醫(yī)學專題藥敏試驗PPT資料

1、藥敏試驗MIC：在與微生物生長速率有關的特定時間間隔內(nèi)，通常是1824小時，能夠抑制被測菌生長的最低藥物濃度。對倍稀釋的優(yōu)點：操作容易敏感株的MIC呈正態(tài)分布區(qū)分異常(R)與敏感(S)的菌群12021/7/20 星期二藥敏試驗折點的建立 1. MIC的分布2. 藥代動力學和藥效學 定 MIC的折點3. 臨床療效和細菌清除率4. 抑菌圈直徑的分布 定抑菌圈折點統(tǒng)計學的線性回歸計算錯誤率：盡可能減少極重要誤差 (假敏感率)22021/7/20 星期二MIC的分布32021/7/20 星期二藥代動力學和藥效學藥代動力學：藥物吸收，分布，代謝，排泄藥效學：藥物對機體的作用時間依賴型（TMIC：內(nèi)酰胺類

2、，大環(huán)內(nèi)酯類濃度依賴型（AUC/MIC比率：AGS, FQ這些參數(shù)可用于計算具有最佳藥效的給藥方案42021/7/20 星期二MIC與抑菌圈直徑的線性關系耐藥 中介 敏感RISLog2. MICD 1 d2 抑菌圈直徑（mm)v52021/7/20 星期二抑菌圈直徑與MIC的關系62021/7/20 星期二不同國家的判定折點可能不同原因：用藥劑量不同，服藥的間隔不同評價敏感時較保守更強調(diào)檢測出耐藥株（即特定的耐藥群）技術因素：接種、培養(yǎng)基72021/7/20 星期二敏感性分類(NCCLS的定義)敏感（Susceptible）用常規(guī)用量治療有效常規(guī)用藥時達到的平均血藥濃度超過細菌的MIC 5倍以

3、上。耐藥（Resistance）用常規(guī)用量治療不能抑制細菌的生長MIC高于藥物在血、體液中可能達到的濃度82021/7/20 星期二敏感性分類（2）中介 (Intermediate)MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反應率低于敏感株藥物生理濃集部位有效 (尿FQ)加大用藥劑量可能有效緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結果的判定錯誤92021/7/20 星期二藥敏試驗的方法學半定量紙片擴散法 (抑菌圈直徑)MIC法：稀釋法(肉湯、瓊脂)自動化儀法抗生素連續(xù)梯度法 (Etest )流式細胞儀102021/7/20 星期二藥敏試驗方法的選擇紙片法有獨特之處選藥靈活、便宜、易懂MIC法：商品肉湯法

4、(自動化法)可用于厭氧菌、苛氧菌計算機管理快速，但可能有錯誤（如誘導型菌）新藥的評價112021/7/20 星期二藥敏試驗方法1（紙片擴散法材料：浸有一定Abs的干燥的園濾紙片步驟：制備菌懸液涂平板貼紙片孵育卡尺測量抑菌圈直徑判定R、I、S優(yōu)點：選藥靈活、便宜、一個平皿可測多個藥缺點：影響因素多適用于快生長菌、部分苛養(yǎng)菌122021/7/20 星期二紙片擴散法影響因素MIC接種菌量細菌生長率抗生素含量、擴散性平皿厚度溫度，預孵育時間132021/7/20 星期二紙片擴散法標準化NCCLS：美國實驗室標準化委員會(National Committee for Clinical Laborator

5、y Standards)每年修訂更改包括質(zhì)控新藥的判定標準特殊耐藥性的檢測142021/7/20 星期二NCCLS的法規(guī)規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標準、質(zhì)控規(guī)定常規(guī)測試報告的抗生素不同的藥判定標準不同不同的菌判定標準也不同152021/7/20 星期二常規(guī)測試并報告的藥物分組(1) 腸桿菌科綠膿和非腸桿菌科一 級 氨芐頭孢他啶 唑林，慶大慶大，替卡，哌拉二級 阿米卡星阿米卡星 氨芐/舒，阿莫/克吡肟，哌酮，氨曲南 頭孢膚肟，頭霉環(huán)丙，亞胺培南，替卡/克 噻肟，曲松，環(huán)丙妥布，磺胺 亞胺培南，替卡，哌拉三級 氨曲南，頭孢他啶頭孢曲松 卡那，奈替，妥布氯霉素，奈替 四環(huán)素，氯霉

