謝葡萄糖無氧酵解磷酸戊糖途徑與谷胱甘肽途徑其它葡萄糖無氧酵解

無氧酵解獲取能量唯一途徑2、3二磷酸甘油酸代謝支路影響血紅蛋白與氧親和力酶缺乏丙酮酸激酶磷酸戊糖途徑與谷胱甘肽途徑磷酸戊糖途徑：還原性輔酶Ⅱ（NADPH）、磷酸核糖（參與嘌呤、ATP合成）谷胱甘肽途徑：保護(hù)-SH基團(tuán)、降解H2O2酶缺乏：G6PD鐵代謝鐵的運(yùn)轉(zhuǎn)

食物腸上皮血液流通鐵吸收進(jìn)入其它幼紅細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)成熟紅細(xì)胞

鐵的貯存鐵蛋白蛋白Fe3+含鐵血黃素紅細(xì)胞核苷酸代謝維生素B12和葉酸的來源與吸收轉(zhuǎn)運(yùn)、利用與貯存在合成DNA中作用影響吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)因素紅細(xì)胞核苷酸代謝葉酸的吸收葉酸蝶酰單谷氨酸四氫葉酸雙氫葉酸還原酶多谷氨酸鹽參與DNA合成組織細(xì)胞酶促作用下血漿葉酸進(jìn)入組織細(xì)胞后，轉(zhuǎn)變?yōu)槎喙劝彼猁}，才具有參與DNA合成的活性。葉酸吸收障礙后2~7個(gè)月內(nèi)導(dǎo)致葉酸缺乏，也引起與vitB12缺乏時(shí)相似的巨幼紅細(xì)胞性貧血。葉酸的活化需要vitB12參與，因此，vitB12缺乏時(shí)，葉酸的利用率下降，可引起葉酸相對(duì)不足。胃液小腸上段回腸門脈血流肝轉(zhuǎn)鈷蛋白II造血組織B12與R蛋白結(jié)合胰蛋白酶斷裂結(jié)合。與內(nèi)因子結(jié)合，免被蛋白水解酶破壞。內(nèi)因子一部分與B12結(jié)合，一部分與回腸上皮細(xì)胞膜特異受體結(jié)合，被吸收*內(nèi)因子胃腺壁細(xì)胞分泌的一種糖蛋白R(shí)蛋白是一種電泳速度很快的血漿蛋白。**B12吸收障礙，巨幼R(shí)BC性貧血---大細(xì)胞性貧血Vit.B12吸收紅細(xì)胞的衰老和死亡1、紅細(xì)胞糖代謝改變2、紅細(xì)胞膜及血紅蛋白改變3、紅細(xì)胞的破壞紅細(xì)胞平均壽命120天，在血管內(nèi)循環(huán)流動(dòng)約27KM，在穿過小血管和孔隙時(shí)可變形而不至于破裂。衰老紅細(xì)胞脆性增加，易破裂，通過微小孔隙也發(fā)生困難，容易停滯于脾和骨髓中被巨噬細(xì)胞所吞噬。細(xì)胞的衰老：未分化分化衰老死亡衰老是一種正常的生命現(xiàn)象

生物體內(nèi)的絕大多數(shù)細(xì)胞，都有經(jīng)過未分化、分化、衰老、死亡這幾個(gè)階段。紅細(xì)胞的死亡紅細(xì)胞的消亡無效造血紅細(xì)胞檢驗(yàn)的基本方法一附院呂小林紅細(xì)胞檢驗(yàn)的基本方法有關(guān)鐵指標(biāo)的檢驗(yàn)血清和紅細(xì)胞葉酸測(cè)定溶血的檢驗(yàn)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)血紅蛋白異常的檢驗(yàn)免疫性溶血貧血的檢驗(yàn)血清鐵測(cè)定原理：Fe2+Fe+3+顯色劑，生成有色絡(luò)合物。應(yīng)用評(píng)價(jià)1、降低：需求量增加、IDA、慢性失血和感染等。2、增高：肝疾病、鐵粒幼細(xì)胞貧血、AA、慢性溶血、反復(fù)輸血等3、血清經(jīng)常變化，單項(xiàng)檢測(cè)意義不大。血清鐵蛋白測(cè)定原理：固相放射免疫法。兔抗人鐵蛋白+血清鐵蛋白Ag-Ab復(fù)合物+125I標(biāo)記Ab標(biāo)記Ab-Ag-Ab，檢測(cè)復(fù)合物中放射性算出血清鐵蛋白值應(yīng)用：能準(zhǔn)確反映體內(nèi)儲(chǔ)鐵情況。SF減少是診斷IDA敏感方法之一。1、降低：IDA、慢性失血和貧血等。2、增高：肝疾病、鐵代謝障礙性貧血、感染、惡性腫瘤等

