C反應蛋白定量檢測試劑盒產品注冊技術審查指導原則學習資料

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。C反應蛋白定量檢測試劑盒產品注冊技術審查指導原則-附件6C反應蛋白定量檢測試劑盒產品注冊技術審查指導原則本指導原則旨在指導注冊申請人對C反應蛋白定量檢測試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。本指導原則是對C反應蛋白定量檢測試劑盒的一般要求，申請人應依據(jù)產品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事

2、項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。一、范圍C反應蛋白定量檢測試劑盒是指利用免疫比濁法、化學發(fā)光法、時間分辨法、免疫熒光法等基于抗原抗體反應原理的免疫學方法對人全血、血清、血漿或其他體液中的C反應蛋白進行體外定量測定的試劑。二、注冊申報資料要求（一）綜述資料C-反應蛋白（C-reactiveprotein，CRP）由肝細胞合成，在

3、胎兒期產生，非母體胎盤傳遞。其產生機理是：當機體受感染或組織受損傷時巨噬細胞和其他白細胞等被激活，產生白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子TNF-a等細胞因子及其他介導物，這些細胞因子和介導物到達肝臟，刺激肝細胞和上皮細胞合成CRP。在結構上，CRP含5個多肽鏈亞單位，非共價地結合為盤形多聚體，分子量為11.5萬14萬，CRP是一種典型的急性時相蛋白。常規(guī)CRP測定包括定性、半定量和定量分析，可用于評價感染，組織損傷和炎癥性疾病。對于常規(guī)的CRP測定，參考值通常被認為是臨床上含量高于10毫克/升。在健康人群血液中CRP水平低于5毫克/升，而在各種條件下，急性炎癥

4、48小時內，CRP值達到約20至500毫克/升。常規(guī)CRP作為急性炎癥評估指標比紅細胞沉降率（ESR）和白細胞計數(shù)更敏感、更可靠。超敏C反應蛋白線性范圍低端低于常規(guī)CRP，這種較低的范圍可擴大使用適應癥，C反應蛋白是非特異性的，必須結合臨床癥狀綜合評估，不能作為特定的疾病或疾病的風險的確診依據(jù)。圖1超敏CRP與常規(guī)CRP的區(qū)別超敏C反應蛋白常見的用途可作為心血管疾病風險識別的輔助手段。配合傳統(tǒng)的急性冠脈綜合征臨床診斷使用，可作為冠狀動脈疾病或急性冠脈綜合征復發(fā)的預警指示物。圖2超敏CRP的臨床意義表1各種CRP的區(qū)別及性能要求常規(guī)CRP超敏CRP用途感染，組織損傷和炎癥性疾病的評價。提供炎癥性

5、疾病的診斷，治療和監(jiān)控的信息是區(qū)分低水平炎癥狀態(tài)的靈敏指標,血清hs-CRP水平與HYPERLINK/view/292047.htmt_blank動脈粥樣硬化及急性腦梗死(ACI)等心腦血管疾病的發(fā)生、嚴重程度及預后密切相關參考值范圍參考值范圍:約10mg/L健康人群：5mg/L急性范圍:20-500mg/L參考值范圍:1mg/L推薦線性范圍5mg/L到上限1.0mg/L到10.0mg/L靈敏度明確在線性范圍低端的性能確定定量限（功能靈敏度）綜述資料主要包括產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的說明、研究結果的總結評價以及同類產品上市情況介紹等內容，其中同類產品上市情況介紹部分應著重從方法學

6、、臨床應用情況、性能指標等方面寫明擬申報產品與目前市場上已獲批準的同類產品之間的異同。應符合體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）（以下簡稱辦法）和體外診斷試劑注冊申報資料基本要求（國食藥監(jiān)械2007609號）的相關要求。（二）產品說明書說明書承載了產品預期用途、標本采集及處理、實驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產品說明書的格式應符合體外診斷試劑說明書編寫指導原則的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且