6、素 162021/7/20 星期二常規(guī)測試并報告的藥物分組(2) 葡萄球菌腸球菌一級 苯唑，青霉素青霉素，氨芐二級 紅霉素類萬古霉素 克林，萬古三級 氯霉素慶大172021/7/20 星期二常規(guī)測試并報告的藥物分組(3) 流感嗜血桿菌肺炎鏈球菌一級 氨芐，青霉素青霉素，紅霉素 TMP/SMZ TMP/SMZ二級 頭孢膚肟，噻肟氧氟，四環(huán)素 他啶，氯霉素 萬古霉素三級 阿奇，頭孢克羅氯霉素，利福平 環(huán)丙，亞胺培南利福平，四環(huán)素182021/7/20 星期二預報用藥(一) 測試藥菌名推測其它藥物的敏感性 苯唑西林葡萄球菌所有內(nèi)酰胺類 四環(huán)素所有（除葡多西環(huán)素，米諾環(huán)素 萄球菌和不 動桿菌紅霉素G球

7、菌羅紅，克拉，阿奇克林霉素所有林可霉素192021/7/20 星期二預報用藥(二)測試藥菌名推測其它藥物的敏感性氨芐西林腸球菌青霉素青霉素G葡萄球菌氨芐，美洛，替卡頭孢噻吩腸桿菌科拉定，頭孢氨芐，克羅奈啶酸s腸桿菌科所有FQs萬古霉素s所有替考拉寧s202021/7/20 星期二紙片擴散法操作規(guī)程(一)培養(yǎng)基：MH (重復性好，低抑制劑，營養(yǎng)好)厚度：4mmPH：7.27.4pH低時，氨基糖甙,大環(huán)內(nèi)酯 pH高時，青霉素類的活性 離子濃度 (Ca 2+ , Mg 2+ )影響 氨基糖甙類、四環(huán)素對Pae活性高時，抑菌圈；212021/7/20 星期二紙片擴散法操作規(guī)程(二)接種：純的新鮮菌落，

8、0.5號麥氏比濁管菌懸液在15分鐘內(nèi)種入平皿內(nèi)紙片中心的間距=24mm孵育：CO2影響Ags, Tet, Macrolides質(zhì)控: ATCC25922, 35218 ATCC27853, ATCC25923222021/7/20 星期二紙片擴散法結果的判定1. 先看菌名（鑒定到種2. 不同的藥物使用不同的折點藥名菌名RS菌株1菌株2Pip/Taz綠膿171816R30SCAZ綠膿 141816I19S3. 同是S時，偏離敏感折點越高的藥, MIC越低，活性也越高232021/7/20 星期二抑菌圈的分布242021/7/20 星期二抑菌圈的分布252021/7/20 星期二非NCCLS系統(tǒng)的

9、擴散試驗方法國家學會培養(yǎng)基評論比較法UKBSACIso-Sensitest不校正MICsStokesUKBSACIso-Sensitest不校正MICsSFM法國SFMMH與NCCLS相近DIN德國DINMH與NCCLS相近SIR瑞典SMSPDMASMMIC相關值低Neo-sensitabs丹麥、比利時MH藥片，易保存雙歧澳大利亞Sensitest無中介262021/7/20 星期二藥敏試驗的錯誤來源(一)每個系統(tǒng)特有的局限性 （快生長菌培養(yǎng)基（成分、厚度、pH、離子濃度）各種材料的正確保存 (紙片20)操作步驟純菌、35、1628h葡萄球菌、腸球菌 24h272021/7/20 星期二藥敏試

10、驗的錯誤來源(二)體內(nèi)、體外試驗的不一致性某些菌測某些藥，結果有誤頭孢菌素、氨基糖甙類：沙門菌、志賀菌頭孢菌素：李斯特菌屬頭孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ：腸球菌Beta內(nèi)酰胺類：MRS即使敏感，也應報告耐藥282021/7/20 星期二問題菌和耐藥機制有些菌無標準化的藥敏試驗棒桿菌、芽胞桿菌、氣單胞菌、巴斯德菌某些耐藥機制需要多種檢測方法誘導型：VanB, Bush I型酶MRS的異質(zhì)型表達ESBL藥敏可能無法檢出新出現(xiàn)的耐藥，VISA292021/7/20 星期二藥敏試驗方法2肉湯稀釋法 4 816 32 64 128 256 ug/ml 混 混 清抗生素倍比稀釋，種菌105CFU/