血清總鐵結(jié)合力測(cè)定原理：在血清中加入已知過量的鐵標(biāo)準(zhǔn)液，使之飽和，并檢測(cè)其中鐵，即總鐵結(jié)合力。再減去原血清轉(zhuǎn)鐵蛋白中所含的鐵，為未飽和鐵結(jié)合力應(yīng)用：增高IDA和真紅細(xì)胞增多癥等。降低或正常肝疾病、溶血性貧血、感染、惡性腫瘤和腎病綜合征等

小細(xì)胞低色素性貧血的實(shí)驗(yàn)鑒別鐵檢驗(yàn)鐵檢驗(yàn)IDA紅細(xì)胞掃描電鏡圖像：缺鐵性貧血血象：IDA紅細(xì)胞形態(tài)IDA紅細(xì)胞正常紅細(xì)胞IDA骨髓病理正常骨髓外鐵

外鐵（-）~（±）：（+）~（++）：

細(xì)胞內(nèi)鐵第二節(jié)葉酸和維生素B12的檢測(cè)一、葉酸測(cè)定放射免疫法二、維生素B12測(cè)定放射免疫法三、應(yīng)用評(píng)價(jià)1、降低：巨幼細(xì)胞貧血2、增高：白血病，某些惡性腫瘤等巨幼細(xì)胞貧血血象巨幼細(xì)胞貧血骨髓象巨幼細(xì)胞貧血骨髓象第三節(jié)溶血的檢驗(yàn)紅細(xì)胞壽命測(cè)定血漿游離血紅蛋白檢測(cè)血清結(jié)合珠蛋白檢測(cè)尿含鐵血黃素檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查一、RBC壽命測(cè)定（最佳）51Cr同位素標(biāo)記正常值：25~32天應(yīng)用評(píng)價(jià)

1、溶血性貧血紅細(xì)胞壽命縮短，約14天2、再生障礙性貧血約15-29天紅細(xì)胞碎片血漿游離血紅蛋白檢測(cè)原理利用HB具有過氧化物酶活性，采用過氧化物酶法檢測(cè)血漿游離血紅蛋白。參考值0-40mg/L臨床評(píng)價(jià)

1、判斷血管內(nèi)溶血PNH、蠶豆病、溶血反應(yīng)等明顯增高，自身免疫性貧血、珠蛋白障礙性貧血可輕到中度增高。2、血管外溶血不增高溶血的檢驗(yàn)血清結(jié)合珠蛋白檢測(cè)原理血清結(jié)合珠蛋白測(cè)定是在待測(cè)血清中加入一定量的血紅蛋白液，使之與測(cè)血清中的HP形成HP-HB復(fù)合物。通過電泳法分離復(fù)合物，并測(cè)定其量，從而算出結(jié)合珠蛋白的量。參考值0.5-1.5gHB/L臨床評(píng)價(jià)1、減低常見于各種溶血，尤其血管內(nèi)溶血2、增高感染、創(chuàng)傷、惡性腫瘤等溶血的檢驗(yàn)?zāi)蚝F血黃素檢驗(yàn)原理當(dāng)血紅蛋白通過腎濾過時(shí),部分鐵離子以含鐵血黃素的形式沉積于上皮細(xì)胞,并隨尿排出.上皮細(xì)胞中高鐵離子與亞鐵氰化鉀作用,在酸性環(huán)境下產(chǎn)生藍(lán)色沉淀.參考值陰性臨床評(píng)價(jià)慢性血管內(nèi)溶血溶血的檢驗(yàn)Hp與Rous異同點(diǎn)相同點(diǎn)：都反應(yīng)血管內(nèi)溶血不同點(diǎn)：紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)原理檢測(cè)紅細(xì)胞對(duì)不同濃度低滲鹽溶液的抵抗力.紅細(xì)胞在低滲鹽溶液中,當(dāng)水滲透其內(nèi)部達(dá)一定程度時(shí),紅細(xì)胞發(fā)生膨脹破裂.參考值開始溶血:4.4-4.8G/L完全溶血:2.8-3.2G/L臨床評(píng)價(jià):脆性增加球形紅細(xì)胞/橢圓形紅細(xì)胞增多癥;脆性降低珠蛋白合成障礙等.0.320.300.22NaCl0.280.260.240.360.34

