肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)課件

1、常見(jiàn)肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色的幾點(diǎn)體會(huì) 復(fù)旦大學(xué)病理學(xué)系張錦生肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)1常見(jiàn)肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色的幾點(diǎn)體會(huì) 復(fù)旦大學(xué)病理肝穿刺標(biāo)本檢查和處理原則1. 肉眼觀察 肝穿刺標(biāo)本呈完整園柱狀，長(zhǎng)度13 cm典型的慢性肝炎肝纖維化標(biāo)本呈竹節(jié)狀外觀肝硬化的穿刺標(biāo)本，呈不規(guī)則碎塊肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)2肝穿刺標(biāo)本檢查和處理原則1. 肉眼觀察 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)2.石蠟切片 每張玻片上應(yīng)放置超過(guò)6個(gè)連續(xù)組織切片，有助于肝纖維化的病理診斷。肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)32.石蠟切片 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)33. 染色 除常規(guī)染色

2、供病理診斷用之外，根據(jù)條件和需要作以下特殊染色：網(wǎng)狀纖維染色，Masson三色染色，膠原纖維染色(Sirius red或免疫組化 ) 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)43. 染色 除常規(guī)染色供病理診斷用之外，根據(jù)條件肝病的病 Dm-HSC -SMA-MFb Dm-SMA肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)5 Dm-HSCDm-SMA肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學(xué)特點(diǎn)及分期1. 慢性肝炎肝纖維化 ( Dr.Scheuer 方案）肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)6S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學(xué)特點(diǎn)及分期肝病的病活動(dòng)性纖維間隔靜止性纖維間隔

3、肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)7活動(dòng)性纖維間隔靜止性纖維間隔肝病的病理形態(tài)特脂肪性肝病肝纖維化 穿刺肝組織呈淡黃色，標(biāo)本懸浮于固定液小葉中央?yún)^(qū)纖維化竇周纖維化肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)8脂肪性肝病肝纖維化 小葉中央?yún)^(qū)纖維化3. 肝糖原累積病肝纖維 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)93. 肝糖原累積病肝纖維 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色4. Wilson病 紅氨酸(Rubeanic acid)染色,銅被染成深綠色肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)104. Wilson病 紅氨酸(Rubeanic acid)5. 血色病 穿刺肝組織因含有大量含鐵血黃素沉著呈火焰紅色肝細(xì)胞

4、普魯氏藍(lán)染色陽(yáng)性肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)115. 血色病 肝細(xì)胞普魯氏藍(lán)染色陽(yáng)性肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫6. 自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH） 門管區(qū)肝細(xì)胞呈花環(huán)狀排列Hepatic Rosette ，表現(xiàn)為數(shù)個(gè)水樣變性的肝細(xì)胞被炎癥細(xì)胞和塌陷的網(wǎng)狀支架包繞成花環(huán)狀結(jié)構(gòu)。肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)126. 自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免7. 原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC） 3期（間隔期）90%出現(xiàn)自身抗體(A-Mit)，F(xiàn)lorid duct lesion+Biliary PN， 纖維間隔形成，肝細(xì)胞羽毛狀變性4期（肝硬化） 靜止- 纖維間隔內(nèi)無(wú)炎癥

5、或輕度炎癥 活動(dòng) Fibrous PN. 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)137. 原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC） 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫8. 血吸蟲性肝纖維化 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)148. 血吸蟲性肝纖維化 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)肝癌(LIVER CANCER)HCCICCCombined hepatocellular and cholangiocarcinoma肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)15肝癌(LIVER CANCER)HCC肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免肝癌病理診斷常用免疫組化和特染Hep Par1 線粒體相關(guān)抗原，與AFP無(wú)關(guān)對(duì)胎兒和成人肝細(xì)胞高度

6、特異 (HCC:陽(yáng)性率82-97%）肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)16肝癌病理診斷常用免疫組化和特染Hep Par1肝病的病理形態(tài)AFPHCC陽(yáng)性率：15-82%肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)17AFP肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)17CD34: HCC型染色長(zhǎng)條分枝，管壁纖細(xì)，管腔狹窄，分布均勻彌漫.而非癌肝組織內(nèi)極少見(jiàn).肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)18CD34:肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)18CK 18: HCC,ICC, Metastatic carcinoma:100%+ 上皮性腫瘤標(biāo)志物肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)19CK 18:肝病的病理形

