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文檔簡(jiǎn)介

DukesA、B期大腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)及其對(duì)預(yù)后的影響:附全文PDFSCI〔〕:

【作者】湯睿王兵唐思聰劉炳亞朱正綱

【關(guān)鍵詞】結(jié)腸直腸腫瘤腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)后病理學(xué)臨床

【出版日期】2022-09-25

【摘要】目的:討論DukesA、B期大腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)和淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移對(duì)預(yù)后的影響。方法:于前瞻性研究31例行根治性手術(shù)的DukesA、B期大腸癌病人,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響(RT-PCR)檢測(cè)所去除的398枚淋巴結(jié)中細(xì)胞角蛋白(cytokeratin,CK)20mRNA的表達(dá)以檢出微轉(zhuǎn)移;經(jīng)5年以上的隨訪,討論淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移對(duì)預(yù)后的影響和術(shù)后復(fù)發(fā)的可能原因。結(jié)果:在31例DukesA、B期大腸癌病人的398枚淋巴結(jié)中,有15例(48.39%)共46枚(11.56%)淋巴結(jié)檢出微轉(zhuǎn)移。單因素分析提示微轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)數(shù)量、位置及腫瘤生長(zhǎng)方式與術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān);Logistic多元回歸模型提示,3枚以上淋巴結(jié)發(fā)生微轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)嚴(yán)密聯(lián)絡(luò)。

結(jié)論:CK20RT-PCR是檢測(cè)DukesA、B期大腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移靈敏而特異的方法。3枚以上淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移是預(yù)示復(fù)發(fā)的獨(dú)立因素。

【刊名】外科理論與理論

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況是判斷大腸癌病人預(yù)后和指導(dǎo)術(shù)后化療的重要指標(biāo)[1,2]。常規(guī)的病理組織學(xué)檢查在敏感性等許多方面存在缺乏,近年通過連續(xù)切片、免疫組化和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響(PT-RCR)等方法均可在局部蘇木精-伊紅(HE)染色陰性的淋巴結(jié)中檢出微小轉(zhuǎn)移【1】。筆者既往也曾應(yīng)用RT-PCR法進(jìn)展大腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)RT-PCR法檢出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感性高于HE染色,并能檢出HE陰性淋巴結(jié)中的微轉(zhuǎn)移灶【3】。DukesA、B期是指HE檢查未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,預(yù)后相對(duì)較好,但其中仍有10%~25%的病人在術(shù)后5年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)【2】。因此本研究針對(duì)DukesA、B期病人,仍采用RT-PCR法檢測(cè)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移,并討論淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的發(fā)生對(duì)預(yù)后的影響。

材料與方法

一、病例資料和標(biāo)本采集前瞻性研究。

所有病例均為1999年1~12月入我院普外科,實(shí)驗(yàn)終止于2022年12月。入組條件:①行根治性手術(shù)的大腸癌病人,經(jīng)術(shù)后常規(guī)病理檢查分期為DukesA、B期;②術(shù)前無放、化療史。術(shù)后定期檢查隨訪,隨訪期均超過5年,排除失訪者和因其他病因?qū)е滤劳龅牟±?。至?shí)驗(yàn)終止共搜集31例病人。術(shù)后總隨訪期為60~70個(gè)月,期間記錄病人的復(fù)發(fā)情況,死亡病人的生存期為手術(shù)至腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)死亡的時(shí)間,存活病人的生存期為手術(shù)至研究終止的實(shí)際時(shí)間。31例大腸癌病人中男17例,女14例;年齡32~80歲,平均(60.213.7)歲。結(jié)腸癌18例,直腸癌13例;DukesA期5例,DukesB期26例;腫瘤超過腸腔周徑1/2者11例,未超過者20例;腫瘤呈膨脹型生長(zhǎng)14例,浸潤(rùn)型生長(zhǎng)17例;病理檢查分化好5例,中等分化18例,分化差8例。手術(shù)切除的標(biāo)本立即別離淋巴結(jié)并取一小塊腫瘤組織,每枚淋巴結(jié)縱行切開,一半做常規(guī)病理切片HE染色,另一半與腫瘤組織液氮凍存直至RNA抽提。淋巴結(jié)總數(shù)為398枚,平均每例病人(14.76.3)枚。此外,取2例良性胃腸道病變的15枚淋巴結(jié)(1例胃潰瘍病人10枚,1例直腸腺瘤病人5枚)作為陰性對(duì)照;取2例DukesC期大腸癌病人的8枚HE染色陽性淋巴結(jié)作為陽性對(duì)照。

