DNA提取、瓊脂糖電泳試劑及配制方法

DNA提取所需試劑及配制方法1.TE(pH8?0)buffer(滅菌)10xTEBuffer（pH7.4，7.6，8.0）組份濃度100mMTris-HCl，10mMEDTA配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。1MTris-HClBuffer(pH7.4，7.6，8.0)100mL500mMEDTA(pH8.0)20mL向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。室溫保存。1MTris-HClbuffer（pH7.4，7.6，8.0）組份濃度1MTris-HCl配制量1L配制方法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。加入約800mL的去離子水，充分攪拌溶解。按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值 濃HCl7.4 約 70mL7.6 約 60mL8.0 約 42mL將溶解定容至1L。高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差很大,溫度每升高1°C,溶液的pH值大約降低0.03個單位。2.10%(w/v)SDS溶液(滅菌)10％(W/V)SDS組份濃度10％(W/V)SDS配制量100mL配制方法1.稱量10g高純度的SDS置于100?200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水，68C加熱溶解。2.滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。3?將溶液定容至100mL后，室溫保存。3.Tris-飽和酚(pH8?0)溶液Tris-HCl平衡苯酚使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應避免使用。同時也應避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160C對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進行分子生物學實驗。操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引起嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行，與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相，因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：液化苯酚應貯存于-20°C，此時的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫，然后在68C水浴中使苯酚充分溶解。加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。加入等體積的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。重復操作步驟③。加入等體積的0.1MTris-HCl（pH8.0）,使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。重復操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。將苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。酚：氯仿：異戊醇（25:24:1）溶液苯酚/氯仿/異戊醇說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25：24：1）質(zhì)變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24：1）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4C保存。氯仿3mol/L醋酸鈉溶液（滅菌）3M醋酸鈉組份濃度3M醋酸鈉（pH5.2） 配制量100mL配制方法1.稱取40.8gNa0Ac3H20置于100?200mL燒杯中，加入

約40mL的去離子水攪拌溶解。加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。加入去離子水將溶液定容至100mL。高溫高壓滅菌后，室溫保存。無水乙醇，75%乙醇9.蒸餾水（滅菌）10.終濃度為20mg/mL的RNA酶（也可不加）瓊脂糖凝膠電泳所需試劑及配制方法1.瓊脂糖2.1XTAE緩沖液，50XTAE緩沖液50xTAEBuffer(pH8.5)組份濃度2MTris-醋酸，100mMEDTA配制量1L配制方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris242gNa2EDTA2H2O37.2g向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分攪拌溶解。加入57.1ml的乙酸，充分攪拌。加去離子水將溶液定容至lL后，室溫保存。6XloadingbufferDNAMarker100bpDNALadderMarker

150bpDNALadderMarker卩骼的Agarose)卩骼的Agarose)祖豁的Agarose) 1,200bp=卿h 60Dbp——