2.2《土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計數(shù)》學(xué)案況家茂

.課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計數(shù)考點要求1．研究培育基對微生物的選擇作用，進(jìn)行微生物數(shù)目的測定。2．能利用選擇培育基分別細(xì)菌，運用有關(guān)技術(shù)解決生產(chǎn)生活中有關(guān)微生物的計數(shù)。雙基過關(guān)一、理論基礎(chǔ)1．挑選菌株(1)實驗室中微生物挑選的原理：人為供給有益于生長的條件(包含營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時或其余微生物生長。(2)選擇培育基：在微生物學(xué)中，將同意種類的微生物生長，同時和其余種類微生物生長的培育基，稱作選擇培育基。（3）配制選擇培育基的依照依據(jù)選擇培育的菌種的生理代謝特色加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。比如，培育基中不加入有機(jī)物能夠選擇培育微生物；培育基中不加入氮元素，能夠選擇培養(yǎng)；的微生物.加入高濃度的食鹽可選擇培育金黃色葡萄球菌等。2．統(tǒng)計菌落數(shù)目（1）測定微生物數(shù)目的常用方法有和。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的足夠高時，培育基表面生長的一個菌落，根源于樣品稀釋液中的一個。經(jīng)過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推斷出樣品中大概含有多少活菌。為了保證結(jié)果正確，一般選擇菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計數(shù)。別的，測定微生物數(shù)目的常用方法還有直接計數(shù)。3．設(shè)置比較設(shè)置比較的主要目的是清除實驗組中對實驗結(jié)果的影響，提升實驗結(jié)果的。比如為了清除培育基能否被雜菌污染了，需以培育的培養(yǎng)基作為空白比較。二、實驗設(shè)計對于土壤中某樣品細(xì)菌的分別與計數(shù)實驗操作步驟以下：1．取樣：從肥饒、潤濕的土壤中取樣。應(yīng)先3cm左右，再取樣，將樣品裝入預(yù)先準(zhǔn)備好的中。2．制備：準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培育基和選擇培育基將菌液稀釋同樣的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培育基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)顯然選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，所以，牛肉膏蛋白胨培育基能夠作為，用來判斷選擇培育基能否起到了選擇作用。3．微生物的與察看將10g土樣加入盛有90mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(體積為250mL)，充分搖勻，汲取上清液，轉(zhuǎn)移至盛有的生理鹽水的無菌大試管中，將土樣以1、101、102挨次等比稀釋至107稀釋度，并依照由107～103稀釋度的次序分別汲取進(jìn)行平板涂布操作。每個稀釋度下需要3個選擇培育基、1個牛肉膏蛋白胨培育基。將涂布好的培育皿放在30℃-1-頁.溫度下培育，實時察看和記錄。精選選擇培育基中不一樣形態(tài)的菌落接入含培育基的斜面中，察看可否產(chǎn)生如教材中圖2-lO的顏色反響。4．細(xì)菌的計數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)準(zhǔn)時，選用菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計數(shù)。在同一稀釋度下，起碼對3個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，而后求出，并依據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。三：思慮與議論1）怎樣從平板上的菌落數(shù)推斷出每克樣品中的菌落數(shù)？2）為何分別不一樣的微生物要采納不一樣的稀釋度？測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)目，采納的稀釋范圍同樣嗎？四：典例剖析種類一選擇培育基的配制【例1】剖析下邊培育基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、尿素、瓊脂。請回答：(1)在該培育基的配方中，為微生物的生長供給碳源和氮源的分別和。(2)想想這類培育基對微生物能否擁有選擇作用?假如擁有，又是怎樣進(jìn)行選擇的?種類二統(tǒng)計菌落數(shù)目106的培育基【例2】用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為中獲取以下幾種統(tǒng)計結(jié)果，正確的選項是( )A．涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是215和260，取均勻值238C．涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、212和2墨6，取均勻值163D．涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是2l0、240和250，取均勻值233種類三設(shè)置比較()【例3】用來判斷選擇培育基能否起到了選擇作用需要設(shè)置的比較是．未接種的選擇培育基．未接種的牛肉膏蛋白胨(全營養(yǎng))培育基C．接種了的牛肉膏蛋白胨(全營養(yǎng))培育基D．接種了的選擇培育基基礎(chǔ)自測一、選擇題1．PCR技術(shù)要求使用耐高溫的DNA聚合酶，這類酶要能忍耐93℃左右的高溫。假如請你來找尋這類耐高溫的酶，你會去哪里找尋( )A．土壤中B．海水中C．熱泉中D．冷庫中2．以下能選擇出分解尿素的細(xì)菌的培育基是( )．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、瓊脂、水．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、瓊脂、水C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、瓊脂、水．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水；-2-頁.3.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培育基中測得平板上菌落數(shù)的均勻值為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL)()A．2.34×108B．2.34×109C．234D．23.44.