二、RT-PCR檢測(cè)方法本

實(shí)驗(yàn)采用RT-PCR法定性檢測(cè)淋巴結(jié)中細(xì)胞角蛋白(CK)20mRNA的表達(dá),同時(shí)選擇管家基因GAPDH作為內(nèi)參證明抽提RNA的完好性。Trizol試劑(華舜公司產(chǎn)品)抽提組織總RNA(詳細(xì)步驟詳見操作手冊(cè)),取局部RNA樣品稀釋后測(cè)光密度(OD)值,OD260/OD280為1.8~2.0,并換算濃度。采用AccessRT-PCR試劑盒(Promega),逆轉(zhuǎn)錄和PCR在同一試管、單一緩沖液中完成。每個(gè)RNA樣品分別用CK20和GAPDH引物進(jìn)展RT-PCR反響。反響體系25l,含5x緩沖液5l(終濃度為1)x,dNTP0.5l(終濃度0.2mM),上游和下游引物各0.5l(終濃度1M),25mMMgSO41l(終濃度1mM),AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、TflDNA合成酶各0.5l(終濃度0.1M/l)和1g總RNA。加樣完成后,細(xì)微振蕩混勻,放入PTC-100TM熱循環(huán)儀(MJResearch)。首先48℃、45min進(jìn)展逆轉(zhuǎn)錄(cDNA第1鏈合成),然后94℃、2min使AMV酶失活并使RNA/cDNA/引物變性,以后按以下條件合成cDNA第2鏈和進(jìn)展PCR擴(kuò)增。CK20引物存在時(shí)反響條件為94℃1min、62℃2min、68℃2min共40次循環(huán);GAPDH引物存在時(shí)為94℃1min、63℃1min、68℃2min共30次循環(huán),最后68℃7min。引物序列如下:CK20,正義:5-prime;CAGACACACGGTGAACTATGG-3,prime;反義:5-prime;GATCAGCTTCCACTGTTAGACG-3;prime;GAPDH,正義:5-prime;ATGGCACCGTCAAGGCTGAG-3,prime;反義:5-prime;CGCCTGCTTCACCACCTTCT-3prime;。擴(kuò)增終產(chǎn)物長(zhǎng)度分別為370bp和626bp。同時(shí)用不加RNA的反響體系進(jìn)展PCR擴(kuò)增作為空白對(duì)照;不加AMV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)展PCR擴(kuò)增排除基因組DNA的污染。取10lRT-PCR產(chǎn)物在含0.5l/ml溴乙錠的1.5%瓊脂糖凝膠中進(jìn)展電泳,電泳后的凝膠由Floruo-SMultiImage全自動(dòng)圖像分析儀(BIORAD)掃描并打印成像。PCR產(chǎn)物應(yīng)用ABIPTISMBigDyeTMTerminatorCycleSequencingReadyReac-tionKitwithAmpliTaqDNAPolymerase,FS(PerkinElmer),采用ABIPTISMTM377XLDNA測(cè)序儀檢測(cè)序列。

三、統(tǒng)計(jì)方法

大腸癌病人發(fā)生淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與各臨床病理因素的相關(guān)性分析采用Fish確切概率法。生存率的計(jì)算采用Kaplan-Meier法,Log-rank檢驗(yàn)比擬不同組的生存率。各因素與復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度單因素分析采用Mantel-Haenszel法,多因素分析采用Logistic回歸模型。所有統(tǒng)計(jì)計(jì)算由SAS軟件(v6.12)完成。

結(jié)果

一、樣本檢測(cè)結(jié)果

1.腫瘤、對(duì)照樣本:31例大腸癌病人的腫瘤組織和2例良性胃腸道疾病的病變組織(胃潰瘍和直腸腺瘤組織)RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳均可見370bp的條帶(圖1),即表示有CK20mRNA的表達(dá);2例良性胃腸道病變的15枚淋巴結(jié)RT-PCR結(jié)果均為陰性(見圖2),而2例DukesC期病人的8枚HE染色陽性淋巴結(jié)RT-PCR結(jié)果均為陽性。以上標(biāo)本GAPDH的RT-PCR產(chǎn)物均可見626bp的條帶,證實(shí)RNA完好無降解。不加RNA的反響體系作為空白對(duì)照進(jìn)展PCR擴(kuò)增結(jié)果為陰性;不加AMV逆轉(zhuǎn)外科理論與理論2022年第10卷第5期錄酶的反響體系進(jìn)展PCR擴(kuò)增結(jié)果為陰性,證實(shí)無基因組DNA的污染。將存在CK20引物的陽性PCR產(chǎn)物進(jìn)展測(cè)序,結(jié)果與GeneBank檢索所獲得的序列一致,提示RT-PCR結(jié)果正確。

