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文檔簡介
1、細胞培養(yǎng)實驗寫報告內(nèi)容 1目的2 原理3材料與方法(操作步驟)4實驗結(jié)果5結(jié)論或結(jié)果分析 實驗一 雞胚原代成纖維細胞的制備與培養(yǎng) 實驗二 濾泡性口炎病毒(VSV)的增殖(純培養(yǎng))實驗三 Hep-2細胞的傳代培養(yǎng)實驗四 VSV TCID50滴定實驗五 干擾素活性(效價)的測定 實驗六 VSV中和試驗(稀釋血清固定病毒法)實驗二 雞胚原代成纖維細胞的制備與培養(yǎng)一、目的1、掌握雞胚原代成纖維細胞的制備及培養(yǎng)的基本步驟;2、掌握活細胞的顯微鏡下觀察;3熟悉病毒在細胞內(nèi)增殖的基本判斷方法。二、原理離體動物組織通過溫和的手段(機械和酶消化)形成單個細胞后,在適宜的外界環(huán)境中,包括溫度、酸堿度和氣相環(huán)境,并
2、給予充足合適的營養(yǎng)條件,能生存、生長形成單層細胞,這種原代培養(yǎng)的細胞具有原來體內(nèi)所具備的基本特性,比如肌肉細胞的收縮功能;上皮細胞的分泌功能等。通常把這種從體內(nèi)取出組織細胞開始培養(yǎng)到第一次進行傳代之前的這一段時期稱為原(初)代培養(yǎng)。原代細胞最接近體內(nèi)細胞的特性,因而對外界環(huán)境的變化也最敏感,因此比較適合病毒的增殖,藥物的作用機制等的研究。 三、材料(按2人/組的量發(fā)放)名 稱數(shù) 量備 注911日齡雞胚1只無菌器械1套無菌無毒平皿2只5或10ml吸管4支1或5ml吸管1支青霉素瓶(帶塞)2只Hank s 液250ml1640 RMPI或DMEM500ml雙抗5ml胰蛋白酶1ml小牛血清5ml5.
3、6% NaHCO33ml碘酒和酒精棉球若干細胞培養(yǎng)瓶2只四、操作步驟1、在DMEM和Hanks 液中分別無菌操作以1的量加入雙抗,吸出1015mlHanks 液至無菌平皿中備用; 2、碘酒和酒精棉球分別拭擦雞胚氣室外卵殼;3、取出兩只無菌平皿,并標記和,待用。4、大鑷子輕敲卵殼頂部然后小心去掉氣室外卵殼; 5、消毒鑷子后小心撕破卵膜,兩人互相配合取出雞胚置于盛有Hanks 液的平皿中,小心去頭、內(nèi)臟、爪和粘液及血球,洗滌后置于盛有Hanks 液的平皿中,再充分洗滌;6、取出洗凈的組織塊置于大青霉素瓶中,在火焰附近用無菌眼科剪刀將其剪成約0.51mm3的小塊(約250次),此時體積約0.5ml;
4、用Hank s 液洗滌兩次。7、按照10倍量加入0.25胰蛋白酶,調(diào)節(jié)pH至約7.38.0(肉眼觀為肉紅色)蓋上瓶塞,寫好標記;8、將上述細胞瓶置于37水浴中,開始計時,約1530min,其間緩慢搖勻以充分消化。消化停止的標志是:輕輕晃動后細胞懸起,呈云霧狀,很快聚集成團,表明細胞活力好。9、消化結(jié)束后,取出,稍沉淀,緩慢吸出上清,用Hanks 液小心洗滌23次,可以盡量減少胰蛋白酶的殘留量,然后加入DMEM液約5ml,用小頭吸管充分吹打,使細胞充分分散。吸上清;重復(fù)操作34次,收集細胞上清。10、(1)上述細胞懸液自然沉降,待未消化徹底的組織塊沉入瓶底后,收集上清,并加入足量的小牛血清(終濃
5、度為10),將細胞密度調(diào)到約1106個/ml。(2)經(jīng)四層無菌紗布過濾后收集濾液,并加入足量的小牛血清(終濃度為10),將細胞密度調(diào)到約1106個/ml;11、將上述制備好的細胞懸液平均分配到2只細胞瓶中,5ml/瓶,塞好螺口塞,注意生長面朝下,在非生長面上做好標記,包括細胞名稱,接種培養(yǎng)時間,組別及姓名等。12、細胞統(tǒng)一置于本室指定的CO2孵箱中培養(yǎng)。13、24h后觀察細胞生長情況,如果細胞長成單層,細胞界限清晰,大多數(shù)細胞為梭形并貼壁,布滿細胞瓶的生長面,說明細胞生長狀態(tài)良好。實驗三 濾泡性口炎病毒(VSV)的增殖(純培養(yǎng))一、實驗?zāi)康恼莆詹《驹诩毎麅?nèi)增殖的基本判斷方法。二、實驗原理原代細