7、態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)19CK 19: 膽管型CK: CK19,CK7 肝細(xì)胞 膽管上皮，ICC：77-100% ICC最好的標(biāo)志物肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)20CK 19:肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)20CEA： monoclonal CEA:毛細(xì)膽管ICC，轉(zhuǎn)移性肝癌：60-75%+ HCC:0-11%+ polyclonal CEA: 毛細(xì)膽管HCC特異標(biāo)志物之一肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)21CEA：肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)21CK 20: 胃腸道腺癌的主要標(biāo)志物轉(zhuǎn)移性腺癌：74-100%+ ICC:10%+ HCC:0%+肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免

8、疫組化染色體會(huì)22CK 20:肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)22MOC31: 抗人上皮相關(guān)抗原轉(zhuǎn)移性腺癌：100%+ ICC: 92.9%+ HCC: 0% + 胃癌肝轉(zhuǎn)移肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)23MOC31: 抗人上皮相關(guān)抗原肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染HBsAg: HCC: 70-80% +胞質(zhì)型，胞核型陽(yáng)性胞質(zhì)型，核周型陽(yáng)性肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)24HBsAg:胞質(zhì)型，胞核型陽(yáng)性胞質(zhì)型，核周型陽(yáng)性肝病的病理形黏液染色：AB/PAS 酸性黏多糖：蘭色（膽管腺瘤,ICC腔內(nèi)黏液）中性黏多糖,糖原：紅色（假腺管型HCC)肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)2

9、5黏液染色：AB/PAS肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)2免疫組織化學(xué)染色的幾點(diǎn)體會(huì)一、組織和細(xì)胞標(biāo)本制備目的：(1)最大限度地保存組織結(jié)構(gòu)。(2)最大限度地保存抗原性。注意事項(xiàng)：在選擇組織處理方法前，先根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，參考抗體說(shuō)明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)26免疫組織化學(xué)染色的幾點(diǎn)體會(huì)一、組織和細(xì)胞標(biāo)本制備肝病的病理形1.取材（1）原則：盡可能新鮮，動(dòng)物標(biāo)本可選 用動(dòng)脈灌注固定。（2）取材部位：盡量包括病灶和正常組 織交界處，避免選擇壞死組織。（3）避免擠壓：受擠壓組織不但影響 HE切片的觀察，還造成非特異性 免疫組化組織著色。肝病的病理形態(tài)特

10、點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)271.取材（1）原則：盡可能新鮮，動(dòng)物標(biāo)本可選肝病的病理形態(tài)特2.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時(shí)組織越新鮮越好。組織塊厚薄大小要合適。容器要大,固定液要寬余.固定時(shí)間既要考慮充分固定,又不能太長(zhǎng)(依組織塊厚薄大小從24hr至35天,太長(zhǎng)可溶性抗原會(huì)滲漏,陽(yáng)性會(huì)減弱甚至轉(zhuǎn)陰.選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)282.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時(shí)組織越新3.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,如無(wú)低溫石蠟,可將組織塊盡可能修薄,以縮短脫水、透明、包埋時(shí)間,盡可能保存

11、組織內(nèi)抗原穩(wěn)定。肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)293.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,4.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適合于冷凍包埋、切片。 防止冰結(jié)晶!預(yù)處理:目的是減少組織中的水分以減少冰結(jié)晶的產(chǎn)生,方法是將已固定、沖洗的組織塊放入2030%蔗糖緩沖液內(nèi),4冰箱過(guò)夜,再將組織塊埋于OCT包埋劑速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過(guò)冰點(diǎn),防止冰結(jié)晶產(chǎn)生。肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)304.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍結(jié)后,立即移入低溫冰箱(裝入封

12、口塑料袋內(nèi)密封)或放入恒冷切片機(jī)恒冷箱內(nèi)以備切片;干冰-丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內(nèi),逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達(dá)-70;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰-丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內(nèi)速凍半分至一分鐘。肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)31速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細(xì)胞核。但如果陽(yáng)性信號(hào)在細(xì)胞核,切勿襯染細(xì)胞核!細(xì)胞質(zhì)襯染:1%亮綠,但退色較快,可改用堅(jiān)固綠(FAST BLUE)染,則保存時(shí)間較長(zhǎng)肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)32免疫組化染色后的