2.大腸癌病人的淋巴結(jié)樣本:31例DukesA、B期大腸癌病人的398枚淋巴結(jié)中,有15例共46枚淋巴結(jié)RT-PCR結(jié)果為陽性(見圖3),即存在微轉(zhuǎn)移,淋巴結(jié)數(shù)陽性率為11.6%,例數(shù)陽性率48.4%。其中5例DukesA期大腸癌病人的50枚淋巴結(jié)中有2例3枚淋巴結(jié)檢出微轉(zhuǎn)移;26例DukesB期大腸癌病人共348枚淋巴結(jié)中有13例43枚淋巴結(jié)檢出微轉(zhuǎn)移。所有病例中發(fā)現(xiàn)有3枚以上淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移者8例(25.8%),均為DukesB期;發(fā)現(xiàn)N2站以上淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移者9例(29.0%),也均為DukesB期。

二、大腸癌出現(xiàn)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與各臨床病理因素的關(guān)系

31例DukesA、B期大腸癌病人微轉(zhuǎn)移的發(fā)生與病人的年齡、性別、腫瘤進(jìn)犯腸管周徑、生長(zhǎng)方式、分化程度和Dukes分期等臨床病理因素均無顯著相關(guān)(見表1)。

三、隨訪結(jié)果及預(yù)后

至研究終止,共有8例病人出現(xiàn)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。其中5例為肝轉(zhuǎn)移,3例局部復(fù)發(fā),除2例術(shù)后發(fā)現(xiàn)肝左葉單發(fā)轉(zhuǎn)移灶再手術(shù)切除目前分別存活63和68個(gè)月外,其余均死亡,5年生存率為80.6%。JSurgConceptsPract2022,Vol.10,No.5*:P1/2周)0.7679生長(zhǎng)方式(浸潤(rùn)型/膨脹型)0.0184*分化程度(好、中/差)0.2554微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)(ge;3/0~3)0.0059*Delta;發(fā)生微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的位置(N2以上/N1或無)0.0155*生1.000.750.500.25存率0.00010203040506070術(shù)后時(shí)間(月)a.根據(jù)有無微轉(zhuǎn)移分組無微轉(zhuǎn)移組(n=16)微轉(zhuǎn)移組(n=15)P>0.05生存率1.000.750.500.250.000~2個(gè)陽性淋巴結(jié)組(n=23)3個(gè)以上陽性淋巴結(jié)組(n=8)P=0.0053010203040506070術(shù)后時(shí)間(月)b.根據(jù)微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)量分組生存率1.000.750.500.250.00N0,N1(n=22)N2,N3(n=9)P=0.0124010203040506070術(shù)后時(shí)間(月)c.根據(jù)微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)位置分組圖4不同微轉(zhuǎn)移大腸癌病人的術(shù)后生存率表2DukesA、B期大腸癌復(fù)發(fā)原因的單因素分析臨床病理因素陽性(n=8)復(fù)發(fā)陰性(n=23)PRR95%CI年齡(歲)ge;62/1/2周3/58/151.00001.09090.3196~3.7240生長(zhǎng)方式浸潤(rùn)型/膨脹型7/110/130.0454*5.76470.8021~41.4311分化程度好、中/差7/116/70.64172.43480.3517~16.8534微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)(n)ge;3/0~35/33/200.0135*4.79171.4667~15.6545發(fā)生微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的位置N2以上/N1或無5/34/190.0272*4.07411.2233~13.6678*P1/2周7/86/120.4928生長(zhǎng)方式浸潤(rùn)型/膨脹型10/58/80.4725分化程度好、中/差12/311/50.6853Dukes分期A期/B期2/133/131.00001.淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移對(duì)生存的影響:微轉(zhuǎn)移組5年生存率為66.7%(10/15),無微轉(zhuǎn)移組為93.8%(15/16),兩組無顯著差異(圖4a)。3枚淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移組的5年生存率為50.0%(4/8),而少于3枚組為91.3%(21/23),兩組差異顯著(圖4b)。N2站及以上淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移組的5年生存率為55.6%(5/9),N1站及無轉(zhuǎn)移組為90.9%(20/22),兩組差異顯著(圖4c)。2.復(fù)發(fā)危險(xiǎn)度分析:單因素分析提示,腫瘤呈浸潤(rùn)型生長(zhǎng)、>3枚淋巴結(jié)和N2站以上淋巴結(jié)有微轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)關(guān)系顯著(表2)。Logistic回歸分析提示,>3枚淋巴結(jié)有微轉(zhuǎn)移是復(fù)發(fā)的獨(dú)立因素(表3)。表3DukesA、B期大腸癌復(fù)發(fā)原因多元Logistic回歸分析外科理論與理論2022年第10卷第5期