6、胞最接近體內(nèi)細胞的特性,因而對外界環(huán)境的變化也最敏感,因此比較適合病毒的增殖,藥物的作用機制等研究。 病毒在細胞內(nèi)增殖的檢測指標有細胞變化、紅細胞吸附、細胞代謝改變、干擾現(xiàn)象、免疫熒光法檢測等。由病毒引起的細胞病變稱細胞病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE),常見的細胞形態(tài)學(xué)變化為細胞變圓、聚集、融合、裂解或脫落等。三、實驗材料(按2人/組的量發(fā)放)名 稱數(shù) 量備 注200TCID50 VSV0.1ml5ml和1ml吸管各1支維持液100ml含3小牛血清的RPMI-1640液或DMEM液四、操作步驟1、上述原代成纖維細胞培養(yǎng)24h后,一旦細胞完全貼壁生長良好后,則輕棄培養(yǎng)上清,
7、換上細胞維持液(含3小牛血清的RPMI-1640),接種200TCID50的VSV0.1ml,在細胞瓶上標記換液時間,接種病毒量。正常對照也按照上述方法換上維持液。2、再繼續(xù)培養(yǎng),每間隔1224h觀察,直至全部細胞出現(xiàn)明顯的病變,顯微鏡觀察細胞脫落,圓縮,則可停止培養(yǎng)。3、收集全班的病毒培養(yǎng)物于100ml無菌鹽水瓶中,寫好標記,置于20冰箱充分冷凍后再置于4冰箱或室溫下解凍,該過程稱為凍融。反復(fù)凍融三次后,細胞膜破壞,釋放出胞內(nèi)病毒。低速離心,棄細胞碎片沉渣,收集上清即為病毒懸液。留樣測定病毒的TCID50。五、實驗結(jié)果1、雞胚原代成纖維細胞的顯微鏡下觀察。2、VSV攻擊雞胚原代成纖維細胞后,
8、細胞病變效應(yīng)(CPE)的觀察。3、病毒收獲的方法。實驗四 Hep-2細胞的傳代培養(yǎng)一、目的掌握細胞傳代培養(yǎng)的方法及其應(yīng)用。二、原理原代培養(yǎng)后由于細胞游出數(shù)量增加,細胞進行增殖,單層培養(yǎng)細胞相互匯合,整個瓶底逐漸被細胞覆蓋。這時需要進行分離培養(yǎng),否則細胞會因生存空間不足或密度過大,營養(yǎng)障礙,影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶的過程稱之為傳代;進行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代。細胞培養(yǎng)傳代根據(jù)不同細胞采取不同的方法。貼壁生長的細胞用消化法傳代;部分貼壁生長的細胞用直接吹打即可傳代;懸浮生長的細胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。三、材料名 稱
9、數(shù) 量備 注傳代人喉癌上皮細胞(Hep-2)1瓶/2人VTP1ml/2人DMEM液100ml/2人PBS1瓶/8人血清5ml/2人5或10ml吸管2支1ml吸管1支細胞培養(yǎng)瓶1只/2人四、操作步驟1、將細胞生長面朝上輕輕倒掉上清,用PBS小心洗滌三次,注意吸管尖頭不要伸到細胞瓶中。2、用上述吸管吸取1ml VTP加入細胞瓶中,鋪滿整個細胞生長面即可;室溫或手握住消化,約35min。當細胞胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后,即可停止消化,盡可能棄盡消化液,繼續(xù)利用殘余的消化液消化,直至細胞大部分易在外力作用下從細胞瓶表面脫落下來為止。3、加入少量DMEM液細胞瓶中,用小頭吸管吹打瓶壁細胞以及脫落細胞充分使
10、細胞均勻,吹打時動作要輕柔不要用力過猛,盡可能不要出現(xiàn)泡沫。吸一滴細胞懸液于Ep管中。4、計數(shù):用吸管吹打細胞懸液,取少許細胞懸液與等量0.04臺盼蘭混勻,在計數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)加該細胞懸液,加樣量不要溢出蓋玻片,也不要過少或帶氣泡。計算細胞密度。用DMEM制備成1106/ml的細胞懸液,并按10的量加入小牛血清。5、將上述細胞懸液分裝5ml到新細胞瓶中,塞好塞子,送培養(yǎng)箱培養(yǎng),24h后觀察。以備實驗五、六、七用。實驗五 VSV TCID50滴定(注:此實驗和實驗五、六同時進行)一、目的掌握病毒TCID50滴定的基本原理和計算方法以及應(yīng)用。二、原理多數(shù)病毒感染體外培養(yǎng)的細胞后,常引起細胞形態(tài)學(xué)