7、符合中文表達習慣。產品說明書的所有內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內容進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。結合體外診斷試劑說明書編寫指導原則的要求，下面對C反應蛋白定量檢測試劑盒說明書的重點內容進行詳細說明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。1.【預期用途】C反應蛋白定量檢測試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、全血和/或其他體液中的C反應蛋白濃度，適用的樣本類型應結合實際的臨床研究情況進行確認。注1：CRP值是非特異性的，不能作為特定的疾病或疾病的風險的檢測指標，不建議把CRP的具體臨床診斷意義列入預期用途。注2：C

8、反應蛋白包括常規(guī)C反應蛋白（CRP）、超敏CRP（hsCRP），具體根據(jù)臨床試驗核定。2.【主要組成成份】（1）說明試劑包含主要組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。（2）試劑中不包含但對該項檢測必須的組分，申請人應列出相關試劑/耗材的名稱、貨號及其他相關信息。（3）試劑盒中不包含質控品、校準品或其他耗材，應說明經驗證后推薦配合使用的商品化質控品、校準品或其他耗材的制造商、產品名稱以及產品貨號等詳細信息；如包含校準品和/或質控品，應說明其主要組成成分及其生物學來源，校準品應注明其定值及溯源性，質控品應有合適的檢測范圍。3.【儲存條件及有效期】試劑的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性等信息作詳細介

9、紹。并對開封后未使用產品允許暴露于空氣中的溫度、濕度及效期等條件予以明確。4.【樣本要求】重點明確以下內容：（1）樣本采集：采集時間點是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，具體采集部位及類型，詳述具體的操作方法或列出相關操作指南文件以指導使用者（最好能夠給出具體圖示），盡量減少由于樣本采集或處理不當對實驗造成的影響。（2）樣本處理及保存：樣本的保存條件及期限（短期、長期）、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復室溫，凍融次數(shù)限制。（3）樣本的最大可稀釋倍數(shù)。5.【適用機型】所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關的重要信息以指導用戶操作。6.【檢驗方法】詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：（1）

10、實驗條件：實驗環(huán)境的溫度、濕度等注意事項，檢驗試劑及樣本復溫等要求。（2）試劑使用方法（手工/半自動/全自動）、注意事項。（3）詳述待測樣品的預處理方法、步驟及注意事項。（4）明確樣本檢測加樣量及觀察時間。7.【參考值（參考范圍）】應注明常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考值（范圍）”。8.【檢驗結果的解釋】結合質控品對所有可能出現(xiàn)的結果進行合理的解釋。本試劑的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。如存

11、在檢測灰區(qū)，應對灰區(qū)結果的處理方式一并詳述。明確有可能存在的數(shù)值升高因素及數(shù)值降低因素，明確說明對何種條件下需要進行重復檢測，以及在重復檢測時對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等進行詳述。9.【檢驗方法局限性】（1）干擾物質及HOOK效應對檢測結果的影響。（2）操作時必須嚴格按照操作規(guī)程，精心操作才能得到正確結果，對操作程序作任何修改都可能影響結果。（3）有關假陰性結果的可能性分析。某些未知成分屏蔽了抗原決定簇使之無法與抗體結合；C反應蛋白抗原隨著樣本放置時間的延長和外界溫度上升逐漸降解無法被抗體識別；不合理的樣本采集、轉運及處理、樣本中被測物質濃度過低等均有可能導致假陰性結果。10.【產品性能指標

12、】詳述以下性能指標：注1：由于C反應蛋白目前尚無國家參考品，故選用國際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內部參考品，以后國家參考品若建立，采用國家參考品。注2：對線性范圍、分析靈敏度等的最低要求見表1。（1）準確度：a)檢測線性范圍內幾個濃度點的C反應蛋白參考物質（國際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內部參考品），檢測濃度3mg/L時，結果誤差在20%內；檢測濃度3mg/L時，結果誤差應在15%（建議相對偏差）內。注1：最低不得低于國家衛(wèi)生計生部門質控允許范圍。注2：推薦檢測范圍內高、中、低濃度樣本各選一個樣本測試，其中低值樣本推薦hsCRP1mg/L左右，CRP10mg/L左右。b)回收：將已知濃度的C反應蛋白加