13、襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細(xì)胞核。但如果陽(yáng)性封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹(shù)膠封固，但如用DAB以外的底物應(yīng)注意有色沉淀物如為脂溶性，應(yīng)改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。酶免疫染色切片可保存數(shù)周甚至數(shù)月。免疫熒光染色后應(yīng)盡快觀察、拍照。肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)33封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹(shù)膠封固，但如用DAB以一.常用免疫組織化學(xué)方法免疫熒光: 用于培養(yǎng)細(xì)胞效果較好, 石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強(qiáng),用時(shí)要注意 FITC(異硫氰酸熒光素) 用450490 nm光激發(fā),515nm 濾片觀察, 呈翠綠色 RB200(四乙基羅達(dá)明B200) 用570nm光激發(fā)

14、, 596 600nm濾片觀察,呈橘紅色 TRITC(四甲基異硫氰酸羅達(dá)明) 用530 560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色 Texas red 用595nm光激發(fā), 615nm濾片觀察,呈紅色 直接免疫熒光法: 間接免疫熒光法 雙重?zé)晒馊旧尾〉牟±硇螒B(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)34一.常用免疫組織化學(xué)方法肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)2.免疫組織化學(xué)常用方法: PAP ABC或LSAB ELPS(二步法)肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)352.免疫組織化學(xué)常用方法:肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體20世紀(jì)70年（1970）Sternberg Peroxidase-anti-

15、Peroxidase (PAP)肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)36肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)3620世紀(jì)80年代（1981） 許世民 ABC（親和免疫組化） Avidin-Biotin-Peroxidase Complex肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)3720世紀(jì)80年代（1981） 許世民 ABC（親和免疫組90年代中期：Enhanced Polymer One Step (EPOS) EnVision (Enhanced Labelled Polymer System, ELPS)簡(jiǎn)稱二步法 1 mol 含 70 mol HRP + 10 mol AB肝病的病理形態(tài)特

16、點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)3890年代中期：Enhanced Polymer One St如何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?陽(yáng)性信號(hào)突出無(wú)背景染色切片平整無(wú)破裂/碎,無(wú)污穢肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)39如何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?肝病的病做好免疫組化染色幾點(diǎn)體會(huì)1.組織細(xì)胞處理: 固定劑 固定時(shí)間 速凍防冰結(jié)晶 白片質(zhì)量好:平整,無(wú)破裂/碎,無(wú)污穢 防脫片 : 玻片絕對(duì)干凈 涂粘合劑: 白膠 多聚賴氨酸 鉻明礬明膠液 甲醛明膠液 貼片后冷風(fēng)吹干或37 /60烘干 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)40做好免疫組化染色幾點(diǎn)體會(huì)1.組織細(xì)胞處理:肝病

17、的病理形態(tài)特點(diǎn)2.抗體:特異性,高效價(jià),親合力,適度稀釋度3.石蠟切片- 抗原修復(fù) (1)蛋白酶消化: 胰蛋白酶 胰糜蛋白酶 鏈霉蛋白酶 蛋白酶K 胃蛋白酶 消化不足- 修復(fù)失敗,假陰性或信號(hào)弱 消化過(guò)度- 結(jié)構(gòu)破環(huán),脫片 (2)熱修復(fù): 微波照射 高壓加熱 水浴加熱 (3)微波+蛋白酶消化 注意點(diǎn): 固定時(shí)間長(zhǎng),消化時(shí)間或熱修復(fù)時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng) 酶生產(chǎn)廠家不一,或批號(hào)不一,消化時(shí)間可能也不一 熱修復(fù)的介質(zhì)要選合適,必須要加鈣螯合劑 預(yù)實(shí)驗(yàn)摸最佳方案 肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)412.抗體:特異性,高效價(jià),親合力,適度稀釋度肝病的病理形態(tài)特陽(yáng)性結(jié)果的判斷“邊界效應(yīng)”引起假陽(yáng)性均勻一致的著色,假陽(yáng)性可能極大根據(jù)陽(yáng)性信號(hào)的分布:核抗原應(yīng)