牛人工授精技術(shù)2

牛人工授精技術(shù)演示文稿目前一頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)牛人工授精技術(shù)目前二頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)人工授精的概念種畜配種：自然交配、人工授精人工授精是指利用器械采取公畜的精液，經(jīng)過適當(dāng)?shù)臋z查和處理，再用器械把精液輸送到母畜生殖道的適當(dāng)部位，使之受孕的配種方法。目前三頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)人工授精的發(fā)展試驗(yàn)階段：

1780年意大利生理學(xué)專家司拜倫謹(jǐn)尼（Spallanzani）第一次進(jìn)行狗的人工授精。20世紀(jì)初對(duì)馬試驗(yàn)成功。實(shí)用階段：在20世紀(jì)30年代形成了一套較完整的操作方法。40～60年代，歐洲多數(shù)國(guó)家，北美、大洋洲國(guó)家及日本人工授精已相當(dāng)普及。冷凍精液階段：出現(xiàn)：1949年英國(guó)波芝（Polge）對(duì)雞精液冷凍成功。發(fā)展：1950年英國(guó)的史密斯（Smith）和波芝研究開發(fā)了牛精液冷凍保存技術(shù)。1960年后冷凍精液的人工授精技術(shù)廣泛展開。我國(guó)的人工授精技術(shù)始于50年代（豬），但精液冷凍技術(shù)70年代才得以推廣。目前四頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)人工授精的意義充分發(fā)揮優(yōu)秀種公畜的種用價(jià)值和配種效能，加快品種改良步伐。提高母畜的受胎率。防止疾病特別是傳染病的傳播。克服因家畜體形懸殊造成的配種困難。冷凍精液的應(yīng)用使種畜的利用不受時(shí)間和空間的限制。是發(fā)展繁殖新技術(shù)的一項(xiàng)基礎(chǔ)措施。目前五頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)人工授精技術(shù)程序采精精液品質(zhì)檢查精液稀釋精液保存輸精目前六頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)采精采精的準(zhǔn)備采精方法采精頻率目前七頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)采精的準(zhǔn)備場(chǎng)地：寬敞、明亮、安靜、清結(jié)，有消毒設(shè)施和保護(hù)欄。臺(tái)畜：活臺(tái)畜、假臺(tái)畜。假陰道：安裝調(diào)試后具備適宜的溫度、壓力、和潤(rùn)滑度。公畜：具備良好的繁殖體況；經(jīng)過訓(xùn)練；采精前進(jìn)行充分的性準(zhǔn)備。目前八頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)采精操作假陰道法：手握法：電刺激法：按摩法：目前九頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前十頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前十一頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前十二頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)公畜的采精頻率公牛：每周兩天，每天兩次。公豬、馬：宜隔日一次，如果連續(xù)兩天采精，要休息2-3天。公羊：每天數(shù)次，連續(xù)數(shù)周。目前十三頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精液的品質(zhì)檢查外觀檢查精子活力檢查精子密度檢查精子畸形率檢查其他檢查目前十四頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精液的外觀檢查精液量精液色澤精液氣味云霧狀目前十五頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)項(xiàng)目乳牛肉牛水牛豬綿羊每周采精次數(shù)2～62～62～62～57～25平均每次射精量（ml）5～104～83～6150～3000.8～1.2精子活率（%）50～7540～7560～8050～8060～80目前十六頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精子活力檢查平板壓片法懸滴法目前十七頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)載玻片預(yù)溫精液稀釋取樣檢查鏡檢活力估測(cè)活力記錄將恒溫加熱板放在載物臺(tái)上，打開電源并調(diào)整控制溫度至37℃，然后放在載玻片

將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋取10ul放在預(yù)溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片在400倍顯微鏡下觀察判斷視野中直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子所占的百分率