11、改變,如細胞團縮、裂解和細胞腫大等,這種改變稱為病毒致病變效應(yīng)(cytopathic effect,CPE),可以直接通過顯微鏡觀察,亦可通過染色得以識別和判斷。CPE的程度可間接反映病毒的毒力,因此利用這種特征可以用來測定病毒的毒力。即能在細胞培養(yǎng)板孔或試管內(nèi)引起半數(shù)細胞發(fā)生病變所需的病毒量定義為病毒的組織細胞感染指數(shù)(tissue culture infection dose,TCID50)。 測定時,首先在微量細胞板上培養(yǎng)敏感細胞,待細胞貼壁形成單層,棄上清。將待測病毒用維持液做10倍稀釋后加入細胞單層,逐日觀察,直至病毒產(chǎn)生的CPE不再進展為止。具體時間根據(jù)病毒的增殖特點而定,如腸道病
12、毒增殖迅速,一般48h即可;VSV增殖也較快,因此,48h72h也可以觀察、染色、計算。三、 材料與器材名 稱數(shù) 量備 注Hep-2細胞實驗五傳代所得,自備/組水泡性口炎病毒(VSV)自備/組維持液,PBS,VTP自備/組細胞板1塊/組tip頭4盒/組微量移液器自備四、 操作步驟1、制備細胞:方法同實驗五。一瓶細胞消化后加入8ml營養(yǎng)液即可制成所需細胞懸液。密度約為1106/ml。用微量移液器將細胞懸液加入40或96孔板微孔中,每孔100l,37,5%CO2孵育箱培養(yǎng)24h,形成單層,做病毒滴定用。2、50%組織細胞感染量(TCID50)測定(a)稀釋病毒液:取無菌小試管或青霉素瓶9支,各管分
13、別加3%小牛血清的維持液2.7ml,然后向第一管加VSV病毒液0.3ml,反復(fù)吹吸混合三次,從第一管內(nèi)吸液0.3ml加入第二管內(nèi),反復(fù)混合三次,從第二管內(nèi)吸液0.3ml加入第三管內(nèi),反復(fù)混合三次,依此類推將待測的病毒液做連續(xù)10倍稀釋,使病毒稀釋為10-1,10-2,10-310-9。(b)病毒接種:將長好單層細胞的培養(yǎng)板各孔細胞液全部傾棄,用微量移液器把各稀釋度的VSV病毒從低濃度開始依次加入各微孔中,每稀釋度平行加2孔,每孔100l。細胞對照孔不加病毒液,只加維持液。置37,5%CO2孵育箱中孵育。(c)結(jié)果觀察:于孵育后18、24、36、48、72h在倒置顯微鏡下觀察CPE,病毒可引起細
14、胞圓縮、堆聚及脫落現(xiàn)象。“-”表示細胞正常;“+”25%細胞產(chǎn)生病變、圓縮、破碎脫落;“2+”50%細胞產(chǎn)生病變;“3+”75%細胞產(chǎn)生病變;“4+”100%細胞產(chǎn)生病變。(實驗時,觀察24h48h即可染色計算)3、計算TCID50參見下表:表1 VSV在Hep-2細胞上的TCID50結(jié)果記錄病毒稀釋度病變孔數(shù)/接種孔數(shù)累積數(shù)(孔)病變細胞孔有病變無病變比例百分比(%)10-38/810010/1010010-42/8262/82510-50/80140/14010-60/80220/22010-70/80300/30010-80/80380/380按表中,10-3稀釋的病變高于50%;10-
15、4稀釋的病變低于50%;50%病變分布于10-3與10-4之間,計算公式如下: 高于50%病變率-50% 100-50距離比例= = =0.67 高于50%的病變率-低于50%的病變率 100-25 即1個TCID50=10-3.67,查0.67的反對數(shù)為4.68,即病毒做4.68103倍稀釋時取0.1ml接種細胞,即可使50%細胞產(chǎn)生病變.附錄:如何計算200個TCID50?4.38103200=23.4,將病毒作23.4倍稀釋時即得200個TCID50。五、 計算請計算提供的病毒的TCID50。六、寫實驗報告并計算給定的病毒的TCID50。附錄3一、關(guān)于50%終點法的計算(參見病毒學(xué)檢驗(