討論

一、大腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)方法

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是判斷大腸癌預(yù)后和指導(dǎo)術(shù)后化療的重要指標(biāo)。長(zhǎng)期以來,臨床上采用病理切片HE染色判斷淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況,并將無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、HE染色未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者定義為DukesA、B期。但仍有10%~25%組織學(xué)證實(shí)淋巴結(jié)陰性的病人在術(shù)后5年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)【2】,近年用連續(xù)切片、免疫組化和PT-RCR等多種方法對(duì)HE染色陰性淋巴結(jié)進(jìn)展檢測(cè),均發(fā)現(xiàn)其中的局部淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移【1】。因此,用HE染色法檢測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感性是不夠的。其他方法中,連續(xù)切片法工作量過大,臨床難以推廣。免疫組化法盡管有助于檢出淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移,但目前可供選擇的抗體其特異性和敏感性還不能滿足診斷的要求,作為一種形態(tài)學(xué)方法,還存在陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)不一致的缺點(diǎn),且切片的數(shù)量有限,缺乏以反映整個(gè)淋巴結(jié)的情況,能否作為預(yù)后指標(biāo)也存在爭(zhēng)議[1,4~6]。RT-PCR法通過逆轉(zhuǎn)錄并擴(kuò)增正常被檢組織不表達(dá)而腫瘤或腫瘤來源組織表達(dá)的mRNA以證實(shí)微轉(zhuǎn)移的存在,由于PCR強(qiáng)大的擴(kuò)增效應(yīng),具有很高的敏感性,可以在105~107個(gè)正常細(xì)胞中檢出1個(gè)腫瘤細(xì)胞[1,3]。本實(shí)驗(yàn)選擇的靶RNA是CK20mRNA,CK20是一種細(xì)胞骨架蛋白,在正常人體內(nèi)的表達(dá)主要局限于胃腸道上皮,而在正常淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞中不表達(dá)【7】,同時(shí)CK20在幾乎所有大腸癌組織中均表達(dá)[8],因此具有較高的特異性,是目前用于大腸癌微轉(zhuǎn)移檢測(cè)的最常用指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)中所有大腸癌病人的腫瘤組織和2例良性胃腸道疾病的病變組織均表達(dá)CK20mRNA,而2例良性胃腸道疾病的15枚陰性淋巴結(jié)均不表達(dá),證實(shí)CK20RT-PCR具有較高的特異性。31例病人的398枚淋巴結(jié)中,有15例46枚淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移,說明該法能發(fā)現(xiàn)DukesA、B期大腸癌淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移,淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移在DukesA、B期大腸癌病人中并不少見。