按"十級(jí)一分制"評(píng)分和記錄精子活力檢查的程序目前十八頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前十九頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精子密度檢查估測(cè)法血細(xì)胞計(jì)計(jì)數(shù)法精子密度儀測(cè)定目前二十頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)估測(cè)法密：在整個(gè)視野中，精子間空隙不明顯，看不清單個(gè)精子運(yùn)動(dòng)。10億／ml。中：在整個(gè)視野中，精子間空隙明顯，可容納1—2個(gè)精子，3—10億／ml?。涸谡麄€(gè)視野中，精子間空隙較大，可容納數(shù)個(gè)精子，1—3億／ml。目前二十一頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前二十二頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)(二)血細(xì)胞計(jì)數(shù)法：

在顯微鏡看清血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上的方格：

稀釋精液：用移液管吸取精液50微升置于小試管中，再吸取3%NaCI溶液450或950微升與精液混勻。

鏡檢：在400倍的顯微鏡下找出具有代表性的五個(gè)中方格，四角和中間一個(gè)或?qū)蔷€五個(gè)，用計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)其中的精子數(shù)。

計(jì)算：1毫升原精液精子數(shù)=5*5*10*1000*稀釋倍數(shù)目前二十三頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精子密度儀目前二十四頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前二十五頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)各種家畜精子密度比較目前二十六頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)畸形率的檢查畸形精子：頭部畸形、頸部畸形、尾部畸形精子畸形率：精液中畸形精子占總精子數(shù)的百分率。優(yōu)質(zhì)精液精子畸形率應(yīng)小于：牛18%、羊15%、豬18%、馬12%目前二十七頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前二十八頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)畸形率的檢查取一滴原精液，均勻的涂在載玻片上，干燥1～2分鐘。用96%以上酒精固定2～3分鐘。用美藍(lán)或墨水染色1～2分鐘。用蒸餾水輕輕沖洗。干燥后鏡檢，目前二十九頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)其他檢查頂體異常率精子生存時(shí)間和生存指數(shù)的測(cè)定PH測(cè)定美藍(lán)褪色試驗(yàn)果糖分解試驗(yàn)精子耗氧量測(cè)定目前三十頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)頂體異常率的檢查取鮮精適量，在37℃下用生理鹽水稀釋。涂片，干燥，用5%福爾馬林固定10分鐘。姬姆薩液染色1.5～2小時(shí)。干燥后用樹脂封閉，制成標(biāo)本。400～600倍鏡檢，數(shù)500～1000個(gè)精子，計(jì)算項(xiàng)體異常率。目前三十一頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精子生存時(shí)間和生存指數(shù)的測(cè)定精子生存時(shí)間：指精子在某溫度下在體外的總的生存時(shí)間。生存指數(shù)：將精液在某溫度下，每隔8～12小時(shí)檢查一次精子活力，直至無活動(dòng)精子為止，相鄰兩次檢查的平均活力與間隔時(shí)間的積之和為生存指數(shù)。目前三十二頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)PH測(cè)定正常精液PH：牛、羊6.5～6.9、豬、馬7.4～7.5同種精液PH偏低的，品質(zhì)較好，PH偏高的受精率、生活力和保存效果都顯著降低。目前三十三頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)美藍(lán)褪色試驗(yàn)?zāi)壳叭捻揬總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精液稀釋稀釋的目的稀釋液的成分及作用稀釋液的配制方法稀釋倍數(shù)的確定稀釋方法目前三十五頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)稀釋的目的大精液容量，增加了一次采精量的可配母畜數(shù)。延長(zhǎng)精子存活時(shí)間。有利于精液的保存和運(yùn)輸。目前三十六頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)稀釋液的成分及作用

稀釋劑：?jiǎn)渭償U(kuò)大容量的等滲液。0.9%NaCl、5%葡萄糖。營(yíng)養(yǎng)劑：主要提供營(yíng)養(yǎng)，以補(bǔ)充精子在代謝過程中消耗營(yíng)養(yǎng)。（1）奶類：奶粉(脫脂、速溶)10—12%；鮮奶經(jīng)消毒加入10—20ml。（2）卵黃，通常加入20%。（3）糖類，3%葡萄糖，11%蔗糖。保護(hù)劑：主要保護(hù)精子免受各種不良外界環(huán)境因素的危害。