16、李洪源)人民衛(wèi)生出版社2007)1) Reed-Muench法計算CCID50舉例如下: VSV在Hep-2細胞上的TCID50結(jié)果記錄病毒稀釋度病變孔數(shù)/接種孔數(shù)累積數(shù)(孔)病變細胞孔有病變無病變比例百分比(%)10-34/4909/910010-43/4515/68310-52/4232/54010-60/4070/70由上表可知該病毒的CCID50介于10-4與10-5兩個稀釋度之間,二稀釋度之間的距離比例為: 高于50%感染百分數(shù)-50% 83-50距離比例= lg稀釋倍數(shù)= =-0.767 高于50%的感染百分數(shù)-低于50%的感染百分數(shù) 83-40低稀釋度的對數(shù)(高于50的感染百分數(shù)
17、)lg10-4=-4lgCCID50=高于50的感染百分數(shù)的低稀釋度的對數(shù)距離比例 (-4)(-0.767)4.767-4.8 因此該病毒的CCID50為10-4.8/0.1ml,也就是說,此病毒的10-4.8的濃度(即1:63000)按0.1ml接種一組細胞孔后,可使50%的細胞感染,即有50%病變的可能性。2)Karber法計算二、實驗結(jié)果的觀察(病毒學(xué)檢驗P55)1、觀察結(jié)果 于培養(yǎng)后的不同時間,如18h、24h、36h等,在倒置顯做鏡下觀察細胞病變情況。 a)細胞病變程度表示法 通觀整個“單層區(qū)”,權(quán)衡總的情況,以下列符號表示其病變程度: -表示無細胞病變+表示1%25%的細胞病變+2
18、6%50%的細胞有病變+51%75%的細胞有病變+76%100%的細胞有病變b)記錄結(jié)果 病毒引起細胞病變效應(yīng)的滴度以半數(shù)細胞培養(yǎng)感染量(cell culture infectious dose,CCID50)表示,即凡能使50%(半數(shù))細胞出現(xiàn)病變的最高病毒稀釋度,即為50%感染單位,簡稱CCID50。有時也稱其為半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(50% tissue culture infectious dose,TCID50)。細胞病變效應(yīng)出現(xiàn)的時間,不同病毒不完全一樣,以感染細胞的病變不再發(fā)展,而對照細胞仍然完好為準。實驗六 干擾素活性(效價)的測定(注:此實驗所需的細胞為實驗四時傳代培養(yǎng)所得)一、
19、目的1、掌握微量細胞病變抑制法測定干擾素效價的基本步驟以及結(jié)果分析。2、熟悉常用生物制品生物學(xué)活性測定的實際意義。3、了解影響結(jié)果的常見因素。二、基本原理病毒或其他干擾素誘生劑作用于巨噬細胞、T細胞或成纖維細胞后,由細胞基因自身編碼產(chǎn)生的具有抗病毒、抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫功能的一類小分子糖肽,統(tǒng)稱為干擾素。干擾素發(fā)揮重要的酶的特性而抑制病毒DNA和蛋白質(zhì)的合成,從而抑制病毒在細胞內(nèi)的增殖。因此具有間接的廣譜抗病毒作用。為了進一步確定人工方法制備的干擾素的生物學(xué)活性,需進行體外抗病毒試驗測定,即干擾素效價的測定。干擾素效價一般定義為:凡1ml干擾素標本的最高稀釋度仍能保護半數(shù)細胞(50)免受“攻擊病毒