13、入到血液基質或其他體液成份中，其回收率在（85%115%）范圍內。c）比對：用已上市試劑盒或參考方法進行比對試驗，結果應滿足相應要求。（2）線性范圍：確立線性范圍至少應取5點（包括下限、中限及上限），每次應重復測定三次，計算出直線方程y=a+bx，相關系數(shù)r值0.990。（3）分析靈敏度或檢測限（空白限）：a）分析靈敏度：說明試劑的分析靈敏度或不高于某濃度水平，簡單介紹確定方法，對功能靈敏度如何研究可一并注明。b）檢出限：用零濃度校準品或樣本稀釋液作為樣本進行檢測，重復測定20次，得出20次測量結果，計算其平均值（M）和標準差（SD），得出M+2SD，根據(jù)零濃度校準品和相鄰校準品之間的濃度結果

14、進行兩點回歸擬合得出一次方程，將M+2SD的結果代入上述方程中，求出對應的濃度值，即為最低檢出限。（4）重復性：同一批次的檢測試劑對檢測范圍內某個濃度的C反應蛋白樣本進行重復檢測10次，計算10次測量結果的平均值（M）和標準差（SD），根據(jù)公式CV=SD/M100%得出變異系數(shù)，變異系數(shù)CV（%）15%。注：推薦檢測范圍內高、中、低濃度樣本各選一個樣本測試，其中低值樣本推薦hsCRP1mg/L左右，CRP10mg/L左右。（5）批間差：三個批次的檢測試劑對檢測范圍內某個濃度的C反應蛋白樣本各重復檢測10次，計算30次測量結果的平均值（M）和標準差（SD），根據(jù)公式CV=SD/M100%得出變異

15、系數(shù)，變異系數(shù)CV（%）值應20%。注：推薦檢測范圍內高、中、低濃度樣本各選一個樣本測試，其中低值樣本推薦hsCRP1mg/L左右，CRP10mg/L左右。（6）校準品溯源性申請人應根據(jù)GB/T21415-2008提供所用校準品的來源、賦值過程和相應指標、以及不確定度等內容。（7）質控品性能要求（如有）a)定值質控品測量準確度應至少給出一種用校準品校準測量程序后測定該定值質控品的試驗方法。b)均一性通常取同批號的一定數(shù)量最小包裝單元的校準品、質控品，每包裝單元測試1次，按下面的公式計算測試結果的平均值（）和標準差S1；另用上述校準品、質控品中的1個最小包裝單元連續(xù)測試相同次數(shù)，計算測試結果的平

16、均值（）和標準差S2；按下列各公式計算瓶間重復性CV%，所有參數(shù)的瓶間重復性結果均應符合要求。最小裝量不夠完成瓶間差檢測的可只進行批內精密度檢測。公式1公式2公式3公式4EQ當S1S2時，令CV瓶間=0式中：-平均值；S-標準差；n-測量次數(shù)；xi-指定參數(shù)第i次測量值。（八）生物安全性（如適用）校準品、質控品如含人源性成分，用經過國家批檢合格的以下三種體外診斷試劑盒對該試劑盒的校準品、質控分別進行檢測：a)人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒；b)丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒；c)乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒，HIV抗體、HCV抗體和HBsAg應為陰性。11.【注意事項】應至少包括以下內容：（1）

17、有關人源組分（如有）的警告，如：試劑內質控品或其他可能含有人源物質的組分，雖已經通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。（2）建議實驗室的環(huán)境要求，如溫度、濕度、電磁環(huán)境等。（3）對采集樣本的要求，建議使用新鮮血液，不建議使用高脂乳糜樣、黃疸、高類風濕因子樣本，勿使用溶血樣本，明確樣本的處理辦法。（4）對所有樣本和反應廢棄物都視為傳染源進行處理。（5）其他有關C反應蛋白定量檢測試劑盒的注意事項。（三）擬定產品標準及編制說明擬定產品標準應符合體外診斷試劑注冊管理辦法和體外診斷試劑注冊申報資