（1）非電解質(zhì)或弱電解質(zhì)：降低精液電解質(zhì)濃度，常用糖類、氨基乙酸。（2）緩沖物質(zhì)：維持精液的PH，常用檸檬酸鹽、酒石酸鉀鈉、磷酸二氫鉀和三羥甲基氨基甲烷（tris)等。

（3）防冷物質(zhì)：防止精子發(fā)生冷休克，常用卵黃、奶類。

（4）抗凍物質(zhì)：甘油、二甲基亞砜(DMSO)。

（5）抗菌物質(zhì)：青霉素、鏈霉素、氨基苯磺胺。其他添加劑：激素類、維生素、酶類、染料類、有機(jī)酸、精氨酸等。目前三十七頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)稀釋液的配制要求藥物原料應(yīng)選用化學(xué)純和分析純制劑。用具須洗凈消毒。藥品用蒸餾水溶解后，要進(jìn)行過濾和水浴消毒。蒸餾水要新鮮。卵黃要取自新鮮雞蛋。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，卵黃、奶類、抗生素現(xiàn)用現(xiàn)加。目前三十八頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)稀釋倍數(shù)的確定一頭公牛一次采得鮮精12毫升，經(jīng)檢查精子活力為0.7，密度為11億/毫升，如為母牛輸精時(shí)要求有效精子數(shù)不少于0.1億，輸精量為0.25毫升，本次采得的精液可為多少頭母牛輸精？（1）每毫升原精液中有效精子數(shù)：11*0.7＝7.7億/毫升（2）稀釋后每毫升精液中有效精子數(shù)：0.1/0.25＝0.4億/毫升（3）稀釋倍數(shù)：7.7/0.4＝19.25取19倍（4）可配母牛頭數(shù)：12*19/0.25＝912頭目前三十九頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)稀釋方法將精液精液與稀釋液同處在30℃的環(huán)境中。檢查精液品質(zhì)，確定稀釋倍數(shù)。稀釋時(shí)，將稀釋液沿著精液容器的壁慢慢加入精液中，同時(shí)慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)精液瓶，使之混勻。如需高倍稀釋，應(yīng)先做3—5倍的低倍稀釋。目前四十頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精液稀釋目前四十一頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精液保存常溫保存：15—25℃低溫保存：0—5℃冷凍保存：保存在液氮(-196℃)或干冰(-79℃)中。目前四十二頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)液氮及其容器液氮的特性：超低溫性、易揮發(fā)性、抑菌性。利用液氮：防凍傷、防窒息、防爆炸液氮罐：目前四十三頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)液氮罐的構(gòu)造目前四十四頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)液氮罐的使用購(gòu)買時(shí)要檢查合格證，查看各部件是否齊備完好，測(cè)定液氮損耗率是否正常。運(yùn)輸液氮要有專門的車輛，防止劇烈振蕩。貯存液氮要在專門的室內(nèi)。當(dāng)液氮量達(dá)容積的1/3時(shí)要及時(shí)充氮。每年要清洗保養(yǎng)一次目前四十五頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)精液的冷凍保存原理玻璃化假說：稀溶液在冰晶化溫區(qū)（0～－60℃）易形成冰晶，冰晶為分子有序排列、形態(tài)規(guī)則、顆粒較大的固體，可對(duì)精子產(chǎn)生滲壓和機(jī)械危害。如溶液快速降溫，則形成分子無序排列、顆粒較小的玻璃化固體，對(duì)精子危害小，再以同樣的方式升溫，精子即會(huì)恢復(fù)活力。目前四十六頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)細(xì)管凍精的生產(chǎn)程序采精及精液品質(zhì)檢查精液稀釋：二次稀釋法降溫平衡：分裝凍結(jié)：液氮熏蒸浸泡法抽樣檢查目前四十七頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)細(xì)管凍精的制作目前四十八頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)人工授精技術(shù)輸精前的準(zhǔn)備輸精的要求輸精方法目前四十九頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)輸精前的準(zhǔn)備母畜的準(zhǔn)備：母畜經(jīng)發(fā)情鑒定后，確定已到輸精時(shí)間，將其適當(dāng)保定，尾巴拉向一側(cè)，清洗消毒外陰。器械準(zhǔn)備：輸精所用的器械應(yīng)徹底消毒，用稀釋液沖洗后才能使用。精液準(zhǔn)備（1）液態(tài)保存的精液：輕輕振蕩后升溫至35℃，活力不低于0.6（2）冷凍精液：需先解凍，活力在0.3以上。術(shù)者準(zhǔn)備：輸精人員應(yīng)穿好工作服，指甲必須剪短磨光，戴上長(zhǎng)臂手套。目前五十頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)輸精要求輸精時(shí)間的確定：母牛發(fā)情后9－24h輸精兩次，間隔8-12小時(shí)。（第一次輸精經(jīng)產(chǎn)牛在發(fā)情后12h左右，初產(chǎn)20h）