完全溶血

開始溶血

未溶血成熟紅細(xì)胞淚滴狀紅細(xì)胞鐮狀紅細(xì)胞缺鐵性紅細(xì)胞二、自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)正常孵育48小時(shí)0.2-4.0%,加糖0.1-0.6%,加ATP0.1-0.8%。遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥者，ATP、糖均能糾正；G6PD缺乏者，糖糾正；丙酮酸激酶缺乏者，ATP糾正。三、紅細(xì)胞膜三磷酸腺苷活性測(cè)定四、酸化甘油溶血試驗(yàn)五、高滲冷溶血試驗(yàn)六、紅細(xì)胞膜蛋白電泳分析紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)原理在血液中加入亞硝酸鹽使紅細(xì)胞中的亞鐵血紅蛋白變成高鐵血紅蛋白,正常紅細(xì)胞的G-6-PD催化戊糖旁路使NADP變成NADPH,使高鐵血紅蛋白還原成亞血紅素,通過比色沒其濃度.參考值>75%臨床評(píng)價(jià)G-6-PD酶缺乏患者。中間缺乏者為31-74%。嚴(yán)重缺乏者<30%（3）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)（methemoglobinreductiontest）正常值：定性法（－）半定量法還原率>75%G6PD缺陷—定性（＋），半定量<70%。

G6PD高鐵血紅蛋白還原酶G6PNADP還原型美蘭HbFe3+6PGNADPH氧化型美蘭HbFe2+NaNO2紅細(xì)胞酶缺陷檢驗(yàn)二、變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)三、G6PD熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測(cè)定四、PK熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測(cè)定五、谷胱甘肽還原酶缺陷檢測(cè)NADP+NADPH（紫外線下發(fā)熒光）G6PDPEP丙酮酸乳酸PKLDHADPATPNADHNAD+血紅蛋白異常的檢驗(yàn)原理根據(jù)不同的血紅蛋白帶有不同的電荷,等電點(diǎn)不同,在一定的PH緩沖液中,其所帶電荷不同,在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度不同,根據(jù)此特點(diǎn)將它們區(qū)分開.參考值HBA>95%HBF<2%HBA2為1.0-3.0%臨床評(píng)價(jià)HBA2增多見于?珠蛋白生成障礙性貧血;HBF見于不穩(wěn)定血紅蛋白增多.（2）血紅蛋白電泳分析主要檢查有無異常Hb區(qū)帶在HbA前出現(xiàn)——快速異常：HbH，J，K組在HbA后出現(xiàn)——慢速異常：HbG，D，E組異常HB帶+—（2）變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)受檢RBC＋乙酰苯肼作活體染色（甲基紫）37℃1~2h有變性珠蛋白小體，則膜上形成紫黑色顆粒結(jié)果：含5個(gè)以上者即（＋），正常人<30%意義：不穩(wěn)定Hb也可出現(xiàn)，故僅作篩選

變性珠蛋白小體血紅蛋白異常檢驗(yàn)二、聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)三、抗堿血紅蛋白檢測(cè)四、異丙醇沉淀試驗(yàn)五、熱變性試驗(yàn)第七節(jié)PNH檢驗(yàn)一、酸化血清溶血試驗(yàn)原理：患者體內(nèi)存在