抗氨芐青霉素大腸桿菌的分離、培養(yǎng)及計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)報(bào)告-許佳泉

實(shí)驗(yàn)1抗氨芐青霉素大腸桿菌的別離、培養(yǎng)及計(jì)數(shù)姓名班級實(shí)驗(yàn)原理如何進(jìn)行別離、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1實(shí)驗(yàn)需要制備并使用選擇培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選效率。2別離單克隆菌落采用平板劃線法，其原理如下：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基外表連續(xù)劃線操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的外表，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以別離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，即菌落。3使用LB液體培養(yǎng)基并放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)單克隆菌落以到達(dá)擴(kuò)大培養(yǎng)的目的。4稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液〔10^5,10^6,10^7〕分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的外表，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基外表形成單個(gè)菌落。5用無菌水稀釋菌液：取一毫升液體培養(yǎng)基基液參加一瓶含有9ml的無菌水中，震蕩使液體充分?jǐn)U散。取震蕩后溶液中的1ml液體參加另一瓶無菌水中，震蕩，重復(fù)此步操作，進(jìn)行梯度稀釋，每一步濃度稀釋到之前的十分之一。6計(jì)數(shù)時(shí)，選擇未污染的培養(yǎng)基計(jì)數(shù)。使用記號筆在培養(yǎng)基外表標(biāo)記，并使用計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)菌落個(gè)數(shù)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握選擇培養(yǎng)基的使用方法；2掌握使用液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)；3練習(xí)使用平板劃線法別離單克隆菌落；4練習(xí)使用平板涂布法計(jì)數(shù)；5實(shí)踐無菌操作技術(shù)。實(shí)驗(yàn)材料和藥品待別離的大腸桿菌菌液、高壓蒸汽滅菌鍋、LB固體培養(yǎng)基、LB液體培養(yǎng)基、接種環(huán)、玻璃三角刮刀、培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、搖床、超凈工作臺、酒精燈、9ml無菌水、移液槍實(shí)驗(yàn)步驟〔用簡單的流程圖表示〕實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)〔劃線平板的照片、擴(kuò)大培養(yǎng)的照片、平板涂布計(jì)數(shù)照片及表格等〕平板劃線后培養(yǎng)所得單克隆聚落數(shù)量只有一個(gè)。在平板涂布的九個(gè)平板中有7個(gè)污染較為嚴(yán)重，一個(gè)輕度污染，一個(gè)未污染。其中輕度污染的稀釋濃度為10^6，菌落個(gè)數(shù)：84個(gè)；未污染的稀釋濃度為10^5，菌落個(gè)數(shù)：559個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論平板劃線操作錯(cuò)誤討論：第一次劃線過于用力使得培養(yǎng)基破裂嚴(yán)重，接種環(huán)經(jīng)酒精燈灼燒后冷卻時(shí)間太短，余溫?zé)懒司植烤褐械募?xì)菌。對污染嚴(yán)重原因的討論：涂布平板操作時(shí)與酒精燈火焰距離不夠近，沒有起到高溫殺菌的作用，使得雜菌侵入?？拱逼S青霉素大腸桿菌的別離、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)個(gè)人參與參考標(biāo)準(zhǔn)分值維度1：解題參與報(bào)告中有充足證據(jù)表達(dá)了該學(xué)生在實(shí)驗(yàn)的執(zhí)行、交流等環(huán)節(jié)的高度參與。10報(bào)告中有一些證據(jù)表達(dá)了該學(xué)生在實(shí)驗(yàn)的執(zhí)行、交流等環(huán)節(jié)的參與。5報(bào)告中沒有證據(jù)表達(dá)該學(xué)生在實(shí)驗(yàn)的執(zhí)行、交流等環(huán)節(jié)的參與。0工程執(zhí)行參考標(biāo)準(zhǔn)分值維度1：完成度工程得到充分執(zhí)行〔可根據(jù)實(shí)際情況做出合理調(diào)整〕；10工程方案根本執(zhí)行完畢；5工程方案未得到有效開展；0維度2：真實(shí)性留存全部可靠的原始數(shù)據(jù)記錄及工作記錄；10原始數(shù)據(jù)記錄或工作記錄稍有遺漏；5無原始數(shù)據(jù)、工作記錄，或嚴(yán)重遺漏?！渤霈F(xiàn)此情況，工程執(zhí)行0分〕0維度3：數(shù)據(jù)全面性收集了足夠全面的數(shù)據(jù)以解決提出的問題；10收集的數(shù)據(jù)能夠解決提出的大局部問題；5收集的數(shù)據(jù)根本不能解決問題；0維度4：數(shù)據(jù)信效度對數(shù)據(jù)做了合理充分的分析；10對數(shù)據(jù)做了一些分析；5未對數(shù)據(jù)做分析。0維度5：平安性、規(guī)劃合理實(shí)驗(yàn)操作平安、標(biāo)準(zhǔn)，安排有條理、效率高。10實(shí)驗(yàn)操作平安、標(biāo)準(zhǔn)。5實(shí)驗(yàn)操作存在平安隱患?！渤霈F(xiàn)此情況，工程執(zhí)行0分〕0分析反思參考標(biāo)準(zhǔn)分值維度1：分析數(shù)據(jù)，得出結(jié)論明確處理、分析所得數(shù)據(jù)，得出能夠解決所研究問題的結(jié)論；10處理、分析所得數(shù)據(jù)，得出能夠局部解決所研究問題的結(jié)論；5處理、分析數(shù)據(jù)不當(dāng)，導(dǎo)致結(jié)論存在明顯科學(xué)性錯(cuò)誤；0維度2：結(jié)論所得結(jié)論描述清晰，有可靠的數(shù)據(jù)支持，很好的解決了問題；10所得結(jié)論存在一些漏洞，但是能夠根本解決問題；5所得結(jié)論與所研究問題無關(guān)，或存在明顯科學(xué)性錯(cuò)誤。0交流參考標(biāo)準(zhǔn)分值維度1：完整性工程成果結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)容完整，對研究的問題、原理、執(zhí)行過程、分析過程、結(jié)論、反思等內(nèi)容表達(dá)清楚；10工程成果內(nèi)容完整，對工程的問題、原理、設(shè)計(jì)、執(zhí)行、分析、反思等內(nèi)容都有表達(dá)；5工程成果內(nèi)容不完整，或表達(dá)不清。0維