例：早9點(diǎn)某經(jīng)產(chǎn)母牛發(fā)情，當(dāng)晚7－8：30時(shí)第一次輸精，次日早5－9時(shí)可第二次輸精，第二次輸精前檢查卵泡。細(xì)管凍精1支，0.5ml或0.25ml，有效精子數(shù)不少于1000萬。目前五十一頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)直腸把握子宮頸輸精法操作要點(diǎn)1、凍精的適宜解凍溫度：38~39℃2、母牛的輸精時(shí)間：發(fā)情開始后8~12小時(shí)一次，隔8~12小時(shí)一次。3、適宜的輸精部位：子宮頸深部和子宮體內(nèi)。4、精液解凍后要盡快輸精。5、精液解凍后要保存在34~36℃下，溫度不可波動(dòng)過大。6、細(xì)管裝入槍內(nèi)后，要檢查一下精液是否能從套管外流出。7、排出宿糞后，先擦洗牛外陰部，再插入輸精器。8、插入輸精器時(shí)，先斜向上方前進(jìn)10~15cm，再水平插入。9、向子宮頸插入輸精器時(shí)，要注意兩手協(xié)同操作。10、輸精器與子宮頸方向要保持一致。11、注入精液困難時(shí)，要適當(dāng)改變輸精器方向或稍后拉，但切忌后退過多。12、注入精液要緩慢，一般為10秒。13、注入精液的同時(shí)要減緩母牛的努責(zé)，防止精液倒流。14、輸精同時(shí)要注意保護(hù)輸精器不受糞便污染。15、輸精完畢后，先撤出輸精器后撤出直腸內(nèi)的手臂。目前五十二頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前五十三頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前五十四頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前五十五頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)目前五十六頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)提高受胎率的措施發(fā)情正常而屢配不孕的母牛：大麥芽120克，當(dāng)歸、紅花、生地、地骨皮各60克，黑豆500～1000克，加水熬湯。母牛發(fā)情1～3天開始喂藥，每日1劑，連服3劑，第3劑藥服完后的第2天配種。按碘片1克、碘化鉀3克、蒸餾水6克的比例配成稀釋液，同時(shí)取4毫升原液，加200毫升蒸餾水沖洗子宮。此方法對(duì)慢性子宮內(nèi)膜炎、化膿性子宮炎、卡他性子宮炎、陰道炎等引起的母牛不孕癥有明顯療效。目前五十七頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)提高受胎率的措施卵巢機(jī)能不全時(shí)，肌注0.5%新斯的明2毫升，連注3次，每次間隔48小時(shí)。第3次可同時(shí)注射孕馬血清1000國(guó)際單位，82.4%的母牛可恢復(fù)機(jī)能。對(duì)隱性子宮內(nèi)膜炎的母牛，在發(fā)情配種前2小時(shí)，用生理鹽水200～500毫升沖洗子宮之后，注入青霉素40～100萬單位，鏈霉素100萬單位，再適時(shí)輸精，受胎率可達(dá)60%以上。目前五十八頁\總數(shù)六十四頁\編于十九點(diǎn)提高受胎率的措施肌注維生素。輸精后15～20分鐘，肌肉注射維生素E500毫克，情期受胎率可提高14.4%。在輸