20、”損害者,該稀釋度的倒數(shù)即為干擾素的效價,即單位/毫升。三、測定方法 測定干擾素效價的方法有多種,最常用的是“細胞病變抑制法”(Method of Cytopathic effect inhibition assay,簡稱CPE法)。此法的主要優(yōu)點是操作簡便,易于掌握,結(jié)果可靠,故已成為目前各實驗室的常規(guī)。亦可用“放射化學(xué)測定法”、“染料攝入測定法”。本次實驗也主要采用前法。下面就此法的發(fā)展做一簡要闡述。1、全量細胞病變抑制測定法優(yōu)點:操作簡單、易于掌握、結(jié)果可靠缺點:大量測定時,耗費細胞量太大,清洗工作量大,判斷結(jié)果不能完全排出主觀因素。2、常規(guī)微量細胞病變抑制測定法此法是在“全量法”基礎(chǔ)上
21、加以改良的一種方法,它的最大優(yōu)點是:需用細胞量少,適于大量干擾素標本檢測。其主要缺點是:判斷結(jié)果不能完全排除主觀因素。具體操作形式有:先使細胞培養(yǎng)2448h形成單層后,再加入不同稀釋度的干擾素孵育24h,棄去,再加入100TCID50的攻擊病毒,繼續(xù)孵育直至病毒對照出現(xiàn)完全病變?yōu)橹?。主要特點是干擾素稀釋標本和細胞同時加,優(yōu)點是細胞對攻擊病毒較敏感,且省時。兩種方法滴定的干擾素效價無明顯差別。3、微量快速檢測法(一步快速法)本法的特點是干擾素(不同稀釋倍數(shù))、細胞(一定濃度)和病毒(一定量)三者同時加入。因為干擾素誘導(dǎo)細胞形成“抗病毒狀態(tài)”要先于病毒的復(fù)制與成熟,即VSV的復(fù)制周期為7小時,而干
22、擾素作用于靶細胞后約1小時即形成抗病毒狀態(tài)。但一步快速法的敏感性隨病毒攻擊劑量的提高而迅速下降。因此常規(guī)微量法比微量快速法穩(wěn)定。四、材料準備1、待測標本 為了除去非干擾素抑制物,待測標本應(yīng)作(1)離心處理;(2)pH處理(此步學(xué)生不需做)??煞盅b為2040l /份/2人。2、測定細胞 應(yīng)根據(jù)“種屬特異性”選擇測定細胞。本實驗室選用生長良好的一日齡或兩日齡人羊膜單層細胞傳代培養(yǎng)物(WISH)或人喉癌上皮細胞(Hep-2),本次實驗選取后者。3、攻擊病毒 選用具有“同步致病作用”的VSV(Vesicular Stomatitis Virus)作為“攻擊病毒”。使用前,應(yīng)先在原代雞胚成纖維細胞培養(yǎng)物
23、(約400萬細胞/毫升)中傳代增殖及滴定病毒的空斑形成單位(PFU)或在人羊膜單層細胞上滴定其TCID50。病毒的攻擊量一般可選100300個TCID50(一般不得小于10個TCID50,不得大于500個TCID50)。4、胰蛋白酶混合消化液VTP,其胰蛋白酶和Versene的最終濃度分別為0.05和0.02。用VTP比單用胰蛋白酶作消化液對細胞的損傷要小些。5、營養(yǎng)培養(yǎng)基 配方是(1)DMEM;(2)10%滅活小牛血清;(3)雙抗。最后用NaHCO3調(diào)pH至7.27.4。6、微量細胞培養(yǎng)板 無菌40孔進口板1塊/組。7、CO2培養(yǎng)裝置 采用CO2孵箱(CO2為5%,空氣為95%)。8、其他器
24、材:5ml吸管2只/組,1ml吸管1只/組,tip頭1盒/桌。 五、操作步驟1、稀釋待檢干擾素(在微量滴定板上直接進行)(1)配制10小牛血清的營養(yǎng)液5ml,除第一列外,在第一、二排的第210孔各加100l營養(yǎng)液;(2)將待檢干擾素進行400倍稀釋后,分別取100L于第一孔和第二孔,將第二孔,充分吹吸3次,吸出100l于第三孔,重復(fù)上述操作,直到第8孔,吹吸后棄去100l。因此依據(jù)倍倍稀釋原則對干擾素進行系列稀釋,各孔的稀釋倍數(shù)如下表所列。管號123456789(細胞對照孔)10(病毒對照)營養(yǎng)液(L)100100100100100100100100100干擾素(L)200上一孔的100上一孔
25、的100上一孔的100上一孔的100上一孔的100上一孔的100上一孔的100,棄去100干擾素稀釋倍數(shù)1:4001:8001:16001:32001:64001:128001:256001:51200細胞每孔均為100l第九孔為細胞對照孔,不加干擾素保護也不加病毒攻擊;第十孔為病毒對照,不加干擾素保護加病毒攻擊。第二排按照同樣方法進行,即每個稀釋度重復(fù)兩孔。每孔含量為100l。2、微量單層細胞培養(yǎng)(1)按常規(guī)方法將預(yù)先培養(yǎng)好的細胞單層用VTP消化下來;(2)用營養(yǎng)培養(yǎng)基將細胞制成40萬個細胞/毫升的懸液;(3)用加樣器向微量細胞培養(yǎng)板每孔中加入100L細胞懸液(加時不斷搖勻瓶中的細胞);(4