二、淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)的臨床意義及其對(duì)預(yù)后的影響

在較早開展研究的乳腺癌[9]和黑色素瘤[10]研究報(bào)道中,認(rèn)為淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)對(duì)預(yù)后有影響,并已用于前哨淋巴結(jié)的檢測(cè)。而對(duì)于大腸癌,其意義仍存在爭(zhēng)議,有認(rèn)為淋巴結(jié)即使存在微轉(zhuǎn)移也已被切除;也有認(rèn)為由于敏感性過高,檢出的腫瘤細(xì)胞并不具有活性。對(duì)預(yù)后的影響有不同的報(bào)道結(jié)果,免疫組化方面報(bào)道多認(rèn)為對(duì)預(yù)后無影響【1】,RT-PCR的一些報(bào)道那么認(rèn)為其是影響術(shù)后復(fù)發(fā)和生存的重要因素[11,12]。其實(shí)這些結(jié)果都可從以下方面來理解和解釋:①淋巴道是大腸癌早期轉(zhuǎn)移的重要途徑,淋巴結(jié)存在轉(zhuǎn)移也間接提示其他部位存在微小轉(zhuǎn)移,只不過常規(guī)檢查未能發(fā)現(xiàn)而已,這也就是為什么大局部DukesC期病人雖進(jìn)展了包括淋巴結(jié)清掃的根治術(shù),但仍有不少病人術(shù)后復(fù)發(fā),且多數(shù)為肝轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)而非淋巴結(jié);此外,近年提出的"淋巴血管生成";理論也是重要佐證[13];②僅一局部微小轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞最終能開展形成顯性轉(zhuǎn)移,其發(fā)生與轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞本身的基因型、表型、局部微環(huán)境以及是否能誘導(dǎo)腫瘤血管生成等諸多因素有關(guān)[13];③各實(shí)驗(yàn)室采用的方法、操作步驟不統(tǒng)一,研究樣本較小。從本研究的結(jié)果來看,如將病例分為淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移組和無微轉(zhuǎn)移組,盡管前者的5年生存率低于后者,但統(tǒng)計(jì)學(xué)無差異。如按照淋巴結(jié)個(gè)數(shù)或分站進(jìn)展比擬,有3枚淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移組病人的生存率顯著低于3枚以下組,N2及以上淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移組的生存率顯著低于N1及無轉(zhuǎn)移組,提示微轉(zhuǎn)移負(fù)荷量和到達(dá)位置可能較單純顯示微轉(zhuǎn)移存在對(duì)于推斷預(yù)后更有價(jià)值。對(duì)復(fù)發(fā)因素進(jìn)展危險(xiǎn)度分析,單因素分析發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)型生長(zhǎng)、3枚以上淋巴結(jié)和N2以上淋巴結(jié)發(fā)生微轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)關(guān)系顯著;多元回歸分析,3枚以上淋巴結(jié)發(fā)生微轉(zhuǎn)移是復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)后因素。提示DukesA、B期病人如發(fā)現(xiàn)這些情況,那么是復(fù)發(fā)的高危病例,應(yīng)該進(jìn)展更積極的隨訪觀察和治療,比方對(duì)這些DukesA期病人也應(yīng)進(jìn)展化療,DukesB期病人應(yīng)調(diào)整放、化療方案,隨訪檢查應(yīng)更加細(xì)致等。

三、技術(shù)更新和前景

前文曾提到RT-PCR法的一些缺乏和局限【3】,近年來技術(shù)方法的改良使情況有所改善,如采用定量RT-PCR法[14]使實(shí)驗(yàn)更加快捷、簡(jiǎn)便,也有助于減少假陽性率;通過顯微切割技術(shù)[15]已可以抽提蠟塊組織的mRNA,使大規(guī)模的回憶性研究成為可能。雖然本研究是國(guó)內(nèi)首例報(bào)道RT-PCR檢測(cè)DukesA、B期大腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移對(duì)預(yù)后影響的前瞻性研究,但仍然只是一個(gè)小樣本研究。對(duì)于是否可以將有淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的DukesA、B期病人提JSurgConceptsPract2022,Vol.10,No.5升為C期,是否可將此作為指導(dǎo)放、化療的指征等問題,仍然需要統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)操作的大樣本、多中心研究才能得出結(jié)論??傊?CK20RT-PCR法是檢測(cè)DukesA、B期大腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移較為敏感而特異的方法,發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)數(shù)量、位置和腫瘤生長(zhǎng)方式與術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān),3枚以上淋巴結(jié)發(fā)生微轉(zhuǎn)移是復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)后因素。DukesA、B期大腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)及其對(duì)預(yù)后的影響@湯睿$上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬第九人民醫(yī)院普外科!上海200011@王兵$上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬第九人民醫(yī)院普外科!上海200011@唐思聰$上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬第九人民醫(yī)院普外科!上海200011@劉炳亞$上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院普外科上海消化外科研究所!上海200025@朱正綱$上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院普外科上海消化外科研究所!上海200025結(jié)腸直腸腫瘤;;腫瘤轉(zhuǎn)移;;預(yù)后;;病理學(xué),臨床目的

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