18、料基本要求的相關規(guī)定。另外，對于國產試劑，應參考中國生物制品規(guī)程（2000年版），將擬申報產品的主要原材料、生產工藝及半成品檢定、校準品制備溯源過程、質控品的制備賦值過程等內容作為附錄附于標準正文后，并在正文的“產品分類”項中引出該附錄內容。作為定量檢測試劑盒，C反應蛋白產品的注冊檢測應主要包括以下性能指標：外觀檢查、物理檢查、準確度、線性范圍、分析靈敏度/檢出限（空白限）、精密度（批間、重復性）、校準品溯源性、質控品測量準確度及均一性、生物安全性（如適用）等。如果擬申報試劑已有相應的專用國家/行業(yè)標準或相應方法學的通用標準要求發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。（四）注冊檢驗根據(jù)體外

19、診斷試劑注冊管理辦法（試行）要求，首次申請注冊的第二類產品應該在國家食品藥品監(jiān)督管理局認可的、具有相應承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構進行注冊檢測。由于C反應蛋白目前尚無國家標準品，申請人應建立自己的參考品體系并提供相應的內部參考品。（五）主要原材料研究資料1試劑盒所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細試驗資料。如抗體為申請人自制，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，申請人對該抗體技術指標的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)；如抗體為申請人外購，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術指標的要求以及申

20、請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。2其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如包被板、反應緩沖液等，申請人應詳述每一原輔料技術指標的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購，應詳述每一原輔料的外購方名稱并提交外購方出具的每一原輔料性能指標及檢驗證書。3企業(yè)內部參考品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。（六）主要生產工藝及反應體系的研究資料1.主要生產工藝介紹，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產工藝的確定依據(jù)。2.產品反應原理介紹。3.抗體包被/致敏工藝研究：申請人應考慮如包被液量、濃度、時間、溫度等指標對產品性能的影響，通過試驗確定上述指標的最佳組合。4.實驗體系反應條件確定：申請人

21、因考慮反應時間、反應溫度、pH值等條件對產品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。5.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請人應考慮樣品加樣方式、加樣量對產品檢測結果的影響，通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應對可用于樣本稀釋的物質或處理方法進行研究，通過試驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的物質或處理方法。確定反應所需其他物質用量（標準品、酶標物、底物等）的研究資料。固相載體、顯色(發(fā)光)系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。6.不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。（七）分析性能評估資料企業(yè)應提交原廠在產品研制階段對試劑盒進行的

22、所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、實驗數(shù)據(jù)、質控標準、統(tǒng)計分析等詳細資料。對于C反應蛋白定量檢測試劑盒建議至少選擇3批產品對以下分析性能進行研究：分析靈敏度、準確度、特異性、線性范圍、精密度（批間、批內）等指標，具體研究方法建議參考相關指導原則。對于適用多個機型的產品，應提供如產品說明書【適用機型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。1.準確度（1）與企業(yè)內部參考品的比對研究使用已溯源的企業(yè)內部定值參考品進行驗證，重點觀察檢測結果的偏差情況。（2）回收試驗用于評估定量檢測方法準確測定加入純分析物的能力，結果用回收率表示。通常對樣本進行23次回收試驗，取平均值即平均回收率。回收試驗注意

23、事項：=1*GB3加入的標準液體積一般應小于樣本體積的10%；=2*GB3盡量使加入標準液后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學決定水平；=3*GB3標準物濃度應該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；=4*GB3注意基質效應，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質。（3）方法學比對采用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產生差異結果。在實施方法學比對前，應分別對擬申報試

24、劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統(tǒng)計學分析。注：C反應蛋白目前尚無國家參考品，以后國家參考品若建立，優(yōu)先采用（1）方法；本產品不建議采用方法(2)衡量準確度。2.分析靈敏度分析靈敏度的確定常使用同批號試劑對零濃度校準品（或樣品稀釋液）進行至少20次重復檢測，以空白均值加兩倍標準差報告方法的檢測限（X+2SD）。3.線性范圍建立試劑線性范圍所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響

25、。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預期測定范圍內選擇711個濃度水平。例如，將預期測定范圍加寬至130%，在此范圍內選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。4.精密度測量精密度的評估應至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度包括醫(yī)學決策點附近的數(shù)據(jù)、報告范圍上下限附近的濃度值，通常選用該檢測指標的正常參考值（范圍）附近和異常高值樣本。兩個濃度都選用高值樣品，可能致CV偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能致CV偏大。對hsCRP，其中一個水平應處于美國心臟協(xié)會/美國疾病預防控制中心（AHA/CDC）給出的低風險類的臨床節(jié)值（1.0m