11、ml ， 孵育35，16-20h，判讀302021/7/20 星期二藥敏試驗方法2肉湯稀釋法調(diào)節(jié)離子濃度的MH肉湯宏量肉湯法（2ml, 13x100mm ）微量肉湯法 （ 0.1ml, 微量板） 自動化儀優(yōu)點：準確，可靠，可用于研究缺點：勞動強度大細菌生長情況不可查312021/7/20 星期二藥敏試驗方法3瓊脂稀釋法 濃度 16 32 64 128 256 ug/ml 制備含對倍抗生素濃度梯度的平板，制備菌懸液，點種菌，104/每個點，孵育，判讀結果322021/7/20 星期二藥敏試驗方法3瓊脂稀釋法優(yōu)點：金標準 精確可靠可同時測定多株菌（40株）細菌生長情況可查缺點： 測多個藥時勞動強度

12、大制備平皿費時費力332021/7/20 星期二藥敏試驗方法4E test 法 細菌生長區(qū)E test 塑料條橢圓形細菌生長抑制區(qū)256128 8016判讀抑菌濃度（MIC ug/ml)342021/7/20 星期二藥敏試驗方法4E test 法優(yōu)點連續(xù)濃度梯度，與瓊脂稀釋法相關性好影響因素少，穩(wěn)定性高操作簡單，省時缺點：昂貴用途：快生長菌，苛養(yǎng)菌，厭氧菌，酵母菌， 分枝桿菌352021/7/20 星期二評價藥物體外抗菌活性的指標MIC50, MIC90, MIC 均值， MIC 范圍，R，I，SMIC50/ MIC90：MIC從小到排列，位于第50 / 90百分位菌株的MIC值單純比較MIC

13、50，MIC90是片面的，還要同時看平均MIC及MIC范圍同時結合R，I，S，（不同藥物血濃度不同，安全范圍不同362021/7/20 星期二抗生素細 菌人 體 RESISTANCEPHARMACODYNAMICSINFECTIONIMMUNITYSIDE EFFECTSPHARMACOKINETICS抗生素、細菌、人體372021/7/20 星期二382021/7/20 星期二Time above MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility)of an organism Time above MICTim

14、eAntibiotic concentration (ug/ml)2Drug ADrug BABDrug A present at concentration of 2 ug/ml for 50% of dosing intervalDrug B present at concentration of 2 ug/ml for 30% of dosing interval468039Slide no2021/7/20 星期二Relationship between Time above MIC and efficacy in animal infection models020406080100

15、020406080100Time above MIC (%)PenicillinsCephalosporinsMortality after 4 days of therapy (%)Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213217402021/7/20 星期二Antibiotic concentrationMIC TimeArea under the curve over MIC24-hr AUC/MIC is correlated with outcome of infection, the magnitude required for s

16、uccess and MIC at which this occurs becomes the PD breakpoint 24-hr AUC/MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility)of an organism 41Slide no2021/7/20 星期二The relationship between time above MIC90and bacteriological cure in S. pneumoniae (red) andH. influenzae (blue) in otitis m

17、edia and sinusitisOtitis mediaSinusitisTime Above MIC (% of dosing interval)Bacteriological cure (%)020406080100020406080100Craig, ECCMID 2000, Stockholm, Sweden42Slide no2021/7/20 星期二抗生素選擇時需考慮的因素藥物感染部位濃度對細菌MIC結果微生物學抗菌機制抗菌譜藥代動力學吸收、分布、代謝、排泄給藥方案藥效學時間/濃度依賴型殺菌劑/抑菌劑組織滲透抗菌時效臨床效果細菌清除患者依從性耐受性耐藥產(chǎn)生432021/7/20

18、 星期二抗生素治療失敗的主要原因病人相關原因依從性差不適當給藥途徑免疫抑制病灶藥物原因給藥劑量與方式不當藥效學考慮欠妥藥物失活微生物相關的原因病原確立錯誤治療中出現(xiàn)耐藥抗菌活性不足接種效應其他原因非感染（誤診）基礎疾病442021/7/20 星期二抗生素藥效學與藥代動力學關系研究 PK/PD藥代條件下的藥效 PARAMETERS：PK：Cmax、AUC、T1/2 PD：MIC PK/PD：AUC/MIC Cmax/MIC TMIC452021/7/20 星期二抗生素藥效學與藥代動力學關系研究 抗生素PK/PD分類抗生素分類PK/PD 參數(shù)藥物時間依賴型（短PAE）TMIC青霉素類、頭孢菌素類、氨曲南、碳青霉烯類、大環(huán)內(nèi)酯類、克林霉素、惡唑烷酮類、氟胞嘧啶時間依賴型（長PAE）AUC24/MIC鏈陽霉素、四環(huán)素、萬古霉素、替考拉林、氟康唑、阿齊霉素濃