在做分別分解尿素的細(xì)菌實驗時，A同學(xué)從對應(yīng)106培育基上挑選出大概150個菌落，而其余同學(xué)只選擇出大概50個菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原由()①因為土樣不一樣②因為培育基污染③因為操作失誤④沒有設(shè)置比較A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④5.對于土壤取樣的表達(dá)錯誤的選項是()．土壤取樣，應(yīng)選用肥饒、潤濕的土壤．先鏟去表層土3cm左右，再取樣C．取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌．應(yīng)在火焰旁稱取土壤6.以下對于從土壤中分別細(xì)菌的操作步驟中，正確的選項是( )①土壤取樣②稱取10g土壤拿出加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中③汲取0.1mL進(jìn)行平板涂布④挨次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③7.以下對于測定土壤中細(xì)菌數(shù)目的表達(dá)，正確的選項是( )A．一般采納103～107倍的稀液分別涂布B．測定放線菌的數(shù)目，一般采納103、lO4和105倍稀釋C．測定真菌的數(shù)目，一般采納103、104和105倍稀釋D．當(dāng)?shù)谝淮握闪磕撤N細(xì)菌的數(shù)目，能夠?qū)?01～107倍的稀釋液分別涂布到平板上培育8.以下對于微生物的培育表達(dá)錯誤的選項是()A．細(xì)菌一般在30～37℃的溫度下培育1～2dB．放線菌一般在25～28℃的溫度下培育5～7dC．霉菌一般在25～28℃的溫度下培育3～4dD．不一樣種類的微生物，一般需要同樣的培育溫度和培育時間9.以下操作需要在火焰旁進(jìn)行的一組是( )①土壤取樣②稱取土壤③稀釋土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培育A．①②③④⑤B．②③④⑤④⑤C．③④⑤D．②③④10.以下能夠判定出分解尿素的細(xì)菌的方法是( )．以尿素為獨一氮源的培育基中加人酚紅指示劑．以尿素為獨一氮源的培育基中加入二苯胺試劑C．以尿素為獨一氮源的培育基中加入蘇丹Ⅲ試劑．以尿素為獨一氮源的培育基中加入雙縮脲試劑11.土壤取樣時最好選擇哪一種環(huán)境中的土壤做分別細(xì)菌的實驗( )A．街道旁B．花盆中-3-頁.C．農(nóng)田中D．菜園里二、非選擇題12.統(tǒng)計菌落數(shù)目一般用稀釋涂布平板法，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培育基表面生長的一個，根源于樣品稀釋液中的一個。計數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在的平板計數(shù)。13.在做本課題實驗時，一位同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培育基中涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212和256，該同學(xué)以這3個平板上菌落數(shù)的均勻值163作為統(tǒng)計結(jié)果。你以為這一結(jié)果能否靠近真切值?假如需要改良，怎樣改良?14.在進(jìn)行操作本課題實驗時應(yīng)特別注意：、、。15．在做本課題實驗時，甲同學(xué)挑選出的菌落與其余同學(xué)不一樣，而且他在設(shè)計實驗時并沒有設(shè)置比較。思慮以下問題：(1)你以為出現(xiàn)甲同學(xué)這類結(jié)果的原由可能是什么?(2)要幫助甲同學(xué)清除可能影響實驗結(jié)果的要素，需要設(shè)置，實驗方案有兩種：一種方案是能夠由其余同學(xué)用與甲同學(xué)進(jìn)行實驗，假如結(jié)果與甲同學(xué)一致，則證明甲同學(xué)，假如結(jié)果不一樣，則證明甲同學(xué)存在操作或的配制有問題。另一種方案是將甲同學(xué)配制的培育基在不加的狀況下進(jìn)行培育，作為空白比較，以證明培育基能否遇到。(3)由此問題你得出的啟迪是什么?16．在105稀釋度下求出3個平板上菌落數(shù)的均勻值是63，那么每克樣品中的菌落數(shù)是多少?參照答案：一、1（1）目的菌珠克制阻擋（2）特定克制阻擋(3)自養(yǎng)能固氮的微生物；2(1)有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)。(2).稀釋度細(xì)菌30-300顯微鏡3.非測試要素可信度無雜菌污染二、1.土壤，鏟去表層土。2.培育基多于比較3.培育1ml9ml0.1mL4.30-300平均數(shù)三：思慮與議論1統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的均勻值，而后按課本旁欄的公式進(jìn)行計算2這是因為土壤中各種微生物的數(shù)目（單位：株/kg）是不一樣的，比如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。因此，為獲取不一樣種類的微生物，就需要按不一樣的稀釋度進(jìn)行分別，同時還應(yīng)該有針對性地提供選擇培育的條件。四：典例剖析種類一選擇培育基的配制分析：碳源是供給碳元素的物質(zhì)，氮源是供給氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。絕大部分生物都能利用葡萄糖，可是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這類培育基對微生物有選擇作用。選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。答案：(1)葡萄糖尿素(2)有選擇作用。因為此配方中尿素是獨一氮源，所以，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。-4-頁.啟迪：選擇培育基挑選微生物的原理：人為供給有益于目的茵株生長的條件(包含營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時克制或阻擋其余微生物生長。2分析：在設(shè)計實驗時，必定要涂布起碼3個平板．作為重復(fù)組，才能加強(qiáng)實驗的說服力與正確性，所以A、B不正確。C項雖涂布了3個平板，可是，此中1個平板的計數(shù)結(jié)果與另兩個相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，所以，不可以簡單地將3個平板的計數(shù)值用來求均勻值。答案：D啟迪：在設(shè)計實驗時，必定要涂布起碼3個平板作為重復(fù)組；在剖析實驗結(jié)果時，必定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果能否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需從頭實驗。分析：將菌液稀釋同樣的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培育基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)顯然多于選擇培育基上的數(shù)目，所以，牛肉膏蛋白胨培育基作為比較。比較依照的原則是單調(diào)變量，所以與選擇培育基同樣接種、培育。答案：C啟迪：比較實驗是指除了被測試的條件之外，其余條件都同樣的實驗，其作用是