UU核酸檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明書(修改)

UU核酸檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明書(修改)UU核酸檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明書(修改)UU核酸檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明書(修改)UU核酸檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明書(修改)編制僅供參考審核批準(zhǔn)生效日期地址：電話：傳真:郵編:解脲脲原體（UU）核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：解脲脲原體（UU）核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)英文名稱：DetectionKitforNucleicAcidofUreaplasmaurealyticum(PCR-fluorescenceprobing)【包裝規(guī)格】32人份/盒【預(yù)期用途】本試劑盒用于定性檢測尿道、生殖道分泌物拭子樣本中的解脲脲原體核酸成分，主要用于解脲脲原體感染的臨床輔助診斷。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)研究，解脲支原體有14株脲原體標(biāo)準(zhǔn)血清型可分為微小脲原體（Ureaplasmaparvum，UP）1、3、6、14和解脲脲原體（Ureaplasmaurealyticum，UU）2、4、5、7、8、9、10、11、12、13，其中UP為條件致病菌，致病性與其含量有關(guān)，且普通人也有攜帶少量UP。UU是引起非淋球菌性尿道炎、陰道炎等病癥的主要致病菌之一，也是引起輸卵管炎、盆腔炎、慢性前列腺炎、流產(chǎn)、產(chǎn)后熱等的重要病原菌之一。目前，臨床上常用的脲原體檢測方法有液體培養(yǎng)和核酸檢測，但其并不能鑒別出其病菌是UP還是UU?！緳z驗原理】本試劑盒選用針對解脲脲原體（UU）特異性基因片段設(shè)計特異引物及特異Taqman熒光探針，該探針能與引物擴(kuò)增區(qū)域中間的一段DNA摸板發(fā)生特異性結(jié)合，在PCR延伸反應(yīng)過程中，Taq酶的外切酶活性將5′端熒光基團(tuán)從探針上切割下來，使之游離于反應(yīng)體系中，從而脫離了3′端熒光淬滅基團(tuán)的屏蔽，即能接受光刺激而發(fā)出可供儀器檢測的熒光，從而實現(xiàn)在全封閉反應(yīng)體系中對解脲脲原體（UU）核酸的自動檢測，發(fā)出熒光信號的強(qiáng)度與UU-DNA的量呈正相關(guān)?！局饕M成成份】序號組分名稱裝量每個反應(yīng)體系用量主要成份1核酸提取液50μl含NaCl、NaOH、EDTA、NP-402PCR反應(yīng)液500ul15μl含Taq酶、UDG酶、10×buffer、dNTP3UU引物探針120ulμlUU特異性引物和探針5MgCl2350ulμlMgCl2、水6陽性對照300ul-UU培養(yǎng)物7陰性對照300ul-純水8UU標(biāo)準(zhǔn)品110ul-質(zhì)粒(106拷貝/μl)9UU標(biāo)準(zhǔn)品210ul-質(zhì)粒(105拷貝/μl)10UU標(biāo)準(zhǔn)品310ul-質(zhì)粒(104拷貝/μl)11UU標(biāo)準(zhǔn)品410ul-質(zhì)粒(103拷貝/μl)注：不同批號試劑盒中各組份不能互換?！緝Υ鏃l件及有效期】試劑應(yīng)儲存在-20℃保存，產(chǎn)品有效期為12個月，未使用完的試劑繼續(xù)冷凍保存不影響其穩(wěn)定性，但試劑反復(fù)凍融不得超過3次。生產(chǎn)日期、有效期至：見標(biāo)簽字樣?！具m用儀器】具有FAM、JOE熒光檢測通道的ABI7300/7500、ABI7500Fast、LightCycler480等實時熒光定量PCR儀。【樣本要求】使用藻酸鈣拭子、普通棉拭子或滌綸拭子采集尿道、生殖道部位帶柱狀上皮細(xì)胞的分泌物樣本，應(yīng)當(dāng)選用國家批準(zhǔn)生產(chǎn)的一次性使用的男性拭子或女性拭子，拭子應(yīng)當(dāng)包括套管、棉簽桿、塞子，棉簽桿與塞子都應(yīng)連接牢固。尿道：對男性患者，先用生理鹽水清洗尿道口，將男用取材拭子插入尿道內(nèi)1-2cm，稍用力轉(zhuǎn)動，保留數(shù)秒鐘再取出，以采集到粘膜上皮細(xì)胞。對女性患者，可低著恥骨聯(lián)合輕輕按摩尿道后，用同男性相似的方法取材。宮頸：取材前用溫水或生理鹽水濕潤擴(kuò)陰器，應(yīng)避免使用防腐劑和潤滑劑。如果宮頸口外面的分泌物較多，先用無菌棉拭清除過多的分泌液，將女用取材拭子插入宮頸管內(nèi)2-3cm，稍用力轉(zhuǎn)動，保留數(shù)秒，采集陰道分泌物。陰道：對于子宮切除的婦女和青春期前女孩可采用陰道樣本。將取材拭子置于陰道后穹窿10-15s，采集陰道分泌物。如果處女膜完整，則從陰道口取材。【檢驗方法】1.樣本處理（在樣本處理區(qū)進(jìn)行）：（1）標(biāo)本中加入1ml無菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，吸取200μl液體轉(zhuǎn)至離心管中，12000rpm離心5分鐘，棄上清取沉淀加入50μl核酸提取液，震蕩混勻，100℃水浴或金屬浴10min，12000rpm離心5min，吸取上清進(jìn)行PCR擴(kuò)增用（如樣本裂解產(chǎn)物當(dāng)天不使用，請于-20℃保存。）（2）陰性對照、陽性對照直接取出100μl，12000rpm離心5分鐘，棄上清取沉淀，加入50μl核酸提取液，震蕩混勻后，100℃水浴或金屬浴10min，12000rpm離心5min，備用。注：若樣本沉淀過少，吸取上清時需注意留少許底部液體。2.