26、)置CO2孵箱中培養(yǎng)1824h。3、病毒攻擊觀察到細胞單層良好時,將各孔內(nèi)含干擾的培養(yǎng)液倒掉,于每孔中加入100TCID50的攻擊病毒VSV 100l,該病毒用3維持液稀釋,細胞對照組加入等量的維持液。本組加入24小時引起75100病變的VSV 100l。置37孵育2440小時。4、觀察結(jié)果4.1 可直接倒置顯微鏡觀察。在規(guī)定的時間內(nèi)首先觀察“細胞對照組”和“病毒對照組”,若病毒對照組各孔中的細胞出現(xiàn)75100的明顯病變和死亡,而細胞對照組中的細胞仍完全生長良好,則表明對照系統(tǒng)完全合格,即可作全面觀察。否則棄去重做。每孔中出現(xiàn)的細胞病變(CPE)程度,用表示。一般病毒對照孔,出現(xiàn)+或+,干擾素
27、保護孔CPE不再進展,則可終止反應(yīng),并染色。4.2 結(jié)晶紫染色:將上述反應(yīng)板取出,棄去孔內(nèi)液體于消毒液中,每孔加入1滴染色液,35min后,棄去,洗凈孔內(nèi)殘余液體,控干即可記錄結(jié)果。細胞著色的深淺可以直觀反應(yīng)CPE出現(xiàn)的程度,一般時板孔內(nèi)幾乎無可見的細胞貼壁層,無CPE時則板孔內(nèi)細胞貼壁層完整。六、結(jié)果判斷與計算分析1、效價單位:效價以單位/毫升表示一般判定法:凡1ml干擾素標本的最高稀釋度仍能保護半數(shù)細胞(50)免受“攻擊病毒”損害者,該稀釋度的倒數(shù)即為干擾素的單位/毫升。如某干擾素稀釋到1:8000時仍能保護半數(shù)細胞(50)免受“攻擊病毒”的損害,即出現(xiàn)的稀釋度,則該干擾素的效價即為800
28、0單位/毫升。特殊計算法(通常按照Reed-Muench法計算) 計算保護百分比,見下表A項B項C項D項E項F項G項干擾素稀釋度病變細胞正常細胞平均數(shù)累積比例百分比()管1管2管1管2病變正常病變()正常()正常/(正常病變)1:400(22102)1:800(2 3 102 )1:1600 (2 4 102 )1:3200 (25 102 )1:6400 (2 6 10 2 )1:12800 (2 7 102 )1:25600 (2 8 102 )1:51200 (2 9 102 )0012234400122344443221004432210000122344443221000013581
29、216161285310016 /1612 /128 /95 /83 /81 /9001001008963381100A、B、C項為原始數(shù)據(jù),4表示全部細胞病變;3表示75細胞病變;2表示50細胞病變;1表示25細胞病變。求出干擾素單位從上表中可大略看出,此批干擾素能保護半數(shù)(50)細胞不被“攻擊病毒”損害的最高稀釋度在1:32001:6400之間。因此,可通過下式求出其距離比。 高于50的百分比50 6350距離比 0.52 高于50的百分比低于50的百分比 6338即此批干擾素稀釋到25.52 102 (1:4588)時,能保護半數(shù)細胞免受“攻擊病毒”損害,其結(jié)果可記為5.52Log2+2單位/毫升(5.52Log22 u. ml1)。4、工作單位修正各實驗室所測得的干擾素單位,習慣上一般都稱為該實驗室“工作單位”。為了表明某種干擾素效價的高低,就必須用同型國際干擾素參考制劑加以修正。例如,當我們要修正本實驗室所制備的獸用白細胞干擾素的效價時,就應(yīng)當:(1)查明獸用白細胞干擾素參考制劑的標準單位(R1) (2)并在相同條件下測出獸用白
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