26、g/L），其CV應10%；中間水平應處于檢測范圍的中點；第三個水平應處于檢測上限的附近。5.分析特異性(1)交叉反應：易產生交叉反應的其他抗原、抗體等的驗證情況；(2)干擾物質：樣本中常見干擾物質對檢測結果的影響，如高脂、黃疸、類風濕因子等干擾因子的研究（結果應量化表示，禁用輕度、嚴重的模糊表述）；(3)藥物影響：常見相關治療藥物對檢測結果的影響。6.鉤狀（Hook）效應（如有）：說明不會產生Hook效應的濃度上限或相關研究，如需稀釋，應注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。（八）參考值（參考范圍）確定資料參考值（范圍）確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料。建議參考CLSI/NCC

27、LSC28-A2。（九）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。（十）臨床試驗資料1.研究方法選擇境內已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品作為參比試劑

28、，采用擬申報產品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產品等效或優(yōu)于已上市產品。建議企業(yè)盡量選擇方法學相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。2.臨床研究單位的選擇（1）第二類產品申請人應當選定不少于2家（含2家）省級衛(wèi)生醫(yī)療機構開展臨床試驗。（2）臨床研究單位應有能力提供臨床評價所需的各類樣本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。（3）不同的臨床單位應使用同一批考核試劑進行臨床試驗，以便

29、對數(shù)據(jù)進行科學客觀的統(tǒng)計分析。3.臨床試驗方案臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設置應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法及樣本隨機分配以保證試驗結果的客觀性。對于新試劑的

30、動態(tài)監(jiān)測研究，應在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標準。臨床試驗中所涉及的樣本類型應與產品說明書一致，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應符合基本的統(tǒng)計學要求。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。4.臨床病例選擇(1)臨床試驗樣本量的確定：申請人或臨床研究者應根據(jù)產品臨床使用目的，與該改產品相關疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導原則有關最低樣本要求的前提下，還應符合統(tǒng)計學要求。臨床研究的總樣本數(shù)至少為200例。應考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應符合統(tǒng)計學及相關指導原則的要求。樣本濃度應覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。盡可能使30%樣本的測定值處于

31、參考區(qū)間以外，但在測量范圍內。另外，建議在臨床試驗中選擇部分含干擾物質的標本進行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風濕因子陽性樣本，易共存的其他急性炎癥時相因子同時升高的患者標本，以從臨床角度驗證試劑的特異性。5.統(tǒng)計學分析對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關分析、線性回歸、受試者工作特征（ROC）曲線分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證

32、明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。6.結果差異樣本的驗證在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結果有明顯差異的樣本，應采用臨床上普遍認為質量較好的第三種同類試劑進行驗證試驗，同時結合患者的臨床病情對差異原因及可能結果進行分析。7.臨床試驗總結報告撰寫根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術指導原則的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內容進行詳述。（1）臨床試驗總體設

33、計及方案描述=1*GB3臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；=2*GB3病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例數(shù)及標準；=3*GB3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；=4*GB3統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結果的標準。（2）具體的臨床試驗情況=1*GB3考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；=2*GB3對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；=3*GB3質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估；=4*GB

34、3具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結果不一致樣本的校驗等。（3）統(tǒng)計學分析=1*GB3數(shù)據(jù)預處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。定量值相關性和一致性分析用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結果應無明顯統(tǒng)計學差異。（4）討論和結論對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結

35、論。三、名詞解釋1.分析特異性（AnalyticalSpecificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學相關濃度值水平的分析干擾程度。注：潛在干擾物包括干擾物和交叉反應物。2.精密度（Precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標準差（SD）和變異系數(shù)（CV）。四、參考文獻1.體外診斷試劑注冊管理辦法（試行），（國食藥監(jiān)械2007229號）。2.體外診斷試劑臨床研究技術指導原則，（國食藥監(jiān)械2007240號）。3.體