擴(kuò)增試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）從試劑盒中取出PCR反應(yīng)液、引物等，在室溫下融化，振蕩混勻，根據(jù)檢測樣本數(shù)準(zhǔn)備反應(yīng)試劑[n=樣本數(shù)+7]。取PCR反應(yīng)液n×15ul，UU引物探針n×，去離子水n×，加入一個離心管中震蕩混勻后，2000rpm離心數(shù)秒，分別吸取28ul至PCR反應(yīng)管中。3.加樣（樣本處理區(qū)）分別加入樣本2ul，標(biāo)準(zhǔn)品各2ul，陰性、陽性對照2ul，蓋緊反應(yīng)管，轉(zhuǎn)移至檢測區(qū)。4.PCR擴(kuò)增及熒光檢測（PCR檢測區(qū)）將各反應(yīng)管按一定順序放入PCR儀上，按以下程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增：步驟循環(huán)數(shù)溫度時間1UNG酶反應(yīng)150℃2mim2預(yù)變性195℃2min2變性595℃15sec退火，延伸59℃35sec3變性3595℃15sec退火，延伸59℃35sec步驟中59℃時熒光檢測，樣本檢測通道：FAM；內(nèi)參檢測通道：JOE。【參考值（參考范圍）】1.陽性對照的測定結(jié)果為陽性，且Ct≤32；2.陰性對照的測定結(jié)果為陰性（Ct＞32）；3.應(yīng)同時滿足上述2項條件，否則試驗無效。【檢驗結(jié)果的解釋】閾值設(shè)定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照品的最高點，陽性對照Ct值32，陰性對照Ct無數(shù)值；在閾值以上的熒光曲線應(yīng)當(dāng)是具有明顯的S型曲線，否則該次實驗視為無效，應(yīng)檢查儀器、試劑、擴(kuò)增條件等方面的誤差。1.Ct值＞32的樣本判為陰性2.Ct值≤32的樣本判為陽性【檢驗方法的局限性】檢測結(jié)果不能直接作為臨床確診或排除病例的依據(jù)，僅供臨床醫(yī)生參考使用?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】靈敏度：本試劑盒的產(chǎn)品檢測下限為100CCU/ml；特異性：本試劑盒與沙眼衣原體（CT）、淋球菌（NG）、HPV18型樣本、微小脲原體、HCMV無交叉反應(yīng)；批內(nèi)精密度：高、中、低3個濃度水平的樣本各連續(xù)重復(fù)10次檢測，其批內(nèi)精密度Ct值的CV值小于5%。【注意事項】有關(guān)實驗室管理規(guī)范請嚴(yán)格按照行業(yè)行政主管部門頒發(fā)的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。本試劑盒僅用于體外檢測。實驗室嚴(yán)格分區(qū)操作：第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)—準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑第二區(qū)：樣本處理區(qū)—待檢測樣本和對照品的處理第三區(qū)：PCR檢測區(qū)—PCR擴(kuò)增檢測各區(qū)物品均為專用，不得交換使用，避免污染，每次實驗完后立即清潔工作臺。使用不含熒光物質(zhì)的一次性手套、一次性專用離心管、自卸式移液搶和帶濾芯吸頭。反應(yīng)液分裝時應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡，上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。加樣時應(yīng)使樣品完全加入反應(yīng)液中，不應(yīng)有樣品粘附于管壁上，加樣后應(yīng)盡快蓋緊管蓋。擴(kuò)增完畢請立即取出反應(yīng)管，密閉在專用塑料袋中，放于指定地點，等待同一處理。實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%的次氯酸鈉的廢物缸內(nèi)，并與其它廢棄物品一同滅菌后丟棄。PCR反應(yīng)混合液應(yīng)避光低溫保存。不同批號的試劑請勿混用，并請在有效期范圍內(nèi)使用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】臨床實驗室定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法HaggertyCL,TottenPA,FerrisM,etal.Clinicalcharacteristicsofbacterialvaginosisamongwomentestingpositiveforfastidiousbacteria.SexTransmInfect,2009,85:242–248.CaoX,WangY,HuX,QingH,WangH.Real-timeTaqManpolymerasechainreactionassaysforquantitativedetectionanddifferentiationofUreaplasmaurealyticumandUreaplasmaparvum.DiagnMicrobiolInfectDis,2007,57:373–378.VancutsemE,SoetensO,BreugelmansM,FoulonW,NaessensA.Modifiedreal-timePCRfordetecting,differentiating,andquantifyingUreaplasmaurealyticumandUreaplasmaparvum.JMolDiagn,2011,13:206–212.趙縝，劉璐，趙芳，等.解脲脲原體相對定量方法的建立及臨床應(yīng)用.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2015，25（18）：3035-3040.劉璐，季育華，趙縝，等.parC檢測在解脲支原體基因分型中的臨床應(yīng)用.中華微生物學(xué)與免疫學(xué)雜志，()2011，31（9）：843-846.注冊人名稱：上海生物科技有限公司住所：大連路1079號